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TOP10感受态细胞说明书
来源:生物谷
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TOP10 感受态细胞说明书
货 号：C1200
规 格：10&100ul / 20&100ul
保 存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
产品简介：
本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存六个月转化效率不发生改变。
基因型：F_ mcrA&D(mrr-hsd RMS-mcrBC) &80 lacZ&DM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139&D(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG 特 点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中&80 lacZ&DM15基因的产物可与pUC载体编码的&-半乳糖苷酶氨基端实现&-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）
1，将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
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JM109，DH5a，BL21，TOP10等感受态的区别
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3秒自动关闭窗口产品名称: TOP10 Chemically Competent Cell Top10化学感受态细胞
价格（元）
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运输与保存方法
干冰运输；感受态细胞℃保存；质粒℃保存。
）本产品应保存在℃，不可反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。
）本产品在冰中解冻时间不宜过长，感受态刚化冻时转化效率最高。
）本产品使用传统转化方法转化效率约，使用快速转化方法转化效率约。
使用方法（快速转化方法）
）取感受态细胞冰浴融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为，融解后的感受态不建议二次使用。所加体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
）向感受态细胞悬液中加入目的，轻轻旋转离心管混匀，冰浴静置（传统：）。
）℃水浴中热激，然后快速将管转移到冰上，静置。（热激时间不要超过）
）向感受态中加入左右不含抗生素的或培养基，混匀（传统：℃摇床温育）。
）将全部菌液涂布至培养板中，℃培养。
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第十课 氯化钙法制备感受态细菌 质粒DNA与外源DNA的连接反应
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