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【求助】为什么沉淀DNA用100%乙醇而洗涤用70%的呢？
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freecell 编辑于
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Ethanol is a widely used to purify and concentrate the DNA from the aqueous solution (in some case isopropanal).Basic principle is that when salt and ethanol are added to the solution, it forces the nucleic acid to precipitate out of solution. Salt (NaCl) Na+ interacts with the negative charge of DNA (Phosphorus) and neutralizes the negative charge nucleic acid and makes it less soluble. Ethanol has a much lower dielectric constant when compared to water, making it easier for Na+ to interact with the negative charge of phosphorus group of DNA and make the nucleic acid less hydrophilic, causing it to drop out of solution. The precipitated DNA can purify by centrifugation. The DNA pellet is washed in ice cold 70% ethanol to remove excess salt and pelleted is then allowed to dry and then dissolve in appropriate buffer or can stored in -80 for long term..
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沉淀DNA可以用很多有机溶剂，乙醇是最常用的。可以用无水乙醇，有的实验用95%的乙醇。洗涤可以用70%乙醇，也有的用80%、75%乙醇。所以你是想问用无水乙醇沉淀DNA和70%乙醇洗涤DNA的原理吧？DNA在细胞中与核蛋白结合，与核蛋白分离后与阴阳离子结合形成水溶性化合物，它与钠、钾、镁形成的盐在有机溶剂中是不溶解的，也不会被有机溶剂变性。有机溶剂使DNA沉淀的原因是降低了溶液的介电系数，由F=Q1*Q2/Kr2知道电荷间库仑力增加（20摄氏度有增加2倍多）。用70%乙醇洗涤DNA是洗涤水溶性的阴阳离子，可能是水对阴阳离子的亲和性比DNA更大。
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沉淀DNA可以用很多有机溶剂，乙醇是最常用的。可以用无水乙醇，有的实验用95%的乙醇。洗涤可以用70%乙醇，也有的用80%、75%乙醇。所以你是想问用无水乙醇沉淀DNA和70%乙醇洗涤DNA的原理吧？DNA在细胞中与核蛋白结合，与核蛋白分离后与阴阳离子结合形成水溶性化合物，它与钠、钾、镁形成的盐在有机溶剂中是不溶解的，也不会被有机溶剂变性。有机溶剂使DNA沉淀的原因是降低了溶液的介电系数，由F=Q1*Q2/Kr2知道电荷间库仑力增加（20摄氏度有增加2倍多）。用70%乙醇洗涤DNA是洗涤水溶性的阴阳离子，可能是水对阴阳离子的亲和性比DNA更大。
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其实洗涤用70%的乙醇是一方面可以沉淀DNA，另一方面是可以出去其中所含的无机盐离子。
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Ethanol is a widely used to purify and concentrate the DNA from the aqueous solution (in some case isopropanal).Basic principle is that when salt and ethanol are added to the solution, it forces the nucleic acid to precipitate out of solution. Salt (NaCl) Na+ interacts with the negative charge of DNA (Phosphorus) and neutralizes the negative charge nucleic acid and makes it less soluble. Ethanol has a much lower dielectric constant when compared to water, making it easier for Na+ to interact with the negative charge of phosphorus group of DNA and make the nucleic acid less hydrophilic, causing it to drop out of solution. The precipitated DNA can purify by centrifugation. The DNA pellet is washed in ice cold 70% ethanol to remove excess salt and pelleted is then allowed to dry and then dissolve in appropriate buffer or can stored in -80 for long term..
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因为无水乙醇加入之后的终浓度你算一下也差不多是70%，我算过，我以前也想过这个问题，呵呵！
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DNA在70%乙醇溶液内的溶解度最低。常识性问题，没那么复杂。
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dkyy970111 编辑于
无水乙醇是等体积加入的啊，加入后就不是无水的了
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太感谢大家了，学到了很多！！
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因为DNA不溶于乙醇，乙醇含量越高DNA沉淀效果越好。其实乙醇的沉淀效果不好，不如异丙醇，所以一般沉淀用0.6倍体积的异丙醇，也可以用2倍体积的无水乙醇，但即使这样效果也不怎么样，所以通常都是要加十分之一的ph5.2的3M醋酸钠（不是NACL），在离子和ph的共同作用下才能更大程度的去沉淀DNA已达到浓缩或分离的目的。而沉淀后会有一些醋酸钠也跟着沉淀下去，而且会影响后期的酶反应，所以要去除70%乙醇中含30%的水，那些沉淀中的盐就溶解在这些水中，所以叫做洗涤。你要用100%的乙醇里边不含水当然就没办法洗掉沉淀中的盐了
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我觉得酒精好。。相对异丙醇，无毒。特别是小体积核酸的沉淀，还是首选酒精。大了就没办法了。。。2倍体积的酒精。。吃不消
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学习学习 谢谢
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用80%的乙醇洗DNA又是什么原理呢？
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&&【讨论】为什么有的反应用95%而不是无水乙醇？
【讨论】为什么有的反应用95%而不是无水乙醇？
一直对这问题比较郁闷，反应体系明明可以加入水，为何不先用无水乙醇然后再加入一点水？ :D
估计写文献的人是加完料后随手抄起个溶剂瓶就溶解原料，结果一看拿错洗瓶了，本来要用无水的结果拿成95%的了，怕大老板知道了收拾人，将错就错写到实验里了。:D
要是用95%的能做成实验，无水的直接做就行了，没必要画蛇添足的加水吧。一般又不是把水当反应物，除非特别注明了。
以前买的时候貌似1L无水的比95的贵个2毛还是4毛钱，实验室投反应就无所谓了，全是用无水的。95的是泡碱缸和偷懒不愿意烘瓶子时涮瓶子用的，老板睁只眼闭只眼没计较。
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查查95%的乙醇怎么稀释到70%?不是用质量分数计算吗?
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楼上说的不太对,一般乙醇的浓度以体积分数表示,95%是体积分数设有100ml95%乙醇溶液,稀释过程中溶质的量不变需兑蒸馏水V=100×0.95÷0.7—100=35.7ml补充：实验室的乙醇是以体积分数记的,一般不用质量分数
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