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桶装水中铜绿假单胞菌检测方法比较.PDF 3页
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现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.11桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较张淑红，吴清平，徐晓可，张菊梅，潘宝怡、彭飞艇（广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,广东省微生物研究所，广东广州510070）摘要：分别采用传统国标GB/T方法、基于OprL基因的PCR方法和环介导等温扩增(LAMP)方法检测桶装水中的铜绿假单胞菌，比较三种方法的检测效果。结果显示，采集的46份市场水样中，用传统GB方法检出了3份阳性样品，检出n率为6.5%，检测时间至少2天；而PCR和LAMP方法都检出4份阳性样品，检出率为8.7%，并且可在24h内报告结果。PCR和LAMP方法与传统方法相比具有快速灵敏等优点，可用于大批量水样的快速检测和结果初筛。c.关键词：铜绿假单胞菌；传统方法；PCR；LAMP文章篇号：11)11-mComparisonofDetectionofPseudomonasaeruginosainBottledWateroZHANGShu-hong,WUQing-ping,XUXiao-ke,ZHANGJu-mei,PANBao-yi,PENGFei-tingc(GuangdongProvincialKeyLaboratoryofMicrobialCultureCollectionandApplication,GuangdongOpenLaboratoryof.AppliedMicrobiology,StateKeyLaboratoryofAppliedMicrobiology(Ministry-GuangdongProvinceJointlyBreedingdBase),SouthChinaGuangdongInstituteofMicrobiology,Guangzhou510070,China)oAbstract:ThreemethodsincludingtraditionalmethodGB/T,PCRassaybasedonOprLgeneandLAMPassaywereusedtodetectthePseudomonasaeruginosainbottledwaterandtheresultswerecompared.Itwasfoundthat3bottledwatersamples(6.5%)wereofpositivedetectedbyGBmethod,while4bottledwatersamplesweredetectedpositivebybothPCRandLAMPmethodswiththepositiverateof8.7%.Asforthetestoftime,thetraditionalmethodneedatleast2daystofinish,comparedtolessthan24husingPCRandnLAMPmethods.Therefore,PCRandLAMPassaysweremorerapidandsensitivethantraditionalmethod,whichmaybeusedforrapidrdetectionoflargequantitiesofwatersamples.eKeywords：PTraditionalMPCR;LAMPd铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）是一种o1材料与方法重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，1.1样品来源和标准菌株m可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾所检测的46份水样为广州市场销售的各类品牌.病[1~3]。近年来，随着全球范围内桶装饮用水消费量桶装饮用水（包括34份矿泉水、2份纯净水和10份w的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的山泉水），样品均在保质期内。报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注1.2主要仪器[4~10]wSIGMA1-15微量离心机、SIGMA3K30台式高速。目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，PCR和环介导等温扩增技术冷冻离心机、PE2400PCR仪、电泳仪、UVⅠ凝胶成w（LAMP）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快像系统、TOMYES-215日本全自动灭菌、移液器、恒速检测中。本文通过对市场销售的桶装水进行抽样检温培养箱、FMC-1000恒温水浴锅、超净工
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厦门敏测实验器材有限公司
铜绿假单胞菌检测仪器
参考价格:<font color='#FF 元
铜绿假单胞菌检测用仪器
国标《包装饮用水》(GB)在微生物限量上，取消了菌落总数和霉菌、酵母等致病菌的限量要求，仅保留了大肠菌群指标，同时增加了包装水产品中最常见的环境污染微生物&&铜绿假单胞菌指标。 《包装饮用水》 GB中铜绿假单胞菌检验的方法按照GB/T 8538 执行。 铜绿假单胞菌检测仪器原理：采用滤膜法。将250ml水样用孔径为0.45&m的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂选择性培养基上，于36℃&1℃恒温箱中培养48h，典型菌落能够在CN琼脂选择性培养基上生长并产生绿脓菌素或者能够在CN琼脂选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外灯（360&20）nm照射下能产生荧光、能利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。 铜绿假单胞菌检测仪器：不锈钢过滤系统、紫外灯、36℃&1℃恒温箱、高压灭菌锅等。 常用三联不锈钢过滤系统：包含过滤系统支架，滤杯，燃烧架，真空泵。 另外还有2联，6联等规格 & 铜绿假单胞菌检测仪器--以三联不锈钢过滤系统为例组成： 三联不锈钢过滤系统MFS-3A-250-k 气液两用隔膜真空泵(直排泵) 火焰灭菌喷枪 滤膜 滤膜专用镊
铜绿假单胞菌检测用仪器（三联不锈钢过滤系统12350元）。优惠信息请来电咨询。
铜绿假单胞菌检测用仪器配套产品：紫外灯。
铜绿假单胞菌检测传统国标方法： & & & & &参 考 《饮 用天然矿泉水检验方法》GB/T 铜绿假单胞菌-滤膜法进行检验。 具体步骤：将250 mL水样用孔径为0.45 &m的滤膜过滤，并将滤膜移至CN 琼脂选择性培养基上，36 ℃&1℃恒温培养48 h。铜绿假单胞菌在CN琼脂出现的菌落形态有3 种：有脓青素产生的蓝/绿色、无荧光的菌落，直接判为检出；产生有荧光素的黄色菌落，进一步做产氨(乙酰胺肉汤)试验确认，产氨试验阳性的判为检出；产生红脓素的红褐色、无荧光的菌落，要继续做氧化酶试验、产氨试验、荧光(金氏B 斜面)试验，若氧化酶阳性、产氨试验阳性结果判为铜绿假单胞菌检出。
铜绿假单胞菌检测用除仪器外还需要铜绿假单胞菌培养基。供应陆桥环凯品牌铜绿假单胞菌检测培养基等微生物配套产品。更多产品请来电咨询。
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DS 268-1990&&水质．测定水中铜绿假单胞菌．膜过滤法
DS 268-1990&&水质．测定水中铜绿假单胞菌．膜过滤法
DS 268-1990
水质．测定水中铜绿假单胞菌．膜过滤法
Water quality. Determination of Pseudomonas aeruginosa in water. Membrane filtering
丹麦语版, 中文版, 英文版
Denne standard specificerer en metode til isolering og be-stemmelse af Pseudomonas aeruginosa i vandpr?ver ved en membranf iltermetode.
Metoden kan bruges til alle typer vand under den foruds?t-ning, at m?ngden af opslemmede partikler ikke forhindrer en-ten vand eller n?ringsstoffer i at passere gennem membran-filtret.
纸质版或者PDF电子版（用Acrobat Reader打开）或Word版本doc格式
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铜绿假单胞菌检测（滤膜法）
录入时间: 10:30:42
来源：青岛海博生物
将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒
温箱中培养48h，能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。
培养基和试剂
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（配制好之后低温避光保存）
金氏B（King’s&B）培养基（配制好之后低温避光保存）
乙酰胺肉汤（用蒸馏水配制，配置好之后低温避光保存）
氧化酶试剂
钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）
设备和仪器
玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟
恒温培养箱：36℃±1℃
紫外灯：波长应为360±20nm
滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μｍ（处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15&min。前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。建议使用一次性无菌滤膜。）
显微镜：10×～100×
冰箱：0℃～8℃
操作流程图
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