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PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有很明显的条带,共两条,类似于RNA,但从1.5ml的液体培养基中只取了3ul菌液进行菌落PCR,原菌中所带来的RNA应该不多,且PCR105℃的热盖也应将RNA降解掉了.200bp条带为何物,是如何来的?
神水盟1Lr8
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你的目的片段长度为500bp,而你的电泳图谱显示是750你对电泳图谱750bp的片段是认可的,也就是说除去目的片段500bp,还有150bp的引物及其他序列；而你的杂带大小平均恰好是150bp,也就是除去150bp的引物及其他序列,应该不含有其他的DNA序列,因此判断你的150bp的条带就是引物二聚体造成的,如果条带非常亮的话,可以考虑减少引物的加入量.
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可能是引物多聚物吧。。可以适量减少引物的量试试
引模二聚体 做PCR都会有的
也碰到了这种情况，搞得很是纠结你后来是怎么解决的？分享一下，谢谢
扫描下载二维码菌落PCR后电泳有条带，但摇菌后提质粒电泳无条带 - 实验交流 - 生物秀
标题: 菌落PCR后电泳有条带，但摇菌后提质粒电泳无条带
摘要: 菌落PCR后电泳有条带，但摇菌后提质粒电泳无条带 基因和质粒连接后转化，然后进行了菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳有条带。但接菌摇陪后提取质粒电泳，没有条带。
请教各位是什么原因？多谢！！！！……
基因和质粒连接后转化，然后进行了菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳有条带。但接菌摇陪后提取质粒电泳，没有条带。
请教各位是什么原因？多谢！！！！回复:
菌落PCR容易造成假阳性！回复:
摇菌后菌液浓度怎么样？浑浊不？
加了多少体积的菌液提的质粒呢？
能不能说的详细点~回复:
谢谢斑竹！
摇菌后菌液浓度很大，有些混浊，用的DH5a ,感觉菌液正常，没有问题
加了2毫升的菌液提取的质粒。
难道是染菌了？
不过，我摇培了三次，提取了三次，琼脂糖电泳后，两次没有条带，一次有条带但很暗回复:
可能是你的引物在染色体上配对回复:
菌液PCR用的事目的片段引物，还是载体引物，如果是目的片段引物就再正常不过了。是构建载体么？回复:
菌落PCR出现假阳性可能是由于在转化的时候菌落上面就粘有目的片段回复:
是不是继代培养了多次，继代培养多次的话质粒可能会丢失。回复:
可能是染杂菌了，我也遇到了类似情况。当然，菌落PCR假阳性比较高，可能菌体基因组和你的引物匹配度较高
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因为DNA溶度太低,PCR时我同一种DNA同时P了3管,跑电泳,条带位置却不一致.胶回收时,将上述三块胶融于一个管中,跑电泳检测时,以前大约是330bp,跑电泳却到了快600bp,连接载体,提质粒后测序,结果多了600多bp.
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600是多在中间,还是加在一头?其他的序列还一样吗?说具体一些如果是在中间,扩增的是cDNA的话,有可能是mRNA的alternative splicing
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说清楚点撒。
很可能是你P的时候污染了
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