关注今日：18 | 主题：214107
微信扫一扫
（求助）如何用FITC标记一种糖蛋白
页码直达：
这个帖子发布于13年零91天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我想用荧光物质FITC标记一种糖蛋白。1.有些地方说把FITC用DMSO溶解，有的说是用CE溶解，我不知道何者正确。2.标记后的混合物去除未标记的FITC的方法，文献上说可以用sephadex-G25,那么，如何收集已经特异性结合了的FITC－糖蛋白呢？我们实验室有紫外280nm的蛋白分离收集装置（phamacia),可以用它吗？ 还有一种方法可以用透析除去未结合的FITC，那么透析袋的选择是什么样的呢？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
野原 edited on
丁香园准中级站友
我曾试过FITC标记蛋白1. 用的是DMSO(FITC:DMSO=1mg:1ml)2. 游离FITC试用自制sephadex-G25柱洗脱。（先后能看到明显的两条有色带：FITC小分子，进入胶粒空隙，落在后面，弃；标记的蛋白，大分子，从胶粒外面快速流过，跑在前面，收集）3. 注意全过程要避光4. 需要检测标记蛋白的质量（F/P＝FITC/protein＝2.87×OD&415&/OD&280&-0.35×OD&496&很可惜，花了大量的时间精力，结果标记的质量不高（没法使用）。所以建议：没有大量的时间，没有先人直接指导，就放弃吧。（个人观点，欢迎探讨）
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wanglily0 edited on
基本原理：蛋白质分子的赖氨酸残基的游离ε-氨基可与FITC发生亲核反应，形成硫脲连接而共价结合，形成的偶联物的稳定性很好。该偶联反应在pH 9.8条件下进行。试剂及仪器：待偶联蛋白质，PBS，FITC，叠氮钠，碳酸氢钠缓冲液：25m mol/L Na2CO3 / NaHCO3缓冲液pH9.8 (新鲜配制录) 电磁搅拌器 铝铂操作步骤：用碳酸氢钠缓冲液pH9.8稀释抗体为1-5mg/ml，或抗体对该缓冲液充分透析，以足以使赖氨酸不解离（去其正电荷），但注意保持大部分蛋白质仍未变性； 将透析袋放入100ml 含0 .1 mg/ml FITC的pH9.8碳酸氢钠缓冲液（新配制）的烧杯中，用铝铂包烧杯以避光，4℃搅拌过夜； 上述抗体液对PBS在4℃透析以终止反应。其间至少更换PBS液三次，直致480nm 的吸收为零； 加入0.5g/L 的叠氮钠。此后，结合物在4℃避光保存，或分装后在－2０℃冻存。荧光偶联质量的检测：
用标准免疫荧光染色试验以测定偶联率。
或用F/P值测定对其FITC标记质量进行鉴定：取结合物液0.2ml，加PBS 2.8ml（或两者均改用半量），测定其A490/A280，查 FITC标志曲线得其浓度μg/ml值，按IgG的消光系数（mg/ml约A280 1.2）,可计算其F/P值，即每mg抗体所标记的μgFITC的比值，可以此鉴定及比较各批标记物的质量。实验要点及说明：偶联反应要求在尽可能接近pH9.8的溶液中进行，而且注意在反应过程中要保持此pH水平； 要确定在偶联反应缓冲液中不含游离氨基（Tris,氨及叠氮钠均可与FITC反应，因此会降低蛋白质与FITC的偶联率）； FITC与蛋白质的比值（F/P）,可通过测定495nm与280nm吸光度来鉴定。此比值的范围应为0.3－1.0； FITC唯一的缺限是易被光淬灭，因此复合物必须始终避光保存； 如果FITC－复合物对PBS透析不充分，可能造成高本底，对免疫荧光染色产生干扰。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园准中级站友
dodogougou ，写得好细致啊，不知有没有亲自操作呢？我就是按照这个来的，只是用自制sephadex-G25柱洗脱游离FITC，按到理应该比透析效果更好啊。为什么我得到的标记抗体（FITC-Pr)，F/P不理想呢?
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我没有做过，我只是前段时间因为我用溴化氰交联的方法固定抗体效果不好，查找相关文献的时候看到过这个，正好手头有，就给贴出来了呗:) 操作的要点是要除去要标记的蛋白样品中的游离氨基，游离氨基对多种蛋白质交联方法均有影响，对FITC标记蛋白样品也有影响。我的抗体固定化效果不好就是因为抗体产品中游离氨基的影响:(
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
同样求助：请问FITC标记蛋白之后，游离的FITC去除方法中透析和过G50哪个简单实用，O(∩_∩)O谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
下载作业帮安装包
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
求摩尔消光系数辣根过氧化物酶浓度为0.05mg/mL,测得吸光度为0.03,我用的是10mL的玻璃比色杯,请问如何求其摩尔消光系数,因为后面我测酶活力的时候要用,如果知道酶活力的计算就更好了,我老是算不对,10mL比色杯边长是3厘米 ;我只是想知道具体怎么算的，百度百科上那个Lambert-Beer定律我也查到了，
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
Lambert-Beer定律:当我们把一束单色光（I0）照射溶液时,一部分光（I）通过溶液,而另一部分光被溶液吸收了.这种吸收是与溶液中物质的浓度和液层的厚度成正比,这就是朗勃特—比尔定律.用数学式表式为：A=ECL=-log(I/I0) 其中,A为吸光度,E为消光系数,C为溶液浓度,L为液层的厚度.溶液的浓度若用mol/L表示,则消光系数用ε来表示,称为摩尔消光系数:A=εCL 从而,摩尔消光系数ε=A/CL.摩尔消光系数的大小反映电子跃迁几率的高低.
为您推荐：
其他类似问题
Lambert-Beer定律:当我们把一束单色光（I0）照射溶液时，一部分光（I）通过溶液，而另一部分光被溶液吸收了。这种吸收是与溶液中物质的浓度和液层的厚度成正比，这就是朗勃特—比尔定律。用数学式表式为：
A=ECL=-log(I/I0)
其中，A为吸光度，E为消光系数，C为溶液浓度，L为液层的厚度。
溶液的浓度若用mol/L表示,则消光系数用ε来表示,称为摩...
辣根过氧化物酶浓度为0.05mg/mL，测得吸光度为0.03，我用的是10mL的玻璃比色杯，请问如何求其摩尔消光系数，因为后面我测酶活力的时候要用，如果知道酶活力的计算就更好了，我老是算不对，多谢回答！10mL比色杯边长是3厘米
摩尔庄园？？
什么意思？
????什么？？是摩尔的吗？我没见过。
扫描下载二维码阻断lgG对FcRn的结合的肽的制作方法
专利名称阻断lgG对FcRn的结合的肽的制作方法
技术领域一般而言，本发明涉及免疫调控剂领域。更具体的说，本发明涉及肽， 其能与Fc新生儿受体(FcRn)结合并且抑制FcRn对免疫球蛋白G (IgG) Fc部分 的结合，由此调控血清IgG水平。本发明进一步涉及FcRn活性的肽调控剂、 含有所述肽的药物、及通过施用所述药物来为受试者治疗疾病和病症的方 法，所述的肽调控剂能阻止FcRn在涉及维持血清中IgG水平的细胞机制中发 挥功能，而所述的疾病和病症可通过降低血清IgG水平来緩解。
背景技术血清中最丰富的抗体同种型是IgG，其在介导针对病原体的保护中以及 在介导促进免疫系统成分募集到组织、粘膜和皮肤表面的变应性或炎性应答 中具有关4定作用。Junghans, 7mww"o/ogz.c Ae"an:/z 16(1):29 (1997).此外，IgG 也是多种自身免疫性疾病的关键成分。
在正常条件下，IgG在血清中的半衰期相对于其它血浆蛋白质的血清半 衰期而言是较长的。例如，IgG的血清半衰期在小鼠中为5到7天，而在人中 为22-23天。Roopenian et al.， 《/ /w画"o/ogy 170:》Junghans and Anderson,尸rac. A^/.爿cad "514 93:). IgG的这种长半衰期部分 是由于其对Fc受体即FcRn的结合。FcRn结合至IgG的恒定区，即所知的Fc。 虽然FcRn最初被表征为母体IgG的新生儿转运受体，j旦它在成人中还发挥保 护IgG免受降解的功能。FcRn结合至被胞饮的IgG来保护它免受降低性溶酶体 的作用，然后使它再循环回到细胞外区室。Junghans and Anderson,尸rac. A^/. Jcad园93:); Roopenian et al.,
/ /麵画/ow 170:).如果IgG的浓度达到超出可用FcRn的水平，那么未结合的IgG将不能 受到保护而免于降解性机制，并因此具有较短的血清半衰期。Brambdl et al., Atowe 2(B:l352 (l964).此外，虽然FcRn表达在细胞表面上，但是据信许多 FcRn在细胞内并且与内质嚢泡膜相联，而且IgG被胞吞入细胞后，在胞内发 生IgG与FcRn之间的相互作用。
在结构上，FcRn作为异源二聚体存在，由一条称为(3链的轻链和一条称 为a链的非共价结合的重链构成。FcRn轻链作为Pr微球蛋白CP2m)而更为人 知，它也是主要组织相容性复合体I(MHCI)的成分。FcRn的a链为46kD的蛋 白质，其构成有分成三个亚结构域ap a2和a3的胞外结构域；跨膜区；和 相对短的胞质尾。Burmeister et al., A^w 372:336 (1994).
FnRn是在新生大鼠肠中首次鉴定的，在那里它发挥介导从母乳中吸收 IgG抗体并促进其转运至循环系统的功能。Leach et al.，
/ /wwwwo/ogy 157:). /人人胎盘中也已分离出FcRn，在那里它介导将母体IgG吸收 并转运至胎儿循环。在成人中，FcRn在上皮组织中表达(美国专利No. 6,030,613和6,086,875),诸如但不限于肺(Israel et al.， /www"o/ogy 92:69 (1997))、肠和肾近管上皮(Kobayashi et al.，為, /尸—o/. (2002); 7 醒/ 尸/7j^W. 282:F358 (2002))、以及鼻、阴道和胆系表面。另夕卜，FcRn在内皮细 胞上的普遍表达暗示了其在IgG稳态中的重要性。Ward et al.， /wter"加'o加/ /画画/ogy 15(2): 187 (2002); Ghetie et al"
/ /mm歸/ogv 26:690 (1996).
通常，FcRn通过结合至IgG的Fc部分来拮抗IgG的分解代谢，由此在IgG 稳态中发挥功能。 一旦被胞吞，IgG被捕获在胞内液泡中，开始与酸性初级 内体融合。晶体学研究暗示了FcRn-IgG复合体的化学计量构成为二分子FcRn 对一分子IgG (Burmeister et al.， Atowe 372:336 (1994)),而且^人为这两种分子 的结合发生在IgG中靠近CH2与CH3结构域界面的Fc部分上(Burmeister et al.， Atowe 372:379 (1994))。内体融合事件代表了溶酶体降解途径的一个阶段， 其将包含在内体中的复杂生物分子降解或分解成为组成性成分。初级内体的 低pH环境促进FcRn对IgG的结合，以及任何被IgG所结合的抗原的释放。因 此，抗原被降解，而FcRn-IgG复合体避免降解并最终再循环至细胞表面，在 那里细胞外环境的生理pH促进从FcRn释放IgG。
为了研究FcRn对IgG稳态的贡献，已改造小鼠以便"敲除"至少部分编码 (32m和FcRn重链的基因，使得这些蛋白质不表达。WO 02/43658; Junghans andAnderson,尸rac. A^/.爿cad 5W. 93:).在这两种敲除小鼠品系 中，IgG在血清中的半衰期和浓度均急剧降低，暗示了涉及IgG稳态的FcRn 依赖性机制。
抑制IgG结合至FcRn通过阻止IgG再循环而降低了 IgG血清半衰期。因 此，阻断或拮抗IgG对FcRn的结合的药剂可以用于调节、治疗或预防牵涉免 疫反应的病症的方法，诸如例如以存在不当表达的IgG抗体为特征的自身免 疫性和炎性疾病和病症。阻断IgGFc结合至FcRn的方法的例子包括生成FcRn 的阻断性抗体。实际上，使用FcRn重链敲除小鼠品系已经生成了能阻断FcRn 与IgG结合的抗体(WO 02/43658)。最近，已经鉴定了能结合至FcRn复合体的 肽。Kolonin et al.，尸rac.胸/. ^cW, 5W. "&4 99(20): 02);美国专 利No. 6,212,022.然而，现在仍需要别的药剂来调节、治疗或预防以免疫反 应为特征的疾患、疾病和病症。
因而，本发明提供了肽，其能特异性结合至FcRn并且抑制IgGFc对FcRn 的结合，由此通过阻止FcRn在其保护IgG免受溶酶体降解的作用中发挥功能 来阻止IgG再循环。在例示性的实施方案中，所述肽结合至FcRn并且抑制Fc 的IgGl、 IgG2、 IgG3或IgG4亚类结合至FcRn。
在一些实施方案中，本发明的肽包含序列
-Gly-X6-X7-X8-X9-X i o-X 11 -
-乂6选自带正电荷的氨基酸、芳香族氨基酸、带正电荷的芳香族氨基酸和它
们的类似物；
-乂7选自苯丙氨酸和苯丙氨酸类似物；
-X8和X9各自独立地选自甘氨酸、肌氨酸、天冬氨酸、D-氨基酸、a-氨基异 丁酸和它们的类似物，或者Xs在与X9—起时形成二肽模拟物； -XK)选自氨基酸和它们的类似物，或者Xn)在与X9—起时形成二肽模拟物； -Xn选自酪氨酸和酪氨酸类似物。
或者，本发明的肽可以包含序列
&formula&formula see original document page 14&/formula&
其中-R,具有通式Xi -X2-X3-X4-其中
-X!选自氢、酰基和氨基酸保护基团；
-乂2缺失或选自氨基酸、长度为2-15个氨基酸的肽和它们的类似物； -乂3缺失或者是能与乂1()、 Xu或Xu形成桥(bridge)的氨基酸或它们的类似 物，其中所述桥选自氨基末端到羧基末端的桥、侧链到骨架的桥、和侧 链到侧链的桥；并且
-X4缺失或选自氨基酸、长度为2-15个氨基酸的肽和它们的类似物； -X6、 -X7、 -X8、 -X9、 -Xk)和-X"同上文定叉，并且 -112具有通式-乂12-乂130(14-乂15
-X,2缺失或者是氨基酸或它们的类似物； -Xn缺失或者是氨基酸或它们的类似物；
-Xw缺失或选自氨基酸、长度为2-15个氨基酸的肽和它们的类似物；并 且
-Xu是氨基基团或羧基保护基团。
典型地，本发明的肽的长度为至少7个，多达50个氨基酸。本发明的肽 可以作为多聚体存在，诸如例如二聚体、三聚体或四聚体。在一些实施方案 中，本发明的肽可以对胞饮作用更敏感，使得该肽更迅速结合，并因此被肾 更少的排泄。本发明进一步涉及药用组合物，其包含本发明的一种或多种肽。
本发明的肽可以包含
a) 选自下组的氨基酸序列
QRFCTGHFGGLYPCNGP (SEQ ID NO: 1), GGGCVTGHFGGIYCNYQ (SEQ ID NO:2)， KIICSPGHFGGMYCQGK (SEQ ID NO:3)， PSYC正GHIDGIYCFNA (SEQ ID NO:4)，和 NSFCRGRPGHFGGCYLF (SEQ ID NO:5);
b) 与SEQ ID NO: 1、 SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中的一个或多个基本上相同的氨基酸序列；
c) 与SEQIDNO:l、 SEQ ID NO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中的一个或多个至少80%相同的氨基酸序列；d) 通过一个、两个、三个、四个或五个删除、替代或添加突变来纟务饰的SEQ IDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQIDN0:3、 SEQ IDNO:4或SEQ IDN0:5;
e) 通过至少一个氨基酸的替代来修饰的SEQIDNO:l、 SEQ ID NO:2、 SEQ IDNO:3、 SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，其中将所述至少一个氨基酸用天然 存在的氨基酸替代；
f) 通过至少一个氨基酸的替代来修饰的SEQ IDNO:l 、 SEQ ID NO:2、 SEQ ID NO:3、 SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，其中将所述至少一个氨基酸用D-氨基 酸和它们的类似物替代；
g) 通过至少一个氨基酸的替代来修饰的SEQIDNO:l、 SEQ ID NO:2、 SEQ IDNO:3、 SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，其中将所述至少一个氨基酸用N-曱 基化氨基酸替代；
h) 通过至少一个氨基酸的替代来修饰的SEQ ID NO:l 、 SEQ ID NO:2、 SEQ IDNO:3、 SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，其中将所述至少一个氨基酸用非天 然存在的氨基酸替代；和
i) 通过至少一个氨基酸的替代来修饰的SEQ ID NO:l、 SEQ ID NO:2、 SEQ ID NO:3、 SEQIDNO:4或SEQIDNO:5，其中将所述至少一个氨基酸用氨基酸 模拟物替代。
本发明进一步涉及调节受试者血清中的IgG水平的方法，包括对受试者 施用治疗有效量的组合物，该组合物包含本发明的一种或多种肽，该肽能够 结合至FcRn并且阻止FcRn结合至IgG分子的Fc部分。在某些实施方案中，本 发明的方法用于降低受试者血清中的可溶性IgG的半衰期。施用本发明的组 合物的结果是与在施用所述肽之前的受试者血清中的可溶性IgG的半衰期 相比，受试者血清中的可溶性IgG的半衰期降低。
本发明进一步提供了抑制人IgG的Fc部分结合至FcRn的方法，以实现供 FcRn结合的IgG Fc部分的血清浓度与治疗前的IgG血清浓度相比降低。降低 IgG血清浓度的方法包括对受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包 含本发明的一种或多种肽，该肽能够结合至FcRn并且阻止FcRn结合至IgG分 子的Fc部分。在一个实施方案中，人lgG血清浓度的降低为至少5。/。，诸如至 少15%的降低，或者人IgG血清浓度至少25。/。的降低。
本发明的 一个实施方案提供了治疗患有至少 一种自身免疫性疾病的受 试者的方法，包括对受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包含本发明的一种或多种肽，该肽能够结合至FcRn并且阻止FcRn结合至IgG分子的Fc部 分。本发明的 一个备选实施方案提供了治疗患有至少一种炎性病症的受试者 的方法，通过对受试者施用治疗有效量的组合物，该组合物包含本发明的一 种或多种肽，该肽能够结合至FcRn并且阻止FcRn结合至IgG分子的Fc部分。 在其它的实施方案中，本发明的方法可以用于预防、治疗或调节针对治疗性 蛋白质或基因治疗载体的免疫应答。
本发明的别的实施方案、目的和优点在接下来的说明书中部分地列出， 并且部分根据说明书将是清楚的，或者可以通过本发明的实施来获知。通过 在所附权利要求中具体指出的要素和组合，可以认识本发明的这些实施方 案、目的和优点。
应当理解，对于所要求的发明，上文的一般性描述和下文的详细都仅仅 是例示性的和解释性的，并非限制性的。
附图筒要说明
图l显示了人全长FcRn和人卩-2微球蛋白(P2m)的读码框(ORF)的cDNA序列。
图2显示了N-末端醛肽单体(SEQ ID NO:319)的合成概要。
图3显示了通过还原性烷基化来合成肽二聚体的概要。肽No.270的合成 示作说明性的实例。
图4显示了通过使用含有二硫醇接头的肽和溴乙酰化的肽来合成肽二聚 体的概要。肽No.lOO的合成示作说明性的实例。放置在肽序列上方的水平方 向的括号指示桥的存在(SEQ ID NO:320)。
图5显示了使用含有硫醇接头的肽和溴乙酰化的肽来合成肽二聚体。肽 No.l22的合成示作说明性的实例。放置在肽序列上方的水平方向的括号指示 桥的存在(SEQ ID NO:320)。
图6显示了使用含有二元酸的接头来合成肽二聚体。肽No.283的合成示 作说明性的实例。放置在肽序列下方的水平方向的括号指示桥的存在(SEQ IDNO:321)。
图7显示了使用含有胺的接头来合成肽二聚体。肽No.280的合成示作说 明性的实例。放置在肽序列下方的水平方向的括号指示桥的存在(SEQ ID NO:321)。图8显示了使用肽醛和蛋白质CysFc来合成肽-Fc融合物。肽No.252-Fc的 合成示作说明性的实例。放置在肽序列下方的水平方向的括号指示桥的存 在。
图9显示了TG32B小鼠中的人IgG分解代谢的动力学(改造小鼠来表iiA FcRn和人P2m,而不是鼠FcRn或p2m )。
图IO显示了在静脉内注射肽No.270后，猕猴中的生物素化人IgG的分解 代谢动力学加速了。
图ll显示了在静脉内注射肽No.270后，猕猴中的内源性IgG的血清水平。
图12是图11中示出的结果的代表，其中已使内源性猕猴IgG水平相对于 To水平正常化。
图13显示了静脉内注射肽No.270后，猕猴中的内源血清清蛋白的水平。 图14显示了静脉内注射肽No.270后，猕猴中的内源IgM的水平。 图15显示了静脉内注射肽No.231、肽No.274和肽No.252-Fc后，TG32B
小鼠中的人IgG分解代谢的动力学。
图16显示了静脉内注射肽No.270后，TG32B小鼠中的人IgG分解代谢的
图17显示了静脉内注射肽No.283后，TG32B小鼠中的人IgG分解代谢的 动力学。
图18显示了肽No.289的分子量，通过在4-20。/。的Tris-Gly凝胶上以 SDS-PAGE分析纯化的肽No.289测得。第一道含有分子量标志物。第二道含 有非偶联的PEG30kDa起始材料。第三道含有粗品反应混合物。第四道含有纯 化的肽No.289。
图19显示了在静脉内注射肽No.289后，TG32B小鼠中的人IgG分解代谢 的动力学。
图20显示了在静脉内注射5mg/kg肽No.283后，猕猴中的生物素化人IgG
分解代谢的动力学。
图21显示了在静脉内注射1 mg/kg肽No.283后，猕猴中的生物素化人IgG
分解代谢的动力学。
图22显示了肽No.283 ( 5mg/kg)对猕猴中的IgG浓度的影响。 图23显示了肽No.283 (lmg/kg)对猕猴中的IgG浓度的影响。 图24显示了肽No.283 ( 5mg/kg, 3x/wk, iv )对猕猴中的清蛋白浓度的实施方案的描述
"亲和力"指两个生物学活性分子之间结合性相互作用的特征，其指示结 合性相互作用的强度。亲和力的测量报道为解离常数(KD)，其是在规定的条 件下，在含有生物学活性分子的溶液中生物学活性分子开始不再结合(解离)
至它的结合配偶体的浓度， 一般报道为nM、 pM或fM。亲和力强度与KD值成 反比。
这里使用的术语"氨基酸"指含有羧S1&团和氨基基团的化合物。例如， 氨基酸可以具有结构通式H2N-[C(R)(R，)]n-C(0)OH,其中n是大于或等于l的 整凄t，并且R和R，独立地选自氢和氨基酸侧链，并且其中R和R，可以在一起 形成碳环或杂环。例如，当n等于l时，通式H2N-[C(R)(R，)]-C(0)OH的氨基酸 是a氨基酸，而当n等于2时，通式H2N-C(R,.)(Rr)-C(R2)(R2，)-C(0)OH的氨基 酸是P氨基酸，其中R,、 R，'、 R2和R2，各自独立地选自氨基酸侧链，并且其中 R和R，或者R2和R2，可以在一起形成碳环或杂环。这里使用的术语"氨基酸残 基"指作为肽或蛋白质的一部分的氨基酸，并且具有通式 -N(HHC(R)(R，)]n-C(0)-。这里使用的术语"氨基酸侧链"指来自天然存在或合 成的氨基酸的任何侧链。例如，曱基可以称为丙氨酸侧链，而2-氨基-l-乙基 可以称为2,4-二氨基丁酸的侧链。
氨基酸可以在任何手性原子处具有R或S手性。如果a氨基碳为手性，那 么使用费希尔规则(Fischer convention)来指定a氨基酸的a氨基碳的手性，为 L-或者为D-。 "D-氨基酸"是在a碳处有D构型的氨基酸。在没有指出明确的构 型时，本领域技术人员将氨基酸理解为L-氨基酸。这里描述的氨基酸也可以 是外消旋、非外消旋和非对映的混合物形式。
例示性的氨基酸可以选自二十种编码氨基酸和它们的类似物，也可以选 自例如其它a-氨基酸、(3-氨基酸、？氨基酸、5-氨基酸和co-氨基酸。肽领域公 知非编码氛基酸，诸如那些在M. Bodanszky, Pn'"c^ /es 。/尸e; "fife 5y^/ze^， 1st and 2nd revised ed., Springer隱Verlag， New York, N.Y.， (1984) and (1993)及 Stewart and Young, 5b/Z(i尸/zoseS&7^/2as7\y， 2nd ed.， Pierce Chemical Co.， Rockford， III., (1984)中描述的。编码和非编码氨基酸和氨基酸类似物可以在商业上购自例^口Novabiochem、 Bachem、 Sigma Chemical Co.、 Advanced C或使用本领域已知方法合成。
氨基酸可以选自例如丙氨酸、p-丙氨酸、a-氨基己二酸、2-氨基丁酸、 4-氨基丁酸、1-氨基环戊烷羧酸、6-氨基己酸、2-氨基庚二酸、7-氨基庚酸、 2-氨基异丁酸、氨曱基吡咯羧酸、8-氨基-3，6-二氧-辛酸、氨基哌啶羧酸、3-氨基-丙酸、氨基丝氨酸、氨基四氬吡喃-4-羧酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬 氨酸、氮杂环丁烷(azetidine)羧酸、苯并瘗唑基丙氨酸、丁基甘氨酸、肉毒碱、 4-氯苯基丙氨酸、瓜氨酸、环己基丙氨酸、环己基抑制素(cyclohexylstatine)、 半胱氨酸、2，4-二氨基丁酸、2,3-二氨基丙酸、二羟基苯丙氨酸、二曱基噻唑 烷羧酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、高丝氨酸、羟脯氨酸、异亮 氨酸、异哌啶酸(isonipecotic acid)、亮氨酸、赖氨酸、曱醇基脯氨酸 (methanoproline)、曱硫氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、p-氨基苯曱酸、 青霉胺、苯丙氨酸、苯甘氨酸、哌咬基丙氨酸、哌咬基甘氨酸、脯氨酸、吡 咯烷基丙氨酸、肌氨酸、硒代半胱氨酸、丝氨酸、抑制素(statine)、四氢吡喃 甘氨酸、噻吩基丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、别异亮氨酸、 别苏氨酸、2,6-二氨基-4-己酸、2,6-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、 dicarboxidine、高精氨酸、高瓜氨酸、高半胱氨酸、高胱氨酸、高苯丙氨酸、 高脯氨酸和4-肼基苯曱酸。
通常将氨基酸以侧链性质分成四组酸性的、碱性的、亲水性的(极性 的)和疏水性的(非极性的)。这里描述的氨基酸可以通过它们的全名或相 应的单字母或三字母标准代码来标识。使用小写单字母代码来表明D-手性。
"氨基酸类似物"指氨基酸或氨基酸的小分子模拟物，其与给定氨基酸分 享共同的化学、电荷、空间(steric)或其它性质。例如，丙氨酸的类似物包括 例如P-丙氨酸、乙基甘氨酸、a-氨基异丁酸和D-丙氨酸；半胱氨酸的类似物 包括例如高半胱氨酸、D-半胱氨酸和青霉胺；苯丙氨酸的类似物包括例如3-氟苯丙氨酸、4-曱基苯丙氨酸、苯甘氨酸、1-萘基丙氨酸、和3，3-二苯基丙氨 酸、4-氨基苯丙氨酸、五氟苯丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、 4-硝基苯丙氨酸、2-吡咯烷基苯丙氨酸、3-哌咬基丙氨酸、4-哌咬基丙氨酸； 而组氨酸的类似物包括例如l-曱基组氨酸、2,4-二氨基丁酸、遂唑基丙氨酸、 2,3-二氨基丙酸、脒基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-吡咬基 丙氨酸、噻吩基丙氨酸、鸟氨酸、4-脒基苯丙氨酸和4-氨基苯丙氨酸。这里使用的"氨基保护基团"指可用于在化学变化发生在分子中的其它 位置时防止分子上的氨基经历化学反应的任何取代基。氨基保护基团可以在 适当的化学条件下除去。本领域技术人员已知许多氨基保护基团，并且氨基
保护基团的实例、它们的添加方法、以及它们的除去方法可参见T. W.Green, GVow/w z'" (9;-gaw'c S"f/2e5^， John Wiley and Sons, New York, 1991; Chapter 7, M. Bodanszky， /V/wci^/es o/Pe/^/fife Sywf/zas7、， 1st and 2nd revised ed" Springer画Verlag, New York, N.Y. (1984) and (1993)及Stewart and Young， So/W 尸/zose^"^z&s7、 2nd ed.， Pierce Chemical Co., Rockford, III. (1984)， 这 里引用它们的公开内容作为参考。术语"受保护性的(单取代的)氨基"指在 (单取代的)氨基氮原子上存在有氨基保护基团。另外，术语"受保护的氨 曱酰基"指在氨曱酰基氮原子上存在有氨基保护基团。此类氨基保护基团的 实例包括曱酰基("For")、三苯曱基、苯二酰亚氨基、三氯乙酰基、氯乙酰基、 溴乙酰基和碘乙酰基、乌拉坦(urethane)型封端基团，诸如叔丁氧羰基("Boc，，)、 2-(4-联苯基)丙基-2-氧羰基("Bpoc")、 2-苯丙基-2-氧羰基("Poc")、 2-(4-联苯基)
异丙氧基羰基、U-二苯基乙基-l-氧羰基、l，l-二苯基丙基-l-氧羰基、2-(3，5-二曱氧苯基)丙基-2-氧羰基("Ddz")、 2-(对曱苯酰基)丙基-2-氧羰基、环戊烷 基氧羰基(cyclopentanyloxycarbonyl)、 1-曱基环戊烷基氧羰基、环己烷基氧羰 基、1-甲基环己烷基氧羰基、2-曱基环己烷基氧羰基、2-(4-曱苯酰基磺酰基)-乙氧羰基、2-(甲基磺酰基)乙氧羰基、2-(三苯基膦基)-乙氧羰基、9-芴基曱氧 羰基("Fmoc")、 2-(三曱基曱硅烷基)乙氧羰基、烯丙氧羰基、1-(三曱基曱硅 烷基曱基)丙-1-烯基氧羰基、5-苯并异草酰基曱氧羰基 (5-benzisoxalylmethoxycarbonyl)、 4-乙卧緣千基氧羰基、2，2，2，-三氯乙氧羰基、
2- 乙炔基-丙氧羰基、环丙基曱氧羰基、异冰片基氧羰基、1-哌啶基氧羰基、 苄基氧羰基("Cbz，,)、 4-苯基苄基氧羰基、2-曱基苄基氧羰基、a-2，4，5-四甲基 千基氧羰基("Tmz")、 4-曱氧千基氧羰基、4-氟千基氧羰基、4-氯千基氧羰基、
3- 氯千基氧羰基、2-氯千基氧羰基、2,4-二氯卡基氧羰基、4-溴千基氧羰基、 3-溴苄基氧羰基、4-硝基苄基氧羰基、4-氰苄基氧羰基、4-(癸氧基)苄基氧羰 基等等；苯曱酰甲基磺酰基、二噻琥珀酰基(dithiasuccinoyl，"Dts")、 2-(硝基) 苯亚磺酰基("Nps")、联苯基-膦氧化物基团及类似的氨基保护基团。例如， 氨基保护基团可以选自Boc、 Cbz和Fmoc。只要衍生化的氨基对后续反应条 件稳定并且可以在合适的点除去且不破坏化合物的其余部分，就可以采用一种以上的氨基保护基团。
这里使用的术语"芳香族"指单个的、两个的或其它多个的碳环、芳香环 系统。芳香族基团可以任选融合至选自芳香族化合物、环烷基、杂环基的一 个或多个环。芳香族化合物可以具有5-14个环成员，诸如例如5-10个环成员。 一个或多个氢原子还可以被取代基来取代，所述取代基选自酰基、酰氨基、 酰氧基、烯基、烷氧基、烷基、炔基、氨基、芳香基、芳氧基、叠氮基、氨
曱酰基、烷氧曱酰基(carboalkoxy)、羧基、羧基酰胺基(carboxyamido)、羧基 氨基(carboxyamino)、氰基、环烷基、二取代的氨基、曱酸基、胍基、卣、 芳杂基、杂环基、羟基、亚氨基氨基、单取代的氨基、硝基、氧代、膦氨基、 亚磺酰基、磺氨基、磺酰基、硫代、硫代酰氨基、硫脲基和脲基。芳香基的 非限制性实例包括苯基、萘基、p引咮基、联苯基和蒽基。
这里使用的"芳香族氨基酸，，指具有包含芳香环结构的侧链的氨基酸。芳 香族氨基酸包括例如组氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、1-萘丙氨酸和4-吡啶基丙氨酸。
"羧基保护基团"指羧酸基团的酯衍生物之一，其常用于在对化合物上的 其它官能基进行反应时封闭或保护羧酸基团。此类羧酸保护基团的实例包括 叔丁基、4_硝基苄基、4-曱氧千基、3，4-二曱氧节基、2,4-二甲氧卡基、2,4,6-三曱氧千基、2,4,6-三曱基卡基、五曱基千基、3,4-亚曱基二氧千基、二苯曱 基、4,4，-二曱氧三苯曱基、4,4，,4"-三曱氧三苯曱基、2-苯基丙基、三曱基曱 硅烷基、叔丁基二甲基曱硅烷基、苯酰基、2，2,2-三氯乙基、卩-(三曱基曱硅 烷基)乙基、P-(二(正丁基)曱基硅曱烷基)乙基、对曱苯磺酰基乙基、4-硝基 千基磺酰基乙基、烯丙基、肉桂基、l-(三曱基曱硅烷基甲基)-丙烯基及类似 的模块(moiety)。所采用的羧基保护基团的种类不是关键，只要衍生化的羧 酸对后续反应条件稳定并且可以在合适的点除去且不破坏分子其余部分。这 些基团的进一 步的实例可参见E. Haslam， iVotec"ve /" Ogam'c
C7 函勿，J. G. W. McOmie， Ed.， Plenum Press, New York, N. Y. (1973)， Chapter 5及T. W. Greene,尸rafec"Ve /" Ogam'c
Sywf/ze^, 2nd ed., John
Wiley and Sons, New York, N.Y. (1991)， Chapter 5。相关术语是"受保护的羧 基"，其指用一种或多种上述羧基保护基团取代的羧基。
"结合"和"被结合的"指多肽与另 一生物学活性分子之间的非共价相互作 用，其依赖于这两个分子的空间和化学互补性。多肽的空间和化学互补性由具体的氨基酸序列决定。
"生物学活性分子"指在生物学环境中(例如在生物体、细胞或它们的体
外模型中)，能够通过执行功能或作用，或者刺激或响应功能、作用或反应 来治疗疾病或疾患的肽、核酸和/或小分子，诸如有机或无机的小分子以及它 们的片段。
"桥，，指两个非相邻氨基酸、氨基酸类似物或肽中的其它化学模块之间 的共价键。桥可以是例如骨架到骨架、侧链到骨架、或侧链到侧链的桥。桥 可以通过导致新的酰胺、酯、醚、硫醚、烯或者二硫键形成的环化反应来制 名7骨架到骨架的桥例如由在N-末端和C-末端形成内酰胺所致。 "环肽"指具有桥连两个非相邻氨基酸的分子内键的肽。
这里使用的肽"二聚体"指包含第 一和第二肽链的分子，所述第 一和第二 肽链可以相同或不同。二聚体可以进一步包含至少一个任选的接头，两个肽 共价结合至该接头。
"二肽模拟物"与二肽基本上相似(例如基本上等排、或具有基本上相 似的位置或取向)，诸如例如甘氨酰甘氨酸。只要识别出上文列出的结构限 定，二肽模拟物就可以包含连接的分子的任何组合。二肽模拟物可以具有一
个或多个肽键，其任选通过本领域公知的方法被选自下组的键取代 -CH2NH-， -CH2S-， -CH2-CH2-， -CH=CH-(顺式和反式)、-COCH2-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。技术人员将认识到，二肽模拟物还包括例如|3-转角模拟物。参 见例如R. M. Friedinger，
/ Med O^w. 46: (2003)及S. Hanessian， r咖Wraw 53: (1997)。 二肽模拟物的非限制性实例包括&formula&formula see original document page 24&/formula&
(D，L-Friedinger氏内酰胺);
(L,L-Friedinger氏内酰胺);
-(38)-3-氨基-2-氧-1-哌啶-乙酸和(311)-3-氨基-2-氧-1-哌啶-乙酸； -(38)-3-氨基-2-氧-1-氮杂萆^26^1^)乙酸和(311)-3-氨基-2-氧-1-氮杂革乙酸； -(3S)-3-氨基-2-氧-l-吡咯烷乙酸和(3R)-3-氨基-2-氧-l-吡咯烷乙酸； -(311)-3-氨基-1-羧曱基-戊内酰胺；及 -3-氨基-1^-1-羧曱基-2，3，4,5-四氢-111-[1]-苯并氮杂萆-2-酮。
术语"二硫桥，，指2个氨基酸(诸如例如半胱氨酸、青霉胺和高半胱氨酸) 的蔬基(例如硫醇基或巯基)之间在氧化之后形成的共价键。二硫桥可以桥 连包含在同一线肽中的两个氨基酸，导致线肽的环化。二石克桥也可以在两个 肽之间形成，由此产生肽二聚体。
"结构域"指具有一些区别性物理特征或作用的、 一条或多条肽的区域， 例如由肽链的一个区段构成的独立折叠结构。结构域可以结合至另一个相同 或不同的结构域。结构域可以包含具有肽的区别性物理特征的序列，或者它 可以包含具有物理特征的片段，该片段保留了它的结合特性(即它可以结合 至第二结构域)。
"有效剂量"、"有效量"、"治疗有效量，，等等指药剂足以提供期望的生理、 药理和/或认知变化的量，其可以随着患者、疾病和治疗方法而变化。所述量可以是用于治疗据信患有特定病症的受试者的剂量，在这种情况中，它应当 足以緩解或改善病症或疾患的症状，或者是预防剂量，在这种情况中，它应 当足以部分或完全预防受试者出现症状。
这里使用的术语"融合物"指本发明的肽与另 一分子之间的共价偶联物
(conjugate),所述另一分子可以是例如蛋白质、肽、小分子、聚合物(例如 聚乙二醇或多糖)或核酸。肽-小分子或肽-聚合物融合物可以通过人工合成 来制备，而肽-蛋白质或肽-肽融合物可以通过化学偶联或者通过在适当的宿 主细胞中表达来制备。
术语"调控"指提高或降低活性肽的水平。调控可以直接或间接地发生。 这里使用的术语"多聚体"指包含多条肽链的分子，所述肽链可以相同或 不同。多聚体可以进一步包含至少一个任选的接头，至少两个肽共价结合至 该接头。多聚体可以是例如二聚体、三聚体或四聚体。接头可以是例如二石危 醇接头、三硫醇接头、四硫醇接头、二羧酸接头、三羧酸接头、四羧酸接头、 胺接头、三胺接头或四胺接头。
术语"肽"指包含以酰胺键线形偶联的氨基酸的分子，所述氨基酸包括例 如L和D的氨基酸。肽可以另外包含氨基酸衍生物或非氨基酸模块，诸如例 如二肽模拟物。本发明肽的长度范围可以是例如2-100、 5-30、 7-50、 10-30 或10-50个氨基酸(包括端值)，诸如例如ll-35个氨基酸。肽可以包含进一步 的修饰，诸如例如糖基化、乙酰化、磷酸化、PEG化、脂质化(lipidation)、 或者与有机或无机分子偶联。
这里使用的"带正电荷的"指在大于6的pH，诸如例如pH6-8、 6-9、 7-8或 者7-9带正电荷的氨基酸、氨基酸模拟物或化学模块。例如，带正电荷的氨 基酸包括赖氨酸、精氨酸和2，4-二氨基丁酸。
术语"带正电荷的芳香族氨基酸"指在大于6的pH，诸如例如pH6-8、 6-9、 7-8或7-9带正电荷的氨基酸。例如，带正电荷的芳香族氨基酸包括组氨酸、 4-氨基苯丙氨酸和4-脒基苯丙氨酸。
与给定序列"基本上相同，，的氨基酸序列可以是与给定序列例如至少 60%、 64%、 70%、 75%、 76%、 80%、 82%、 85%、 88%、 90%、 94%、 95%、 97%、 98%或99%相同。它可以通过截短、删除、替代或添加至少一个氨基 酸衍生自给定序列；和/或，可以因为例如添加、删除或替代至少l、 2、 3、 4、 5、 6、 7或8个氨基酸而不同于给定序列。"治疗"指降低疾病或疾患的严重性或持续时间；改善与疾病或疾患相关 的一种或多种症状；给患有疾病或疾患的受试者提供有益效果，而不必然治 愈该疾病或疾患；或者预防疾病或疾患。
肽"三聚体，，指包含第一、第二和第三肽链的分子，所述肽链可以相同或 不同。肽三聚体可以进一步包含至少一个任选的接头，至少两个所述肽共价 结合至所述接头。
II.本发明的肽
基于对FcRn的相对亲和力和阻断IgG的Fc部分结合至FcRn的能力，已对 本发明的肽进行了评估。展现出结合FcRn和/或阻断FcRn结合至IgG的Fc部分 的能力的肽共享某些序列共性或特征。如此，本发明的一个实施方案提供了 能够抑制人IgG的Fc部分结合至人Fc新生儿受体的肽，其包含序列
-Gly-X6画X7-X8画X9-X10画X1广
-Xe选自带正电荷的氨基酸、芳香族氨基酸、带正电荷的芳香族氨基酸和它 们的类似物；
-乂7选自苯丙氨酸和苯丙氨酸类似物；
-X8和-X9各自独立地选自甘氨酸、肌氨酸、天冬氨酸、D-氨基酸、a-氨基异 丁酸和它们的类似物；或者Xs在与乂9一起时形成二肽冲莫拟物； -Xw选自氨基酸和它们的类似物，或者X,o在与X9—起时形成二肽模拟物； -Xu选自酪氨酸和酪氨酸类似物；而且
在某些实施方案中，肽的长度范围为7到50个氨基酸并且能结合至人FcRn， 从而防止FcRn结合至人IgG。
在一个例示性的实施方案中，本发明的肽包含
Gly-X6-Phe-X8-X9-X10-Tyr。 在另一个实施方案中，本发明的肽能够以通式表示
R广Gly-X6國X7-X8-X9-XKrX『R2
-R,具有通式X-X2-X3-X4 其中
-X,选自氢、酰基和氨基酸保护基团；-乂2缺失或选自氨基酸和长度为2-15个氨基酸的肽；
-X3缺失或者是能够与Xn)、 X。或Xn形成桥的氨基酸，其中所述桥选自
氨基末端到羧基末端的桥、侧链到骨架的桥、和侧链到侧链的桥；
-乂4缺失或选自氨基酸和长度为2-15个氨基酸的肽； -X6、 -X7、 -X8、 -X9、 -Xk)和-Xn如上定义；和 -112具有通式-乂12-乂13-X14-X15
-X。缺失或者是氨基酸； -乂13缺失或者是氨基酸；
-X,4缺失或选自氨基酸和长度为2-15个氨基酸的肽；和 -乂15是氨基基团或羧基保护基团。
当用于限定本发明的肽时，术语"氨基酸"包括氨基酸类似物。
在一个实施方案中，X6是带正电荷的氨基酸，选自赖氨酸、鸟氨酸、2,4-二氨基丁酸、2，3-二氨基丙酸、精氨酸、脒基丙氨酸和它们的类似物。在另 一个实施方案中，X6是芳香族氨基酸，选自酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和它 们的类似物。在另一个实施方案中，X6是带正电荷的芳香族氨基酸，选自组 氨酸、1-曱基组氨酸、2-吡咬基丙氨酸、3-吡吱基丙氨酸、4-吡^定基丙氨酸、 4-氨基苯丙氨酸、4-脒基苯丙氨酸、噻唑基丙氨酸和它们的类似物。在另一 个实施方案中，X6是4-脒基苯丙氨酸。在另一个实施方案中，X6选自组氨酸、 3-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、4-脒基苯丙氨酸和它们的类似物。
例示性的组氨酸类似物选自但不限于二氨基丁酸、瘗唑基丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、脒基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、噻吩基丙氨 酸、鸟氨酸、4-脒基苯丙氨酸、1-曱基组氨酸、4-氨基苯丙氨酸、2-吡咯烷 基丙氨酸、3-哌咬基丙氨酸和4-哌咬基丙氨酸。
例示性的苯丙氨酸衍生物可以选自但不限于4-氨基苯丙氨酸、五氟苯 丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、1-萘基丙氨 酸、高苯丙氨酸、苯甘氨酸、2-曱基苯丙氨酸、3-曱基苯丙氨酸、4-曱基苯 丙氨酸、2-氯苯丙氨酸、3-氯苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、3，3-二苯基丙氨酸、 4,4-二苯基丙氨酸、4-叔丁基苯丙氨酸、环己基丙氨酸、(4-氨基乙酰基)-苯丙 氨酸、L-l,2，3,4-四氢异全啉-3-羧酸、D-(3-曱基苯丙氨酸和L-P-甲基苯丙氨酸。
在一个实施方案中，X,o选自中性和疏水性氨基酸和它们的类似物。在一个实施方案中，X2选自氨基酸和长度为2或3个氨基酸的肽。在一个 实施方案中，X2包括至少一个疏水性氨基酸。在另一个实施方案中，X2是氨
基酸或长度为2-15个氨基酸的肽，其中羧基末端氨基酸是疏水性氨基酸。 在一个实施方案中，X4是氨基酸或长度为2-15个氨基酸的肽，其中羧基
末端氨基酸是N-甲基化的。
在一个实施方案中，肽是线性的。在另一个实施方案中，X10、 乂12或乂13
中的至少一个是能够与X3形成桥的氨基酸，其中所述桥选自氨基末端到羧基
末端的桥、侧链到骨架的桥、和侧链到侧链的桥。在一个实施方案中，所述 桥是侧链到侧链的桥，其可以是二硫桥、醚桥、硫醚桥、烯桥或酰胺桥。
在一个实施方案中，所述侧链到侧链的桥是下述各对之间的二硫桥半 胱氨酸和半胱氨酸；半胱氨酸和高半胱氨酸；半胱氨酸和青霉胺；高半胱氨 酸和高半胱氨酸；高半胱氨酸和青霉胺；或青霉胺和青霉胺。在另一个实施 方案中，所述侧链到侧链的桥是下述各对之间的酰胺桥天冬氨酸和赖氨酸； 天冬氨酸和鸟氨酸；天冬氨酸和2,4-二氨基丁酸；天冬氨酸和2，3-二氨基丙酸； 谷氨酸和赖氨酸；谷氨酸和鸟氨酸；谷氨酸和2,4-二氨基丁酸；或谷氨酸和 2,3-二氨基丙酸。
在一个实施方案中，所述肽包含至少一个半胱氨酸(例如在X3)或半胱 氨酸类似物，所述半胱氨酸类似物选自高半胱氨酸、D-半胱氨酸和青霉胺。
在一个实施方案中，Xs和X9中的至少一个是D-氨基酸或选自甘氨酸、a-氨基异丁酸和肌氨酸。
在一个实施方案中，Xs与X9—起形成二肽模拟物，其选自 -P-丙氨酸； -4-氨基丁酸； -5-氨基戊酸； -3-(氨曱基)苯曱酸； -4-(氨曱基)苯曱酸； -3-(氨基苯基)乙酸； -4-(氨基苯基)乙酸；-3-氨基-2-氧-1 -哌啶-乙酸；
-(3 S)-3 -氨基-2-氧-1 -哌啶乙酸和(311)-3-氨基-2-氧-1 -哌啶乙酸； -(3S)-3-氨基-2-氧-l-氮杂革乙酸和(3R)-3-氨基-2-氧代-l-氮杂革乙酸； -(3 S)-3-氨基-2-氧-1-吡咯烷乙酸和(311)-3-氨基-2-氧-1-吡咯烷乙酸； -(3R)-3-氨基-l-羧曱基-戊内酰胺；和 -3-氨基-^1-羧曱基-2，3，4,5-四氢-111-[1]-苯并氮杂萆-2-酮。
在一些实施方案中，所述肽包含至少一个苯丙氨酸或苯丙氨酸类似物， 其选自色氨酸、酪氨酸、2-氨基苯丙氨酸、3-氨基苯丙氨酸、4-氨基苯丙 氨酸、五氟苯丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡咬基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、 1-萘基丙氨酸、高苯丙氨酸、苯甘氨酸、2-曱基苯丙氨酸、3-曱基苯丙氨酸、 4-曱基苯丙氨酸、2-氯苯丙氨酸、3-氯苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、3，3-二苯基 丙氨酸、4,4，-二苯基丙氨酸、4-叔丁基苯丙氨酸、环己基丙氨酸、(4-氨基乙 酰基)苯丙氨酸、L-l，2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、D-P-曱基苯丙氨酸、和L-卩-曱基苯丙氨酸。
在一些实施方案中，所述肽包含至少一个酪氨酸类似物，其选自苯丙 氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-曱氧基苯丙氨酸、五氟苯丙氨酸、2-吡啶基丙氨 酸、3-吡啶基丙氨酸、4-吡咬基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、2硝基酪氨酸、和 4-氟苯丙氨酸。
在一个实施方案中，X9与X,o—起形成二肽模拟物，其选自
,三三-D,L-Friedinger氏内酰胺&formula&formula see original document page 30&/formula&
-L，L-Friedinger氏内酰胺&formula&formula see original document page 30&/formula&
在某些实施方案中，本发明的肽包含至少一个组氨酸类似物，其选自 2,4-二氨基丁酸、噻唑基丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、脒基丙氨酸、2-吡啶基丙 氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、噻吩基丙氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、 精氨酸、4-脒基苯丙氨酸、1-曱基组氨酸、3-曱基组氨酸、1,3-二曱基组氨酸、 4-氨基苯丙氨酸、2-吡咯烷基丙氨酸、3-哌啶基丙氨酸、和4-哌啶基丙氨酸。
在某些实施方案中，在那些形成桥的氨基酸之间的氨基酸数目的范围为 6-12。在其它实施方案中，在形成桥的氨基酸之间存在8或9个氨基酸。
在一些实施方案中，本发明肽的长度为至少7个，多至50个氨基酸。在 其它实施方案中，肽的长度为11到35个氨基酸。
在某些实施方案中，本发明的肽以多聚体存在，诸如二聚体、三聚体或 四聚体。多聚体的各个肽可以相同或不同。
在一个实施方案中，所述肽是二聚体，诸如作为还原性烷基化产物的二 聚体。在另一个实施方案中，所述二聚体是单个肽单体和多价接头之间反应 的产物。在一个实施方案中，所'述多价接头选自^L醇、酸、醇和胺的接头。 在另一个实施方案中，所述二聚体是烷基化反应的产物，诸如例如硫醇和烷 基卣的烷基化反应。
在一个实施方案中，将该肽在树脂上合成，然后与多价接头反应来多聚 化(例如二聚化)，所述多价^接头诸如酸或胺的多{介接头，如实施例15所述。
在一些实施方案中，本发明的肽包含至少2处上述修饰。
在某些实施方案中，本发明的肽包含 a)选自下组的氨基酸序列
QRFCTGHFGGLYPCNGP (SEQ ID NO:l)，GGGCVTGHFGGIYCNYQ (SEQ ID NO:2)，
KIICSPGHFGGMYCQGK (SEQ ID NO:3)，
PSYCIEGHIDGIYCFNA (SEQ ID NO:4),和
NSFCRGRPGHFGGCYLF (SEQ ID NO:5);及 b)与SEQIDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中的一个或多个序列基本上相同的氨基^列。
在一些实施方案中，所述肽包含与SEQIDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQ ID NO:3、 SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的一个或多个序列至少640/。、至少70%、 至少76%、至少82%、至少88%、至少94°/。或100%相同的氨基酸序列。在其 它实施方案中，本发明的肽可以包含SEQIDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQ ID NO:3、 SEQIDNO:4或者SEQIDNO:5但具有至少一处或多至5处删除、替代 或添加突变。本发明所有的肽能抑制人FcRn对IgG的结合。
在一些实施方案中，本发明的肽可以包含通过至少一个保守氨基酸替代 来修饰的SEQ ID NO: 1 、 SEQ ID NO:2、 SEQ ID NO:3 、 SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5。在某些实施方案中，本发明的肽可以包含通过至少一个氨基酸替代来 修饰的SEQIDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5，其中将所述氨基酸用天然存在的氨基酸来替代。在一些实施方案中， 本发明的肽可以具有通过至少一个氨基酸替代来^务饰的SEQ ID NO:l、 SEQ IDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5，其中将所述氨基酸 用D-氨基酸来替代。在一些实施方案中，本发明的肽可以具有通过至少一个 氨基酸替代来修饰的SEQ IDNO:l、 SEQ ID NO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ ID NO:4或SEQIDNO:5，其中将所述氨基酸用N-曱基化氨基酸来替代。在一些 实施方案中，本发明的肽可以具有通过至少一个氨基酸替代来修饰的SEQ ID NO:l、 SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQ IDNO:4或SEQ IDNO:5，其中将 所述氨基酸用非天然存在的氨基酸替代。在某些实施方案中，本发明的肽可 以具有通过至少一个氨基酸替代来修饰的SEQIDNO:l、 SEQIDNO:2、 SEQ ID NO:3 、 SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5,其中将所述氨基酸用氨基酸模拟物 来替代。
或者，本发明的肽可以包含选自表l的氨基酸序列，其能够结合至FcRn, 由此抑制FcRn结合至IgG分子的Fc部分。本发明进一步包括包含表l所列序列 的变体的肽，其中所述变体包括但不限于截短；与表l中的至少一种肽共享至少68%、 72%、 76%、 80%、 84%、 88%、 92%或96%同 一性的肽。变体 还包括包含表1所列序列但包含至少 一处氨基酸替代的肽，其中所述氨基酸 用天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸、氨基酸类似物或氨基酸模拟物 来替代。
SEQ ID NO:6AGQRFCTGHFGGLYPCNGPGTGGGK
SEQ ID N0:7AGGGCVTGHFGGIYCNTQGTGGGK
SEQ ID NO:8AGKIICSPGHFGGMYCQGKGTGGGK
SEQ ID NO:9AGPSYCIEGHIDGIYCFNAGTGGGK
SEQ ID NO: 10AGNSFCRGRPGHFGGCYLFGTGGGK
在一个实施方案中，本发明的肽可以包含表l所列氨基酸序列但具有1 、
2、 3、 4、 5、 6或更多个保守氨基酸替代。在另一个实施方案中，本发明的 肽可以包含表l所列氨基酸序列但已用l、 2、 3、 4、 5、 6或更多个天然存在 的氨基酸替代。
在一些实施方案中，本发明的肽可以包含表l所列氨基酸序列但已用l、 2、 3、 4、 5、 6或更多个非天然存在的氨基酸替代。在另一个实施方案中， 本发明的肽可以包含表l所列氨基酸序列但已用l、 2、 3、 4、 5、 6或更多个 N-曱基化氨基酸替代。在另一个实施方案中，本发明的肽可以包含表l所列 氨基酸序列但已用l、 2、 3、 4、 5、 6或更多个D-构型氨基酸替代。在又一个 实施方案中，本发明的肽可以包含表l所列氨基酸序列但已用l、 2、 3、 4、 5、 6或更多个氨基酸模拟物替代。
下文提供了本发明的例示性实施方案。许多这些实施方案涵盖表l所列 氨基酸序列但修饰成包含一个或多个氨基酸替代。虽然这些实施方案提供了 合适替代的实例，但是应当理解，本发明涵盖不破坏肽的生物学活性的其它 替代。
在一个例示性的实施方案中，本发明的肽包含SEQIDNO:6的氨基酸序 列但以第6位半胱氨酸到青霉胺替代及第12位甘氨酸到肌氨酸替代来修饰 (其中氨基酸的位置是基于SEQ ID NO:6中的氨基酸编号方式)。在另 一个实 施方案中，肽包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列但以第6位半胱氨酸到青霉胺替 代和第13位亮氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。
在另 一个实施方案中，本发明的肽可以包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列但以第6位半胱氨酸到青霉胺替代、第11和12位两个甘氨酸分别到单个(3R)-氨基-l-羧曱基-2-戊内酰胺替代、 及第13位亮氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。
在一个实施方案中，本发明的肽可以包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列但 以第6位半胱氨酸到青霉胺替代、第12位甘氨酸到肌氨酸替代、及第13位亮 氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。在另一个实施方案中，本发明的肽可以包 含SEQ ID NO:6的氨基酸序列但以第6位半胱氨酸到青霉胺替代、第11和12 位两个甘氨酸分别到单个(3R)-氨基-1 -羧曱基己内酰胺替代、及第13位亮氨 酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。
在一个实施方案中，本发明的肽可以包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列但 以第6位半胱氨酸到青霉胺替代、第9位组氨酸到3-吡啶基丙氨酸替代、第12 位甘氨酸到肌氨酸替代、及第13位亮氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。在另 一个实施方案中，本发明的肽可以包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列但以第6 位半胱氨酸到青霉胺替代、第9位组氨酸到4-脒基苯丙氨酸替代、第12位甘 氨酸到肌氨酸替代、及第13位亮氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。在又一个 实施方案中，本发明的肽可以包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列但以第6位半胱 氨酸到青霉胺替代、第9位组氨酸到4-吡啶基丙氨酸替代、第12位甘氨酸到 肌氨酸替代、及第13位亮氨酸到N-曱基亮氨酸替代来修饰。
在某些实施方案中，本发明的肽可以以多聚体存在，诸如二聚体、三聚 体或四聚体。多聚体的各个肽可以相同或不同。各个肽可以如上文和下文实 施例中所述进行多聚化。
在一个实施方案中，本发明的肽对FcRn的亲和力将以KD代表，数值范 围为50fM到lmM。在另一个实施方案中，本发明的肽的亲和力将以Ko代表， 数值范围为50fM到100iiM、或者数值范围为50fM到lnM、或者数值范围为 lpM到lnM。在另一个实施方案中，包含至少一种本发明肽的组合物将调控 IgG的血清浓度。在一个实施方案中，本发明的肽可以通过结合至FcRn中也 与IgG恒定区特异性相互作用的至少一个氨基酸而阻断IgG恒定区结合至 FcRn。
III.生成本发明的肽的方法
1.合成本发明的肽的一般方法可以使用本领域公知的技术来合成本发明的肽。例如，可以使用编码肽 的多核苷酸在细胞中重组合成本发明的肽，其整个由天然存在的氨基酸构
成。参见，例i口Sambrook et al., Afo/ecw/ar C7o"/"g爿丄a6on3fo/^ A^3""a/, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989)及Ausubd et al" CWre"f /Vofoco/s z." Mo/ecwAar所o/ogy， Greene Publishing Associates and Wiley Interscience， N.Y. (1989)。或者，可以使用已知的合成方法诸如固相合成来合成本发明的肽。 合成技术在本领域是公知的。参见例如Merrifield， C7^w/ca/ Po/用e;^6fe ， Katsoyannis and Panayotis eds. pp. 335-61 (1973); Merrifield， &/爿wi CTw. 5bc. 85:); Davis et al.， A.oc/zem. 10:394 (1985); Finn et al., 77ze 尸rafe/ra (3d ed.) 2:105 (1976); Erikson et al., 772e iVofez."s (3d ed.) 2:257 (1976)。可以使用标准Fmoc/tBu方案，参见W. C. Chan and P. D. White eds. Fmoc 尸/zose尸e/7f/cfe iSy"^2as/y爿尸nac/Zca/ Jp/ /-oac/7 Oxford University Press Inc. New York (2000)及美国专利No. 3,941,763。或者，可以组合4吏用重 组方法和合成方法来合成本发明的嵌合蛋白。在某些应用中，使用重组方法、 合成方法、或重组和合成方法的组合可以是有益的。 2.用于合成本发明的肽的肽类似物的方法
这里使用的二十种常规氨基酸和它们的缩写遵循常规用法。参见 /w扁wo/c^—^ S声/zes&, 2nd Edition, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds" Sinauer Associates, Sunderland, Mass (1991)。 二十种常规氨基酸的立体异构体(例如 D-氨基酸)；非天然氨基酸，诸如a-取代的氨基酸、a-二-取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、N-曱基氨基酸、乳酸；和其它非常规氨基酸也可以是本发明的 多肽的合适成分。非常规氨基酸的实例包括氨基异丁酸、3-氨基-l-羧曱基 戊内酰胺、4-脒基-苯丙氨酸、5-氨基戊酸、4-羟基脯氨酸、？羧基谷氨酸、 s-N，N，N-三曱基赖氨酸、s-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰基丝氨 酸、N-曱酸基甲硫氨酸、3-曱基组氨酸、5-羟基赖氨酸、cT-N-甲基精氨酸、 青霉胺、肌氨酸和其他类似的氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟基脯氨酸)。根 据标准的用法和惯例，在这里使用的多肽符号中，左手方向是氨基末端的方 向而右手方向是羧基末端的方向。
保守氨基酸替代可以涵盖非天然存在的氨基酸残基，典型地通过化学肽 合成而不是通过在生物系统中合成来掺入它。这些包括模拟肽 (peptidomimetic)和氨基酸才莫块的其它4页倒(reversed)或倒置(inverted)形式。基于共同的侧链性质，可以将天然存在的残基分类
1) 疏水性的正亮氨酸、Met、 Ala、 Val、 Leu、
2) 中性亲水性的Cys、 Ser、 Thr、 Asn、 G
3) 酸性的Asp、 G
4) 石威性的:His、 Lys、 A
5) 影响链方向的残基Gly、 P和
6) 芳香族的Trp、 Tyr、 Phe。
例如，非保守替代可以牵涉这些类别中 一类的成员替换为另 一类的成贝。
在进行这些变化时，根据某些实施方案，可以考虑氨基酸的亲水指数 (hydropathic index)。基于每种氨基酸的疏水性和电荷性质，已给每种氨基酸 的亲水指数赋值。它们是异亮氨酸(+4.5)、缬氨酸(+4.2)、亮氨酸(+3.8)、 苯丙氨酸(+2.8)、半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)、甲硫氨酸(+1.9)、丙氨酸(+1.8)、甘 氨酸(-0.4)、苏氨酸(-0.7)、丝氨酸(-0.8)、色氨酸(-0.9)、酪氨酸(-1.3)、脯氨酸 (-1.6)、组氨酸(-3.2)、谷氨酸(-3.5)、谷氨酰胺(-3.5)、天冬氨酸(-3.5)、天冬酰 胺(-3.5)、赖氨酸(-3.9)、和精氨酸(-4.5)。
本领域了解亲水氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用性生物学功能中的 重要性。Kyteetal.，/.Mo/.所o. 157:105-131(1982).已知可以用某些氨基酸替 代其它具有相似亲水指数或分值的氨基酸，而仍然保留相似的生物学活性。 在进行基于亲水指数的变化中，在某些实施方案中，包括亲水指数在士2之内 的氨基酸的替代。在某些实施方案中，包括在士l之内的那些，而在某些实施 方案中，包括在士0.5之内的那些。
本领域还了解可以基于疏水性有效地进行类似氨基酸的替代，特别是在 意图将由此产生的生物新功能性蛋白质或肽用于结合至特定蛋白质靶物时。
已将下列亲水性数值(hydrophilicity value)赋予这些氨基酸残基精氨酸 (+3.0)、赖氨酸(+3,0)、天冬氨酸(+3.0士l)、谷氨酸(+3.0±1)、丝氨酸(+0.3)、 天冬酰胺(+0.2)、谷氨酰胺(+0.2)、甘氨酸(O)、苏氨酸(-0.4)、脯氨酸(-0.5士l)、 丙氨酸(-0.5)、组氨酸(-0.5)、半胱氨酸(-l.O)、曱硫氨酸(-1.3)、缬氨酸(-1.5)、 亮氨酸(-1,8)、异亮氨酸(-1.8)、酪氨酸(-2.3)、苯丙氨酸(-2.5)、和色氨酸(-3.4)。 在进行基于相似亲水性数值的变化时，在某些实施方案中，包括亲水性数值 在士2之内的氨基酸的替代，在某些实施方案中，包括在士l之内的那些，而在某些实施方案中，包括在士0.5之内的那些。
使用公知技术，技术人员将能够确定本文所列多肽的合适变体。在某些 实施方案中，通过靶向据信对活性不重要的区域，本领域技术人员可以鉴定 分子中可以改变而不破坏活性的合适区域。在某些实施方案中，技术人员可 以鉴定分子中在相似多肽间保守的残基和模块。在某些实施方案中，甚至对 生物学活性或对结构重要的区域也可以进行保守氨基酸替代且不破坏生物 学活性或对多肽结构没有不利影响。
另外，本领域技术人员可以回顾结构-功能研究，从而鉴定相似肽中对 活性或结构重要的残基。鉴于这样的比较，技术人员可以预测肽中与在相似 肽中对活性或结构重要的氨基酸残基相对应的氨基酸残基的重要性。本领域 技术人员可以选择化学上相似的氨基酸来替代这样预测为重要的氨基酸残 基。
本领域技术人员还可以分析相似肽中的三维结构和与那种结构相关的 氨基酸序列。本领域技术人员可以产生在每个期望氨基酸残基处包含单一氨 基酸替代的测试用变体。然后可以使用本领域技术人员已知的活性测定法来 筛选变体。可以将这些变体用于收集关于合适变体的信息。例如，如果发现 特定氨基酸残基的变化导致活性被破坏、被非期望地降低或不合适，那么就 可以避开带有这种变化的变体。换言之，基于从这种常规实验中收集的信息， 本领域技术人员可以容易地确定这样的氨基酸，在那里应当避免无论是单独 地还是组合其它突变地进一步的替代。
根据某些实施方案，氨基酸替代可以是这样的(l)降低了对蛋白水解的 易感性，(2)降低了对氧化的易感性，(3)改变了与生物学功能有关的结合亲 和力，和/或(4)赋予了或修饰了这种多肽的其它物理化学或功能特性。根据 某些实施方案，可以在天然存在的序列中(在某些实施方案中，在多肽中形 成分子间接触的结构域以外的部分)进行单一或多重M酸替代(在某些实 施方案中，保守氨基酸替代)。在某些实施方案中，典型地是，保守氨基酸 替代可以不实质性改变亲本序列的结构特征(例如，置换的氨基酸不应当趋 于中断存在于亲本序列中的螺旋，或者破坏亲本序列特征性的其它类型二级 结构)。本领域公认的多肽二级或三级结构的实例参见iVofe/ra， Sfra"w^ Mo/ecw/"r /*"'腦)7/&$", Creighton, Ed, W. H. Freeman and Company, New York (1984); /w/radwcf/o" to /Vote/"》MC紋e, C. Branden and J. Tooze， eds., GarlandPublishing, New York, N. Y. (1991);及Thomton et al.， Atowre 354:105 (1991)中描述。
在某些实施方案中，氨基酸衍生物包含共价修饰，包括但不限于，与聚 合物、脂质或其它有机或无机模块的化学键合。在某些实施方案中，化学修
期。在某些实施方案中，化学修饰的特异性结合剂可以具有改进的针对期望 细胞、组织和/或器官的靶向能力。在某些实施方案中，将衍生的特异性结合 剂共价修饰，以包含一个或多个水溶性聚合物附属物(attachment),包括但不 限于聚乙二醇、聚氧乙二醇或聚丙二醇。参见例如美国专利No: 4，640，835; 4,496,689; 4，301，144;4，670，417; 4,791,192;和4,179,337。在某些实施方案中， 衍生的特异性结合剂包含一个或多个聚合物，包括但不限于单曱氧基-聚乙 二醇、右旋糖苦、纤维素或其他碳水化合物为基础的聚合物、聚(N-乙烯吡 咯烷酮)-聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯 化多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇，以及这些聚合物的混合物。 3.用于合成本发明的肽的类似物的方法
肽类似物常常在制药工业中用作具有类似于模板肽的性质的非肽类药 物。这些类型的非肽类化合物称为"肽模拟物，，或"模拟肽"。Fauchere,A/v. i&wg Was. 15:29 (1986); Veber and Freidinger, 77iV^ p. 392 (1985);及Evans et al.,j: Med. Ozem. 30:)，本文将其引用作为参考。通常在计算机化 分子建^^莫的帮助下开发这些化合物。与治疗上有用的肽在结构上相似的肽模 拟物可用于产生相似的治疗或预防效果。通常，模拟肽在结构上与范例多肽 (即具有生物化学性质或药物活性的多肽)诸如人抗体相似，但是具有一个 或多个任选通过本领域公知方法以选自下组的键置换的肽连接-CH2NH-， -CH2S-， -CH2-CH2-， -CH=CH-(顺式和反式),-COCH2-， -CH(OH)CH2-、 和-CH2SO-。在某些实施方案中，可以用同一类型的D-氨基酸系统替代共有 序列的一个或多个氨基酸(例如D-赖氨酸置换L-赖氨酸)来产生更稳定的肽。 另夕卜，可以通过本领域已知方法产生包括共有序列或基本上相同的共有序列 的受约束肽(constrained peptides)(Rizo and Gierasch, Aev. 61:387(1992)，引入本文作为参考)，诸如例如通过添加能够形成使肽环化的 分子内二石克桥的内部半胱氨酸残基。
肽二聚化或寡聚化可以增强肽序列对给定受体的亲合力。参见例如John,et al., Ozem.所o/. 12:939 (1997).可以使用本领域Z^知的多种方法来合成本 发明肽的二聚体和更高阶的多聚体。二聚体或多聚体可以在自动化肽合成仪 上作为连续肽序列直接合成。或者，可以通过各个肽单体与多价接头模块反 应来合成肽多聚体。参见例如Rose，JJm. C7^m. Soc. 116:30(1994).又例如， 可以在合成肽序列之前通过掺入分支的接头基团来合成肽多聚体，像"多重 抗原性肽"(multiple antigenic peptides, MAP)的合成一冲羊。D. Posnett et al., &o/. C&w. 263:).本发明提供了用于形成这些肽二聚体的新方 法，包括在树脂上时，将肽的N-末端与接头分子诸如例如琥珀g吏起反应， 使得在固相树脂珠上的邻近肽彼此反应，形成通过肽N-末端连接的二聚体。 随后对树脂的切割提供了 N-末端连接的肽二聚体。 4.构建用于表达本发明的肽的表达载体
可以通过本领域已知的标准方法来合成编码本发明的肽的核酸，例如通 过使用自动化DNA合成仪(诸如可购自Biosearch、 Applied Biosystems等)。 本领Jt或知道别的核酸合成方法。参见例如美国专利Nos. 6，015，881; 6,281,331; 6,469,136。对于重组生产本发明的肽，将编码肽的多核苦酸序列插入适当的 表达载体，即包含所插入编码序列的转录和翻译所必需的元件的载体，或者 在RNA病毒载体的情况中，包含复制和翻译所必需的元件。将编码本发明的 肽的核酸插入载体，在正确的读码框中。
转化中使用的载体通常含有用于鉴定转化子的选择标志。在细菌系统 中，这可以包括抗生素抗性基因，诸如氨爷青霉素或卡那霉素。培养的哺乳 动物细胞中使用的选择标志包括赋予药物抗性的基因，诸如新霉素、潮霉素 和曱氨蝶呤。选择标志可以是可扩增的选择标志。 一种可扩增的选择标志是 DHFRj^因或DHFR cDNA。 Simonsen and Levinson,尸rac. iVa".力cac . 5W. L/iSJ 80:). Thilly (M,廳to CW/ 7fe由o/ogv， Butte腦rth Publishers, Stoneham,MA(1986))综述了选择标志，而且选择标志的选择完全在本领域普 通技术水平之内。也可以将选择标志与目的基因在分开的质粒上同时导入细 胞，或者可以将它们在同一质粒上导入。如果在同一质粒上，选择标志和目 的基因可以处于不同或相同的启动子的控制之下，后一种安排产生双顺反子 信息。本领域知道这种类型的构建物(例如美国专利No.4，713，339)。
表达系统中的表达元件在它们的强度和特异性方面有变化。依赖于所利 用的宿主/载体系统，可以在表达载体中使用任何合适的转录和翻译元件，包括组成型和诱导性的启动子。例如，在细菌系统中克隆时，可以使用诱导性
启动子，诸如噬菌体X的pL、 plac、 ptrp、 ptac (ptrp-lac杂合启动子)等等； 在昆虫细胞系统中克隆时，可以使用诸如杆状病毒多角体启动子的启动子； 在植物细胞系统中克隆时，可以使用衍生自植物细胞基因组(例如热休克启 动子；RUBISCO小亚基的启动子；叶绿素a/b结合蛋白的启动子)或衍生自 植物病毒(例如CaMV的35SRNA启动子；TMV的外壳蛋白启动子)的启动 子；在哺乳动物细胞系统中克隆时，可以使用衍生自哺乳动物细胞基因组(例 如金属硫蛋白启动子)或衍生自哺乳动物病毒(例如腺病毒晚期启动子；痘 苗病毒7.5K启动子)的启动子；在产生包含多拷贝的表达产物的细胞系时， 可以与适当的选择标志一起使用基于SV40、 BPV和EBV的载体。
在使用植物表达载体的情况中，可以通过任何启动子来驱动编码线性或 非环化形式的本发明嵌合蛋白的序列表达。例如，可以使用病毒启动子，诸 如CaMV的35S RNA和19S RNA启动子(Brisson et al., Atowz^ 310:511-514 (1984))或TMV的外壳蛋白启动子(Takamatsu et al.， ￡M50丄6:307-311 (1987));或者，可以使用植物启动子，诸如RUBISCO小亚基的启动子(Coruzzi et al.，五M5(9J. 3: (1984); Broglie et al.， 5We"ce 224:838-843 (1984)) 或热4木克启动子，例如大豆hspl7.5-E或hspl7，3-B (Gurley et al., Afo/.CW/.说o/. 6:559-565 (1986))。可以使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转 化、显樣"主射、电穿孔等将这些构建物导入植物细胞。Weissbach & Weissbach, AfeAcxis》r尸/awf Mo/ecw/ar Academic Press, NY", Section VIII, pp.
421-463 (1988)及Grierson & Corey,尸/""f M /,/w 5油^， 2d Ed.， Blackie， London, Ch. 7-9 (1988).
在可以用于生产本发明嵌合蛋白的 一种昆虫表达系统中，将苜蓿银紋夜 蛾(^ /7a ca/z/ow/ca)核型多角体病毒(AcNPV)用作载体来表达外来基 因。该病毒生长在草地夜蛾OS^^era/rag^^(ia)细胞中。可以将编码序列 克隆如病毒的非必需区(例如多角体基因)，并且置于AcNPV启动子(例如 多角体启动子)的控制之下。编码序列的成功插入将导致多角体基因的灭活 和未关闭(non-occluded)的重组病毒(即缺乏由多角体基因编码的蛋白质性质 外壳的病毒)的产生。然后将这些重组病毒用于感染草地夜蛾细胞，其中所 插入的基因被表达。参见例如Smithetal.,J P7ra/. 46:584 (1983);美国专利No. 4,215,051.这种表达系统的进一步实例可参见Ausubel et al., eds., CwreW/Votoco/s /" 5z'o/ogy， Vol. 2， Greene Publish. Assoc. & Wiley
lnterscience (1989)。
可用于表达本发明的肽的另 一种系统是谷氨酸合成酶基因表达系统，也 称为"GS表达系统，，(Lonza Biologies PLC, Berkshire UK)。这种表达系统详细 记载于美国专利No. 5，981，216。
在哺乳动物宿主细胞中，可以利用许多基于病毒的表达系统。在腺病毒
用作表达载体的情况中，可以将编码序列连接至腺病毒转录/翻译控制复合 体，例如晚期启动子和三联前导序列。然后可以通过体外或体内重组将这种 嵌合基因插入腺病毒基因组。插入在病毒基因组的非必需区中(例如E1或E3 区)将导致可存活的且能够在被感染的宿主中表达肽的重组病毒。参见例如 Logan & Shenk,Ato/.爿cad 81:)。也可以使用痘苗
7.5K启动子。参见例如Mackett et al.，A^/.爿cad
SW, tAX4 79:); Mackett et al.， J Wra/. 49:857 (1984); Panicali et al., Prac. iVaf/.L/51」 79:)。
5. 在适当的靶细胞中表达本发明的肽
可以将表达媒介转染或共转染入合适的靶细胞来表达本发明的多肽。本 领域已知的转染技术包括但不限于磷酸钙沉淀(Wigler et al., CW/ 14:725 (1978))、电穿孔(Neumannetal.,五M5(9， J 1:841 (1982))、和基于脂质体的试 剂。可以利用多种宿主-表达载体系统来表达本文所述嵌合蛋白，包括原核 和真核细胞。这些包括但不限于经包含适当编码序列的重组噬菌体DNA或质 粒DNA表达载体转化的微生物，诸如细菌(例如大肠杆菌)；经包含适当编 码序列的重组酵母或真菌表达载体转化的酵母或丝状真菌；经包含适当编码 序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；经包含适 当编码序列的重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒)感 染或者经包含适当编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物 细胞系统；或者动物细胞系统，包括哺乳动物细胞(例如CHO、 Cos、 HeLa 细胞)。
6. 用于合成包含本发明肽的融合分子的方法
在一些实施方案中，本发明的肽作为融合蛋白存在，所述融合蛋白包含 本发明的肽和融合配偶体。在一个实施方案中，所述融合配偶体给本发明的 肽赋予特性，诸如延长的半衰期、稳定性和增强的转运中的一项或多项，和/或可以增强体内或体外功效。
另外，可以将本发明的异源多肽与免疫球蛋白(IgG)的恒定域的各部分相 联合，导致嵌合多肽。这些特定的融合分子使纯化更容易并且在体内显示出
增加的半衰期。这已显现在例如由人CD4多肽的前两个结构域和哺乳动物免 疫球蛋白重链或轻链恒定区的各种结构域组成的嵌合蛋白中。EP0 394 827; Traunecker et al.， A^似m， 331:84-86 (1988).在一些情况中，由于IgG部分而具 有二硫键相连的二聚体结构的融合分子可以比例如单独的单体多肽或多肽 片段更有效地结合和中和其它分子。参见例如Fountoulakis et al.,5/oc/7em. 270: (1995)。
本发明还提供了编码上述任何肽的融合分子的多核苷酸。这种多核苷酸 可以是载体的一部分，所述载体还包括用于转录多核苷酸的调节序列。本发 明进一步提供了包含任何上述融合分子的宿主细胞、编码任何这些肽的融合 分子的多核苷酸、或者包含编码任何这些肽的融合分子的多核苷酸及用于转 录该多核苷酸的调节序列的载体。本发明还进一步提供了组合物，其包含任 何上述融合分子或核苷酸，和/或任何上述载体或宿主细胞、以及緩冲液或可 药用载体。
a.包含抗体Fc结构域的融合物
在一个实施方案中，可以将本发明的肽与IgG的Fc结构域偶联来增加它 的循环半衰期。在某些实施方案中，将肽共价连接至Fc结构域。本领域技术 人员公知重组和半合成地产生包含Fc免疫球蛋白结构域的嵌合蛋白的方法。 例如，可以将醛掺入肽衍生物，并且使用对Fc的N-末端选择性的还原性烷基 化反应来与Fc蛋白质起反应。Kinstler, y^v. Z&wgDe/. i ev. 54:477 (2002).或 者，将肽硫酯与携带N-末端半胱氨酸残基的Fc起反应。Dawson and Kent, 触所oc/zem. 69:923 (2000).
由于通过Fc结构域额外添加了两个FcRn结合位点，这种肽-Fc融合衍生 物可以具有增加的阻断IgG-FcRn相互作用的能力。这种肽-Fc融合物也可以 保护肽免于降解并如此增强了肽的体内功效。由于IgG部分而具有二硫键相 连的二聚体结构的融合蛋白还可以比本发明的肽更有效地结合和中和其它
分子，参见例如Fountoulakis et al.， J!5/oc/zem., 270:
在本发明的肽是具有IgG Fc结构域的融合蛋白一部分的实施方案中，人 Ig Fc可以包含人IgG诸如人IgGl、 IgG2和IgG4的铰链、CH2和CH3结构域。本发明也提供了包含本发明的肽和变体Fc多肽或变体Fc多肽片段的融合分 子，其中所述变体Fc包含具有Pro331Ser突变的人IgG2的铰链、CH2和CH3 结构域，参见美国专利No. 6,900,292。
与本发明的肽偶联的合适Fc结构域包括那些在Fc区的选定位置具有突 变的氨基酸以削弱其效应器功能(包括抗体依赖性细胞细胞毒性和补体依赖 性细胞毒性)的Fc结构域。例如，具有Pro331Ser突变的Fc^变体具有比天然 Fcy2小的补体活性，并且不能结合至FCyR。 IgG4Fc在激活补体级联方面有缺 陷，并且其对FcyR的结合亲和力比最有活性的同种型IgGl低大约一个数量 级。在一个实施方案中，将本发明的肽偶联至具有Leu235Ala突变的FcY4变体， 与天然Fc^相比其表现出最小的效应器功能。在另一个实施方案中，将本发 明的肽偶联至具有Leu234Val、 Leu235Ala和Pro331Ser突变的Fc^变体，其也 表现出比天然Fc^小的效应器功能。
b. 包含清蛋白的融合物
在某些实施方案中，可以将本发明的肽偶联至清蛋白结合模块。这种清 蛋白结合模块-肽偶联物可以具有更长的体内半衰期，并且如此可以要求更 少的肽剂量来实现期望的治疗效果。Chuang et al.， P/zwm. i 仏19:569 (2002); 美国专利No. 6,685,179.如此，本发明的一个实施方案提供了融合分子，其 包含本发明的肽及清蛋白融合配偶体，后者包括清蛋白、 一个或多个清蛋白 片段、结合清蛋白的肽、和/或偶联有脂质或能结合清蛋白的其它分子的分子。
本领域知道产生包含清蛋白的融合蛋白的方法。例如，通过疏水性芳香 族加帽试剂(capping reagent)来修饰的肽已显示出非共价结合清蛋白且延长 肽在兔中的半衰期。Zobel et al.,所oorg. C/zem.13:).又 例如，用硫醇反应性基团修饰的肽已显示出共价结合血清清蛋白上的单一游 离半胱氨酸残基。Kim et. al.， D/a6etes 52:751 (2003).
c. 带有PEG化模块的融合物
在一个实施方案中，本发明的肽可以PEG化以包含单个或多个(例如2-4 个)PEG模块。可以通过本领域已知的任何PEG化反应来实施PEG化。用于 制备PEG化蛋白质产物的方法一般包括(a)在一些条件下将多肽与聚乙二醇 (诸如PEG的反应性酯或醛衍生物)起反应，由此本发明的肽变成附着至一 个或多个PEG基团；并(b)获得反应产物。通常，基于已知的参数和期望的结 果，就事论事地确定用于这些反应的最优反应条件。本领域技术人员可利用许多PEG附着方法，参见例如EP 0 401 384; Malik et al.,五平//e顧to/" 20: (1992); Francis, Focus ow Gravid Factora, 3(2):4画10 (1992); EP 0 154 316; EP 0 401 384; WO 92/16221;及WO 95/34326。 例如，可以通过与反应性聚乙二醇分子的酰化反应或烷化反应来进行PEG化 本发明肽的步骤。
如此，本发明的肽包括PEG化的肽，其中一个或多个PEG基团经酰基或 烷基附着。这种肽可以是单PEG化或多PEG化的(例如那些包含2-6个或2-5 个PEG基团的肽)。PEG基团一般在氨基酸的a或e氨基处附着于肽，但是也涵 盖可以将PEG基团附着于肽的任何氨基，该氨基是足够反应性的以便在合适 的反应条件下附着至PEG基团。
通过酰化而来的PEG化一般包括将聚乙二醇(PEG)的活性酯衍生物与本 发明的肽起反应。对于酰化反应而言，所选择的聚合物典型地具有单一反应 性酯基团。可以将任何已知的或随后发现的反应性PEG分子用于进行PEG化 反应。合适的活化的PEG酯的实例是酯化为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的PEG。 这里使用的酰化包括但不限于本发明的肽与多聚体诸如PEG之间的下列类 型的连接酰胺、氨基曱酸酯(carbamate)、尿烷(urethane)等等。参见例如 Chamow, 5/oco"乂wg^e C77em.， 5:133-140 (1994)。反应条件可以选自PEG化领 域已知的或者随后开发的任何反应条件，但是应当避免将会灭活本发明的肽 的条件，诸如温度、溶剂和pH。
通过酰化而来的PEG化一般将导致聚PEG化的本发明肽。连接的键可以 是酰胺。所得产物可以基本上仅有(例如〉95%)单、二或三PEG化的。然 而，可以在一定数量上形成一些具有更高程度PEG化的种类，这依赖于所使 用的具体反应条件。如果需要，可以通过标准纯化技术从混合物(特别是未 反应的种类)中分离出更纯化的PEG化种类，所述标准纯化技术包括透析、 盐析、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和电泳等。
通过烷基化而来的PEG化包括在存在还原剂使，将PEG的末端醛衍生物 与本发明的肽起反应。对于还原性烷基化反应，所选择的聚合物应当具有单 一反应性醛基。例示性的反应性PEG眵是水溶性的聚乙二醇丙醛或者它的单 Cl-C10烷氧基或芳氧基衍生物。参见例如美国专利No. 5,252,714。
7.纯化以生物学方法表达的本发明的肽
依赖于所使用的表达系统，然后通过本领域完善建立的规程来分离所表达的本发明的肽(例如亲和层析、大小排阻层析、离子交换层析)。
表达载体可以编码标签，该标签允许容易地纯化重组生产的嵌合蛋白。
实例包括但不限于载体pUR278 (Ruther et al.，五A仿(9 J. 2:)),其中 将编码本发明肽的DNA连接入载体，与lacz编码区在同一读码框中，从而产 生杂合蛋白；可以使用pGEX载体来表达带有谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的 本发明嵌合蛋白。这些蛋白质通常为可溶性的，而且可以通过对谷胱甘肽-琼脂糖珠的吸附，接着在存在谷胱甘肽时洗脱，而容易地从细胞中纯化。载 体包含用于纯化之后容易地除去标签的切割位点(凝血酶或Xa因子蛋白酶或 者ProScission ProteaseTM(Pharmacia， Peapack, N.J))。
为了增加生产效率，可以将多核苷酸^:计成编码多个单位的本发明肽， 通过酶^f足切割位点分隔。可以切割所得多肽(例如通过适当的酶处理)以回 收肽单位。这可以增加由单一启动子驱动的肽的产量。在适当的病毒表达系 统中使用时，在转录物中内部指导由mRNA编码的每个本发明肽的翻译，例 如通过内部核糖体进入位点即IRES。如而，多顺反子构建物指导单一且大的 多顺反子mRNA的转录，继而指导多个单独多肽的翻译。这种方法消除了多 蛋白的生产和酶促加工，并且可以显著增加由单一启动子驱动的本发明肽的 产量。
可以将包含编码本发明肽的DNA构建物的宿主细胞在适当的生长培养 基中培养，即含有细胞生长所需的营养物的培养基。细胞生长所需的营养物 可以包括碳源、氮源、必需氨基酸、维生素、矿物质和生长因子。任选的是， 培养基可以含有小牛血清或胎牛血清。在一个实施方案中，培养基基本上不 含IgG。通常，生长培养基将选出含有DNA构建物的细胞，通过例如药物选 择或通过DNA构建物上的或者与DNA构建物共转染的选择标志补足必需营 养物缺陷。通常，将培养的哺乳动物细胞在商品化含血清或无血清培养基(例 如MEM、 DMEM)中培养。选择对于所使用的特定细胞系适当的培养基在 本领域普通技术水平之内。
可以在转基因动物中生产本发明的肽，诸如啮齿类动物、牛、猪、绵羊、 山羊或其他非人动物，其基因组中已经掺入了外来基因。因为这种基因存在 于种系组织中，所以其自亲本传给后代。将外源基因导入单细胞胚胎(Brinster et al.,尸rac. A^/.爿cW. t/5L4 82:)。本领域已知产生转基因动物 的方法，包括生产免疫球蛋白分子的转基因学。Wagner et al.,尸rac. Ato/.爿cadSc/. L/5L4 78:); McKnight et al.， Ce〃 34:335 (1983); Srinster et al" 胸匿306:332 (1983); Ritchie et al.，淑匿312:517 (1984); Baldassarre et al., J7ze〃'o炉o/ogy 59:831 (2003); Robl et al., 77zm'og譜/ogy 59:107 (2003); Malassagne et al.， Xen0加m7 /朋to"0w 10(3):267 (2003).
8. 用于筛选和发现结合FcRn并阻断FcRn-IgG相互作用的肽的方法 可以使用噬菌体展示文库来鉴定结合FcRn的肽。噬菌体展示文库可以容
易地产生，参见Smith and Petrenko， C&m./ ev. 87:391 (1997)。或者，可以从 商业来源获得噬菌体展示文库，诸如例如Dyax Corp. (Cambridge, MA)。依赖 于筛选条件，噬菌体可以用各种不同性质来鉴定。为了鉴定结合FcRn (并如 此与IgG竟争FcRn结合)的肽，可以对噬菌体文库筛选对FcRn的结合及与IgG 的竟争。或者，可以通过将噬菌体文库与一种或多种交替受体(alternate receptor)—起温育以便从文库中消除结合交替受体的肽。如此，可以将结合 至交替受体的噬菌体从期望的噬菌体集合中消减掉。通过对结合至FcRn的噬 菌体克隆的DNA测序，可以鉴定能够结合FcRn并抑制IgG-FcRn结合的肽。
鉴定结合FcRn的肽的其他方法的实例包括mRNA展示(Roberts and Szostak, Prac. W加.Jcad 5W. C/5L4 94:1))、基于细胞的展示(Boder and Wittrup, AW.所o&c/z"o/. 15:553 (1997))、及合成肽文库(Lam, A^ft^e 354:82 (1991); Houghten et al" Atoww 354:84 (1991))。
9. 用于测定结合FcRn并阻断IgG:FcRn相互作用的肽的方法
许多方法可以用于评估肽或模拟肽结合FcRn并阻断FcRn:IgG相互作用 的能力。例如，表面等离振子共振(SPR)是本领域公知的用于评估结合情况 的方法(Biacore AB， Uppsala, Sweden)。使用这种方法，将结合配偶体之一 (FcRn或IgG)固定在SPR传感器芯片上，而将另 一种配偶体从芯片上通过， 该芯片监测所得信号。在相同的实验中，将作为IgG和FcRn之间相互作用的 竟争剂待评估的肽从芯片上通过。可以将信号的任何下降解释为该肽阻断 FcRn和IgG之间相互作用的能力的测量。
本领域^^知测定IgG:FcRn相互作用的可能肽抑制剂的其他方法。 一种这 样的方法是96孔板形式的IgG竟争测定法。在这种例示测定法中，将96孔板 上的可溶性人FcRn暴露于IgG和测试肽。通过抗IgG抗体和标准ELISA显色试 剂检测的剩余的被结合的IgG提供了肽阻断FcRn-IgG相互作用的能力的测 量。也可以在细胞上实施阻断IgG-FcRn结合的肽的能力，所述细胞经过编码 人FcRn的DNA转染以开发能够在其细胞表面表达人FcRn的细胞系。可以应 用结合竟争测定法，其中IgG-FcRn结合的肽抑制剂与荧光标记的IgG分子竟 争。可以通过例如标准焚光活化细胞分拣术(FACS)来测量结合至细胞的剩余 IgG水平。
10.本发明的肽的用途
本发明的肽结合FcRn并抑制IgG恒定区的Fc部分结合FcRn，从而导致 IgG分解代谢比没有本发明的肽时的IgG分解代谢增力。。在例示性的实施方案 中，IgG恒定区来自IgGl、 IgG2、 IgG3或IgG4亚类。在特定的实施方案中， IgG恒定区来自IgGi、 IgG2或IgG4亚类。因此，本发明的肽对于治疗任何期 望增加IgG分解代谢的疾病或疾患是有用的。例如，本发明的肽可用于治疗 自身免疫性疾病、炎性病症、具有基于炎症的病因学的心血管疾病(例如动 脉硬化)、移植排斥、和/或移植物抗宿主病(GVHD)。本发明的肽还可用于 ;险测患者或生物学样品(例如体液、组织或细胞样品、细胞培养物上清液) 中的FcRn。本发明的肽还可用于从生物学样品(例如体液、组织或细胞样品、 细胞培养物上清液)中纯化FcRn。
如此，本发明纟是供了调节以不当表达IgG抗体或非期望的IgG量或水平为 特征的病情的方法，包括施用治疗有效量的本发明的肽。在一个实施方案中， 所述病情选自炎性疾病、自身免疫性疾病、或癌症。在其它实施方案中，本 发明提供了通过调控IgG血清浓度来调节病情的方法。在某些实施方案中， 本发明的方法可用于治疗、预防或调节针对治疗性蛋白质的免疫反应，诸如 例如红细胞生成素、溶酶体贝i积酶、或凝血因子诸如例如纤维蛋白原、凝血
酶原、因子v、因子vn、因子vni、因子ix、因子x、因子xi、因子xn、因
子Xin或vonWillebrand因子。在其它实施方案中，本发明的方法可用于治疗、 预防或调节针对基因治疗载体的免疫反应。 a.自身免疫性疾病 本发明的肽可用于治疗自身免疫性疾病，包括但不限于斑秃、强直性脊 柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森氏病(Autoimmune Addison's Disease)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性淋巴细胞 增生综合征(Autoimmune Lymphoproliferative Syndrome, ALPS)、自身免疫性 血小板减少性紫瘕(ATP)、贝切特氏病(Behcet's Disease),大疱性类天疱瘙、心月几病、口炎性腹泻-疱渗才羊皮炎(Celiac Sprue-Dermatitis Herpetiformis)、 'f曼 性疲劳免疫功能障碍综合症(Chronic Fatigue Immune Dysftmction Syndrome, CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(Chronic Inflammatory Demyelinating Polyneuropathy),疤痕性类天疱疮、CREST综合症、冷凝集素病、克罗恩氏 病(Crohn's Disease)、德戈斯氏病(Degos' Disease)、皮肌炎、幼年型皮肌炎 (Dermatomyositis-Juvenile)、盘状狼痴、特发性混合型冷球蛋白血症(Essential Mixed Cryoglobulinemia)、纤维肌痛-纤维肌炎、格雷夫斯氏病(Graves' Disease)、才各画巴二氏病(Guillain画Barr6)、桥本氏曱状A袈炎(Hashimoto's Thyroiditis),特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、 IgA肾病、 胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、美尼尔氏病(M6ni6re's Disease)、混合性结締组织病、多发性硬化、重症肌无力(MG)、天疱疮、寻 常型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿 性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬 化、银屑病、雷诺氏现象(Raynaud's Phenomenon)、莱特尔氏综合征(Reiter's Syndrome)、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦氏综合 征(Sj6gren's Syndrome)、僵人综合征(Stiff-Man Syndrome)、大动脉炎(Takayasu Arteritis),颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、移植排斥、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、 血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽月中病(Wegener's Granulomatosis)。
在一个实施方案中，所述自身免疫性疾病选自大疱性类天疱疮、特发性 血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力(MG)、天疱疮(例如寻常型天疱疮)、 和移植排斥。
在另 一个实施方案}