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免疫比浊试剂稳定性不好
最近在做免疫增强比浊法，新制备好的胶乳试剂调试好后，物理吸附和化学偶联两种包被方式均是放置于4℃，1d和2d生化仪分析吸光度基本没有变化，但是第3d后下降比较明显，大概下降40%左右，是什么原因呢？我用的储存液含有pH8.5的Gly、BSA、海藻糖、防腐剂
还有，优化好的条件在37℃放置7d不下降，但是大量制备时，吸光度变化比较明显，是什么原因造成呢？
:cry::cry::cry::cry::cry:
你是说微球原液么？
还是说标记好的微球-抗体？
你说是购买的商品化微球原液有无沉淀？还是标记上抗体之后微球有无沉淀？
标记好的微球抗体，有时候不稳定会沉淀下去，上清微球浓度就低了，还有可能是你的储存介质对于该抗体来说不适合吧
标记好的抗体没有沉淀，存放1个月以上，而且测其吸光度是没有变化的，但是测定校准品就一直在下降
你是怎么做的呀，我做的交联抗体后，友絮状沉淀呢！
看不到，可以交流一下吗？
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临床免疫学
一、选择题
【A1型题】
1、免疫胶乳比浊法的最大优点是：
A、提高免疫浊度测定的特异性
B、提高免疫浊度测定的灵敏度
C、减少抗原的用量
D、减少抗体的用量
E、减少伪浊度的形成
2、在免疫散射比浊中， 当颗粒直径小于入射光波长的1/10时，称为：
A、Rayleigh散射
B、Mie散射
C、Debye散射
D、定时散射
E、速率散射
3、在免疫散射比浊中，称为Debye散射的颗粒直径大小应是：
A、小于入射光波长的1/10
B、等于入射光波长
C、大于入射光波长
D、大于入射光波长的1/10到接近入射光波长
E、大于入射光波长的1/100
4、散射比浊法中根据计算公式，下列哪种说法是正确的：
A、减小抗原-抗体复合物的体积可提高检测敏感度
B、减小散射夹角可提高检测敏感度
C、缩短入射光波长可提高检测敏感度
D、在抗体量恒定时，抗原量与散射光信号成正比
E、在抗体量恒定时，抗原量与散射光信号成反比
5、速率散射比浊法是测定单位时间内：
A、抗原-抗体复合物形成的最长时间段
B、抗原-抗体复合物形成的最快时间段
C、抗原-抗体复合物形状最大的时间段
D、抗原-抗体复合物形成的最稳定时间段
E、抗原-抗体复合物形成结束的时间段
6、在速率散射比浊法中，加入PEG的目的是：
A、减缓抗原抗体复合物的形成
B、加速抗原抗体复合物的形成
C、减少伪浊度的形成
D、降低抗原抗体的亲和力
E、提高抗原抗体的亲和力
7、定时散射比浊分析法中，抗原过量检测方法是：
A、在抗原抗体反应的最佳阶段进行，观察散射光信号值是否在预设阈值内。
B、在抗原抗体反应的第二阶段进行，观察散射光信号值是否在预设阈值内。
C、在抗原抗体预反应阶段进行，观察散射光信号值是否在预设阈值内。
D、在抗原抗体反应完成后再加入标准抗原。
E、在抗原抗体反应完成后再加入标准抗体。
8、在速率散射比浊法中，抗原过量检测方法是：
A、在抗原抗体预反应阶段进行
B、在抗原抗体反应的第一阶段进行
C、在抗原抗体反应的第二阶段进行
D、在抗原抗体反应完成后再加入相同抗体
E、在抗原抗体反应完成后再加入相同抗原
9、下述时间分辨荧光免疫测定过程中，错误的是：
A、固相包被抗体和抗原结合
B、加入Eu3+螯合抗体形成固相包被抗体-抗原-Eu3+螯合抗体复合物
C、洗涤、分离
D、加入氧化剂（H2O2）和pH纠正液使Eu3+解离
E、游离的Eu3+在激发光照射下，发出荧光
10、.时间分辨荧光免疫测定过程中，使Eu3+解离的方法是：
A、加入碱性磷酸酶
B、加入辣根过氧化物酶
C、加入酸性增强液
D、加入氧化剂（H2O2）和pH纠正液
E、加入增强剂3-氯4-羟基乙酰苯胺
11、时间分辨荧光免疫测定中，最常用的镧系元素是：
A、钐（Sm3+）
B、钕（Nd3＋）
C、镝（Dy3+）
D、铽（Tb3+）
E、铕（Eu3+）
12、荧光偏振免疫测定的特点是：
A、待测抗原浓度高，偏振荧光强度强
B、待测抗原浓度高，偏振荧光强度弱
C、待测抗原浓度低，偏振荧光强度弱
D、荧光素标记的小分子抗原在溶液中旋转速度慢，偏振荧光强度强
E、荧光素未标记的小分子抗原在溶液中旋转速度慢，偏振荧光强度强
13、与免疫比浊法密切相关的因素有：
A、抗原抗体比例
B、抗体的质量
C、增浊剂的使用
D、反应溶液的酸碱度
E、以上都是
14、免疫速率散射浊度测定法的基本原理是：
A、抗原抗体发生特异性反应形成免疫复合物颗粒。
B、光沿水平轴照射时，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射。
C、散射光的强度与复合物的含量呈正比。
D、该法是测定单位时间内抗原抗体反应复合物形成的速率。
E、以上都是。
15、镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物的优点是：
A、镧系元素发光稳定
B、荧光寿命长
C、stokes位移大
D、激发光谱带较宽，
E、以上都是
16．定时散射比浊分析采用的是：
A、免疫扩散反应与散射比浊分析相结合的技术
B、免疫吸附反应与散射比浊分析相结合的技术
C、免疫测定反应与散射比浊分析相结合的技术
D、区带免疫分析与散射比浊分析相结合的技术
E、蛋白区带电泳与免疫沉淀相结合的技术
17． 电化学发光免疫分析（ECLIA）三联吡啶钌NHS酯产生的位置是：
A、 在气相反应中进行
B、 在液相反应中进行
C、 在固相反应中进行
D、 在电极表面进行
E、 在流动池中进行
18． 化学发光免疫分析主要用于检测：
体液中大分子蛋白质
体液中中等分子蛋白质
体液中小分子蛋白质或多肽
淋巴细胞活性分析
化学毒性分析
19． 时间分辨荧光免疫分析所用的标记物是：
20. 关于速率散射比浊法描述正确的是：
A、 散射光强度与复合物的含量成反比
B、 采用的是终点比浊
C、 测定的是抗原抗体反应的第一阶段
D、 测定的是抗原抗体反应的第二阶段
E、 每项检测时间约要6min完成。
21. 为了保证速率散射测定分析的准确性和精确度，该类型仪器中特有的设计是：
A、 抗体过量检测系统
B、 抗原过量检测系统
C、 样本自动稀释系统
D、 信号处理系统
E、 数字转换系统
22. 免疫测定的基础是：
A、 免疫原和抗血清的制备
B、 沉淀反应
C、 凝集反应
D、 抗原抗体的特异性结合反应
E、电解质环境
23. 化学发光免疫分析（CCIA）的标记物为：
HRP标记抗体或抗原
ALP标记抗体或抗原
吖啶脂类标记抗体或抗原
三联吡啶钌标记抗体或抗原
FITC标记抗体或抗原
化学发光酶免疫分析（CLETA）的发应中对鲁米诺和过氧化氢起催化作用的酶是：
E、 β-Gal
25． 微粒子化学发光免疫分析(MLIA)中，作用于发生底物三氧乙烷的标记物是：
D、 三联吡啶钌
【A2型题】
26．下述吖啶酯标记化学发光免疫分析过程中，错误的是：
A、磁性微粒上的抗体与待测抗原结合
B、再加吖啶酯标记抗体形成固相包被抗体-抗原-吖啶酯标记抗体复合物
C、洗涤、分离
D、加入酸性增强液
E、吖啶酯发光，信号检测
27． 下列哪个不是散射比浊分析中的关键因素：
A、入射光的强度
B、入射光的波长
C、测定的过程
D、测定夹角
E、抗原抗体复合物的大小
【B1型题】
（28-30题共用备选答案）
B、吖啶酯类
D、三联吡啶钌
28． 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪常用的发光底物为
29． 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪常用的发光底物为
30． 电化学发光免疫测定中常用的电子供体为
时间分辨荧光免疫测定
荧光偏振光免疫分析
电化学发光免疫分析
化学发光酶免疫分析
免疫胶乳比浊法
三、简答题
1. 什么是免疫检验自动化？应用那些技术？优点是什么？
2. 免疫浊度分析的基本原理？
3．简述速率散射比浊分析的基本原理及其优点？
4. 定时散射比浊法的测定原理？其抗原过量检测与速率散射比浊法有什么不同？
5. 全自动酶免分析仪有那些部分的组成？优点是什么？
一、选择题
二、名词解释
1. 时间分辨荧光免疫测定：利用镧系元素铕螯合物被激活后产生的特异荧光比一般的荧光长，因此，待短寿命的非特异本底荧光衰退后再测定长寿命阳性荧光信号，称为时间分辨。
2. 荧光偏振光免疫分析：是一种利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与荧光标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比。
3. 电化学发光免疫分析：是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光两个部分。在该反应中N-羟基琥珀酰胺（NHS）与三丙胺（TPA）两种电化学活性物质可同时失去电子发生氧化反应，由激发态回复到基态的过程中发射光子（hv），这一过程中在电极表面的循环反应产生多个光子，使光信号增强。
4. 化学发光酶免疫分析：是采用以催化反应参与发光的酶如辣根过氧化物酶（HRP）作为标记物，标记检测用的抗体或抗原，待测样本与检测试剂进行免疫反应后，形成的酶标记抗原-抗体复合物，其结合在复合物上的酶对鲁米诺-过氧化氢发光底物体系发生催化作用，产生发光效应。
5．免疫胶乳比浊法为一种带载体的免疫比浊法。原理是用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚，使浊度加大，提高免疫浊度测定的灵敏度。
三、简答题
1．什么是免疫检验自动化？应用那些技术？优点是什么？
答：免疫检验自动化是将免疫学检验过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，仪器自动化进行。
自动化免疫分析仪都使用一种或两种免疫分析技术，如：酶联免疫分析技术、生物素-亲合素放大技术、化学发光分析技术、荧光偏振免疫测定技术、时间分辨荧光免疫测定技术、电化学发光技术等，使免疫检验手段更先进、方法更可靠、测定更快速、结果更准确、灵敏度达到ng甚至pg水平，可与放射免疫分析技术相媲美。
2．免疫浊度分析的基本原理？
答：免疫浊度分析属液相沉淀试验，基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
3．简述速率散射比浊分析的基本原理及其优点？
答：速率散射比浊分析是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的速度（不是免疫复合物累积的量），连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，即动态的速率散射比浊法。
抗原与抗体混合后的瞬间便引发反应，在抗体过量的前提下，抗原抗体反应速度由慢到快，单位时间内形成的免疫复合物不断增多，随后逐渐减慢，连续动态监测此过程，可发现在某一单位时间内抗原抗体反应速度最快、免疫复合物形成量最多、散射光强度最大，即为所谓的速率峰。
速率散射比浊分析，测定的是抗原抗体反应的第一阶段，其优点是：快速、灵敏、可检测微量样本，由于该方法基本不受本底散射信号的干扰，检测的精密度大大提高。
4．定时散射比浊法的测定原理？其抗原过量检测与速率散射比浊法有什么不同？
答：定时散射比浊法测定的原理是，在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原后反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。
定时散射比浊法测定抗原过量是在抗原抗体预反应阶段进行，将少量（十分之一）标本与一定量抗体混合，在预反应时间段(7.5s～2min)，抗原抗体复合物产生的散射光信号值在预设阈值内，提示标本中待测抗原浓度合适，可继续进行测定。若超过预设阈值，说明抗原过剩，应将标本适当稀释后再测定。
而速率散射比浊法测定抗原过量是在规定的时间内等抗原抗体全部反应完，无游离抗原存在。此时，再次加入已知的相同抗原，该抗原与剩余游离抗体结合形成复合物，可出现第二个速率峰值信号，由此证明第一次速率峰值信号是全部由待测抗原产生的。若加入已知相同抗原后不出现第二速率峰，表明反应介质中已无游离抗体存在，说明待测标本中抗原浓度过高，第一速率峰值信号可能仅由部分的待测抗原产生，其测定结果不准确，提示应将待测标本进一步稀释，重新进行测定。
5．全自动酶免分析仪有那些部分的组成？优点是什么？
答：全自动酶联免疫分析仪是由多个模块组成，包括条形码识别系统，加样系统，温育系统，液路系统，洗板系统，酶标板读数仪，自动装载传递系统，计算机管理和信息系统等。
优点是用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、酶标板读数和结果打印全部自动化。其结果是减轻了劳动强度，缩短了试验时间，提高了工作效率，为全面实现实验室自动化打下了基础。和“颗粒增强散射免疫比浊法”相关的论文
颗粒增强散射免疫比浊法
Cystatin C(Cys C)是近年来研究发现的一种特异性高、准确性好、较肌酐清除率更为敏感的评价肾小球滤过率的新指标.Cys C能自由通过肾小球滤过膜,在近曲小管几乎被完全重吸收,然后完全分解代谢,不再重新回到血液循环中去,同时肾小管也不分泌,所以在血液中的浓度较为恒定,成为反映肾小球滤过率的灵敏指标.常用颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)和颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)检测Cys C,操作简单、速度快,在儿科疾病、糖尿病、心血管疾病、肿瘤化疗及肾移植后评估肾小球滤过率等方面具有很高的临床价值.
Cystatin C（Cys C）称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，是一种非糖基化蛋白，分子量为13．359kDa，由有核细胞产生。在人体大部分组织中稳定表达，广泛存在于各种体液中，在脑脊液和精液中的浓度最高，尿液中最低。目前国内外测量cysC的主要方法为颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）和颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）。国外多数的研究认为健康人血CysC浓度在1mg／L以下，男女差别不显著；国内一项对年龄在17岁～60岁之间的59例健康男性和57例健康女性的检测（PETIA）发现，正常成人血浆CysC浓度95％可信区间的参考范围分别为：男性0．62～0．91mg／L和女性0．52～0．83mg／L，两性间有统计学差异。上世纪80年代中期瑞典学者Simonsen等开始发现Cys与肾小球滤过率的相关性较好，以后的研究观察到CysC不仅仅反应肾小球滤过率，而且还有其他临床意义。本文就CysC的临床应用作一综述。
目的了解颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）和颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）结果的相关性，为不同的方法学检测血清CysC是否具有一致性提供参考依据。方法按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）EP9-A文件进行评估，将测得的数据进行相关回归分析，计算2种方法间的偏倚。结果PENIA和PETIA测定CysC的相关方程为YPETIA=1．352XPENIA-0．009，相关系数（r）=0．976。结论这2种方法测定血清CysC有良好的相关性。当实验室内同一项目存在2套以上分析系统检测时，应对其进行对比分析和偏倚评估，为室间评价结果提供参考依据。
Cystatin C(Cys C)是近年来研究发现的一种特异性高、准确性好、较肌酐清除率更为敏感的评价肾小球滤过率的新指标．Cys C能自由通过肾小球滤过膜，在近曲小管几乎被完全重吸收，然后完全分解代谢，不再重新回到血液循环中去，同时肾小管也不分泌，所以在血液中的浓度较为恒定，成为反映肾小球滤过率的灵敏指标．常用颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)和颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)检测Cys C，操作简单、速度快，在儿科疾病、糖尿病、心血管疾病、肿瘤化疗及肾移植后评估肾小球滤过率等方面具有很高的临床价值．
半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C）又名胱抑素C或γ-痕迹蛋白，测定cystatin C的方法有很多，但是许多传统方法如放射免疫法（RIA）、荧光免疫法（FIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）等检测均属于非均相免疫测定，难以使用自动化仪器进行。为此，本文选择颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）进行初步评价，该方法采用特异cystatin C抗体包被聚苯乙烯粒子做自动均相免疫分析.
目的探讨血清胱抑素C（Cys-C）的测定方法及健康人血清Cys-C的参考区间。方法采用颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）,对436例健康人进行血清Cys-C水平测定。结果健康人血清Cys-C水平为0.876mg/L,标准差0.101;批内变异系数1.21%,批间变异系数3.60%,回收率99.8%。血清Cys-C水平与年龄、性别无相关性。结论沧州地区健康人群血清Cys-C的参考区间为0.614～1.218mg/L,该法准确、灵敏、稳定、简便。
目的对颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）进行方法学评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A、EP6-A、EP9-A及EP7-P文件对PETIA测定血清Cys C的精密度、可报告范围、方法学比较及干扰实验进行评价和比较。结果PETIA的低水平样本批内变异系数（CV）为1.34%、批间CV为2.19%、日间CV为1.82%、总CV为2.56%;高水平样本批内CV为1.15%、批间CV为1.40%、日间CV为2.23%、总CV为2.58%。可报告范围为0.44-4.46 mg/L。PETIA与颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）呈显著相关[决定系数（r^2）=0.997 2,P〈0.01]。血红蛋白（Hb）〈5 g/L、三酰甘油（TG）〈12 mmol/L、总胆红素（TB il）〈150μmol/L时,PETIA测定Cys C高、低水平样本的干扰值均在干扰限度值（1.96s）范围内。结论PENIA具有良好的重复性,与PENIA有良好的相关性,抗干扰能力较强。因此PETIA是测定血清Cys C较理想的方法,可应用于临床检测。
目的：探讨急性肾损伤（AKI）危重患者由传统内生肌酐清除率（CCr）测定和经Cockcroft-Gault公式血肌酐估测内生肌酐清除率（ECCr）的相关性，及对连续肾替代治疗（CRRT）开始时机评估作用。方法：急性肾损伤20例， APACHE II评分15.6±7.3分；入科时即留置尿管，导尿后弃去之前尿液，尿管置入后留取24h尿液，混匀后取5mL送检并计总量。入科后及次日采外周血3mL两份送检血清肌酐（SCr）、胱抑素C（Cys-C）。结果：全组血清肌酐（0h）189.6±37.5μmmol/L、（24h）258.4±43.6μmmol/L，CCr24.1±4.8 mL/min、ECCr （0h）32.2±6.4 mL/min、（24h）28.6±7.4 mL/min。且按性别分组后与全组病例结果相比差异无统计学意义。全组：ECCr（0h）与传统CCr相比ICC为0.7246，但CCr与ECCr（24h）间ICC为0.8731。其中男性：ECCr（0h）与传统CCr相比ICC为0.6941，但是CCr与ECCr（24h）间ICC为0.9032；女性ECCr（0h）与传统CCr相比ICC为0.7124，但CCr与ECCr（24h）间ICC仅为0.9106。各时点Cys-C与SCr呈明显线性正相关。结论：本研究结果显示CCr与ECCr（24h）间具有较好的一致性，经性别校正后其值与性别不相关；而且ECCr方法简便易行，有助于初步评测施行CRRT干预时机。
金月芽期刊网 2017}