高效液相色谱法检测去氧氟尿苷注射液有关物质
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操作简便、快速，1本试验采用液相色谱法测定去氧氟尿苷注射液中的有关物质。测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。2流动相的选择上笔者比较了甲醇-水系统、乙腈-水系统、甲醇-磷酸盐缓冲液系统、乙腈-磷酸盐缓冲液系统等，发现去氧氟尿苷与有关物质不能很好地分离，且色谱图中主成分峰有明显的脱尾现象，方法不合理。后来试加入醋酸缓冲液，结果能使去氧氟尿苷与有关物质达到良好的分离，并消除了主峰脱尾现象。
操作简便、快速，1本试验采用法测定去氧氟尿苷注射液中的有关物质。测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。2流动相的选择上笔者比较了甲醇-水系统、乙腈-水系统、甲醇-磷酸盐缓冲液系统、乙腈-磷酸盐缓冲液系统等，发现去氧氟尿苷与有关物质不能很好地分离，且色谱图中主成分峰有明显的脱尾现象，方法不合理。后来试加入醋酸缓冲液，结果能使去氧氟尿苷与有关物质达到良好的分离，并消除了主峰脱尾现象。3主药的稀释溶剂选择上，考虑到去氧氟尿苷易溶于水，笔者比拟了用流动相和水作为溶剂进行了检测，发现两种供试样品的色谱图中，主峰与有关物质都能达到很好的分离，且检测结果无明显差异。为方便操作和节约成本，笔者选用纯化水作为稀释溶剂。流速1.0ml/min检测波长269nm进样量20&l结果在该色谱条件下，摘要】目的建立检测去氧氟尿苷注射液有关物质的方法。方法采用CromasilC18色谱柱（4.6mm150mm5&m以水-乙腈-醋酸缓冲液（pH6.1即取醋酸钠10.92g加水100ml用冰醋酸调至pH6.为流动相。去氧氟尿苷注射液在5.3535.22&g/ml浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.9999n=5结论本法灵敏、准确、简便，可作为去氧氟尿苷注射液有关物质的检测方法。关键词】去氧氟尿苷；注射液；有关物质；高效液相色谱法肿瘤组织内受嘧啶核苷磷酸化酶的作用转化为游离的5-氟尿嘧啶而显示抗肿瘤作用。由于这种酶的活性在肿瘤组织内较正常组织为高，&去氧氟尿苷（Deoxifluridin为5-氟尿嘧啶的衍生物。且专一性强，故本品在肿瘤内转化速度快、浓度高，对肿瘤具有较高的选择作用。临床用于胃癌、大肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、膀胱癌。去氧氟尿苷疗效高，毒性小，一个具有特色的国际公认的较好的抗癌药。本研究采用HPLC法，建立了去氧氟尿苷注射液中有关物质的测定方法。1仪器与试药自动进样器，Agilent1100高效（四元泵。紫外检测器，惠普色谱工作站，真空脱气机）美国安捷伦公司）去氧氟尿苷对照品（江苏省药品检验所标定）含量99.6%供试品（自制，批号：060116甲醇（色谱纯）其余试剂为分析纯，水为。2方法与结果去氧氟尿苷的保管时间约为4.3min理论板数不低于1000去氧氟尿苷与相邻物质峰的分离度大于1.52.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18（4.6mm150mm5&m流动相：水-乙腈-醋酸缓冲液（pH6.1即取醋酸钠10.92g加水100ml用冰醋酸调至pH6.流速：1.0ml/min检测波长：269nm进样量：20&l柱温：25℃。上述色谱条件下。用水稀释制成约含去氧氟尿苷0.1mg/ml供试品溶液，2.2专属性试验精密量取去氧氟尿苷注射液适量。进样20&l记录色谱图。另精密称取去氧氟尿苷对照品适量，用水溶解并稀释制成浓度为0.1mg/ml对照品溶液，进样20&l记录色谱图。取空白溶剂水及流动相直接进样20&l记录色谱图。由色谱图可见，溶剂对去氧氟尿苷测定无干扰。加水适量，2.3有关物质线性关系试验精密称取于105℃干燥至恒重的去氧氟尿苷对照品约50mg于50ml量瓶中。振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1.0ml1.0ml1.0ml1.0ml0?5ml依次置于25ml50ml100ml200ml200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取各浓度溶液20&l注入，记录峰面积（A以峰面积A对浓度C进行线性回归，得回归方程为A=3r=0.9999n=5线性范围为5?3535.22&g/ml稀释至约4&g/ml进样20&l测定色谱系统基线。按信噪比为3测得去氧氟尿苷检测限为36ng/ml2.4最低检测限取&线性关系&项下的对照品溶液。精密称定，2.5精密度试验取去氧氟尿苷对照品适量。加水溶解并稀释至约0.1mg/ml溶液，进样20&l重复进样6次，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.46%标明该溶液进样精密度良好。于室温下放置h后，2.6稳定性试验取上述精密度试验项下的样品溶液。分别进样20&l峰面积的RSD为0.53%标明该溶液12h内稳定。按处方比例加水制成80%100%120%共3种浓度的溶液，2.7回收率的测定精密称取去氧氟尿苷对照品适量。按上述色谱条件测定。以加入量与测得量的比值，计算回收率。结果低、中、高3种浓度溶液的回收率分别为99.8%100.1%99.6%RSD分别为0.56%0.48%0.62%平均回收率（n=9为99.8%加水稀释至刻度，2.8去氧氟尿苷注射液中有关物质的检测精密量取去氧氟尿苷注射液适量（约相当于主药25mg置于250ml量瓶中。摇匀，作为供试溶液；精密量取供试溶液1ml置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20&l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%25%另精密量取上述两种溶液各20&l分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰峰面积之和，不得大于对照溶液主峰面积1.0%3讨论
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iPhone8 CAD设计图流出:全面屏+垂直双摄像头。离子选择电极法测定氟离子
0.51.5 mg L-145%0.5 mg L-150%60%0.51.0 mg L-130%40%19761 mg L-1
0.1 moL L-1NaF0.1 moL L-1NaClAg-AgCl
VsCsF-mlmol L-1E = E2 - E1mVS　　摘 要 使用氟离子选择性电极在常温下、在pH值为5.0～5.5的柠檬酸钠盐为掩蔽剂的总离子调节缓冲溶液（TISAB）中" />
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氟离子选择性电极法测定口腔清洁护理液中氟含量的研究
　　摘 要 使用氟离子选择性电极在常温下、在pH值为5.0～5.5的柠檬酸钠盐为掩蔽剂的总离子调节缓冲溶液（TISAB）中，对口腔清洁护理液中微量氟含量进行测定，测定方法的精密度和回收率符合要求（RSD为1.74%，回收率为94.9%～101.3%）。该方法具有选择性好、简单、易于验证和推广等优点。 中国论文网 /1/view-5032135.htm　　关键词 氟离子选择性电极 氟测定 　　前 言 　　氟化物在自然界中广泛存在，也是人体必需的微量元素，人在日常生活中过多或过少摄入氟离子都对人体有害。适量的氟有防龋作用[1]，但过量会导致急慢性中毒[2，3]。Olivier Barbier[4] 等人曾经报道氟即使在低剂量时仍有细胞毒性。一些研究表明，氟可诱导氧化应激和调节细胞内氧化还原平衡、脂质过氧化、蛋白质羰基化以及改变基因的表达，导致细胞凋亡。因此，含氟产品的限量得到严格控制，其中口腔用品的限量在我国化妆品卫生标准中规定为不得超过0.15% 。 　　牙膏中氟化物的测定方法主要有氟离子选择电极法、气相色谱法[5]、离子色谱法[6]、分光光度法[7]。离子色谱法和气相色谱法虽灵敏但设备昂贵、操作复杂、不易普及；比色法适用于氟含量较低的样品，且误差比较大。氟含量大于5mg/L时，可以用硝酸钍滴定法，但要进行蒸馏，比较麻烦。本文介绍一种氟离子选择性电极法，该方法选择性好、操作简单、快速、灵敏、适用范围宽。国家标准[8]对牙膏中氟的测定和国家轻工业行业标准[9]对口腔清洁护理液中氟的测定也采用的是氟离子选择性电极法。牙膏中的氟可分为游离氟、可溶氟和总氟，但主要是游离氟起主要作用[10]。对牙膏中游离氟的检测研究国内比较多[11～13]，但是对其他口腔用品中微量氟的检测研究几乎没有。因此，本文针对氟含量极低的口腔清洁护理液的氟含量进行测定，并以游离氟检测为代表进行结果讨论。 　　1 氟离子选择性电极法测定氟离子原理及介绍 　　离子选择性电极（ISE）是指对某种特定的离子具有选择性响应，氟离子选择电极是一种以氟化镧（LaF3）单晶片为敏感膜的传感器。由于单晶结构对能进入晶格交换的离子有严格的限制，故有良好的选择性。LaF3晶格中存在晶体缺陷空穴，由于该空穴的大小、形状和电荷分布特点只能允许F离子进入空穴，其它离子不能进入，因而LaF3晶体膜对氟离子有选择性响应。 　　用氟离子选择性电极测定氟时，以氟离子选择电极作指示电极，以Ag-AgCl电极作参比电极，组成测量电池：氟离子选择性电极︱试液‖Ag-AgCl电极。 　　电池电动势为 E=K-0.0592logaF-，即电池电动势与试液中氟离子活度的对数成正比。在极稀的溶液中，活度系数接近于1。再加入总离子强度调节缓冲液，使溶液总离子强度为定值时，浓度可以替代活度[14]。氟离子选择性电极一般在1～10-6mol/L范围内符合能斯特响应。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器 　　万通888自动电位滴定仪，氟离子选择性电极（四川万通补充其生产厂商）（检测限10-6mol/L），SARTORIUS BP211D电子天平。 　　2.2 试剂 　　所有试剂为分析纯，实验用水为去离子水。 　　2.2.1 氟离子标准溶液 精确称取0.1105g基准氟化钠（105℃干燥2h），用去离子水溶解并定溶至500mL，摇匀，贮于聚乙烯塑料瓶内备用。该溶液浓度为100mg/L。 　　2.2.2 TISAB缓冲溶液 100g柠檬酸三钠，60mL氯化钠，30g氢氧化钠，用水溶解，并调节pH=5.0～5.5，用水稀释到1000mL。 　　2.3 样品 　　市售某品牌口腔清洁护理液。 　　2.4 方法 　　25℃环境温度下，采用轻工业行标QB/T 。 　　2.4.1 标准曲线绘制 精确吸取0mL，0.01mL，0.05mL，0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0 mL，2.5mL氟离子标准溶液（对应浓度分别为0 mg/L，0.02 mg/L，0.1mg/L，0.2mg/L，0.4mg/L，0.6mg/L，0.8mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L，3.0mg/L，4.0mg/L，5.0mg/L），分别移入50mL容量瓶中，分别吸入柠檬酸盐缓冲液（按2.2.2方法制备）5mL，用去离子水稀释至刻度，转入50mL塑料烧杯中，在磁力搅拌下测量各电位值，记录并绘制E-（logC）标准曲线（见图1）（由于口腔护理液中氟含量极低，因此标准曲线绘制扩展到低浓度区域）。 　　2.4.2 样品游离氟的测定 吸取试液10mL置于50mL容量瓶中，加柠檬酸盐缓冲液5mL，用去离子水稀释至刻度，转入50mL塑料烧杯中，在磁力搅拌下测量其电位值，在标准曲线上查出相应的氟含量，从而计算出浓度。 　　3 结果与讨论 　　3.1 方法结果 　　3.1.1 方法的精密度（见表1） 　　3.1.2 方法的准确度（见表2） 　　3.2 影响因素 　　3.2.1 pH影响 取0.5mL贮备液移入50mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，转入50mL塑料烧杯中，用1mol/L盐酸和1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值从4.0～9.0变化（见表3），发现 pH<5时，溶液中会发生下述弱酸配位反应：2F-+H+=HF+F-=HF2-，使溶液中的F-减少，会影响电极的灵敏度，使分析结果偏低。这是由于氟电极 　　只对F-响应对HF或HF2-无响应，而且氟电极的氟化镧电极膜会增大被溶解，影响测定。pH值过高，易引起单晶膜中La3+的水解，形成La（OH）3，影响电极的响应。用氟离子选择电极测量F-时，最适宜pH值范围为5～6。
　　3.2.2 温度影响 取0.5mL贮备液移入50mL容量瓶中，加柠檬酸盐缓冲液5mL，用去离子水稀释至刻度，转入50mL塑料烧杯中，分别用恒温水浴30℃，40℃，50℃，60℃，70℃下加热10min，立即在磁力搅拌下分别测量电位值（见表4）。 　　结果表明温度在30～80℃水浴加热后，电位值基本一致，因此一般在常温下试验即可。另有文献报道，温度T每升高10℃，电势斜率绝对值大约增加2mV左右， T在10～30℃时，曲线斜率在58.1±2之间，同时在这个温度范围内，CF-每变化10倍，电极电位值改变（58±2） mV [11]。这2条可用于验证数据是否准确。 　　3.2.3 干扰物质 待测液中所含成分与LaF3单晶作用，与La3+或F-形成络合物或某种结合物，影响电位测定，如OH-，使测得结果偏高。待测液中存在与F-络合的离子，如Fe3+、Al3+等，使测得结果偏低。消除这些影响因素的方法是在标准溶液和试样溶液中加入掩蔽剂，通常使用的掩蔽剂有EDTA、钛铁试剂和柠檬酸钠。文献报道钛铁试剂昂贵，且市场不易买到[15]。试验观察可在含有50μgF-试验液中，分别加入100μg Al3+和100μg Fe3+，取5mL浓度均为0.4mol/L的EDTA、柠檬酸钠溶液作为掩蔽剂，放置10min后进行测定，发现用柠檬酸钠F-回收率为96%而用EDTA的F-回收率仅有90%。 　　本研究采用总离子强度调节缓冲液TISAB，可以控制溶液pH范围，消除溶液间离子强度差异对电位的影响。还能做掩蔽剂，与铁、铝等离子形成络合物，以消除它们因与氟离子发生络合反应而产生的干扰。 　　3.2.4 注意事项 在使用前，氟离子电极应放在10-3mol/L NaF溶液中浸泡约2h。然后用去离子水冲洗，至电位约300 mV。检测过程中注意保持均匀无气泡的搅拌。 　　3.3 结论 　　运用自动电位滴定仪检测口腔用品中的极微量游离氟方法准确度高，精密度好，操作简便，易于验证，容易控制检测条件，适合推广。 　　参考文献 　　[1] 鲁莉，王左敏，于鹏， 等.不同氟含量牙膏对牙齿邻面龋再矿化的影响[J].中国医药， ）：105-106. 　　[2] 刘亚妍.氟在动物生理上的作用及中毒的预防[J].饲料与种植， 2011，（3）：86. 　　[3] 俞誉福，毛家骏.环境污染与人类健康[M].上海： 复旦大学出版社， 1985. 　　[4] Olivier Barbie， Laura Arreola-Mendoza， Luz Maria Del Razo. Molecular mechanisms of fluoride toxicity[J].Chemico-Biological Interactions ， 2010， 188：319-333. 　　[5] 刘静.牙膏中氟化物的气相色谱法测定方法[J].中国热带医学， ）：362-363. 　　[6] 钟志雄，杜达安，梁旭霞.离子色谱法测定牙膏中游离氟[J].环境与健康杂志， ）：104-107. 　　[7] 沙鸥，马卫兴，卢敏， 等.分光光度法测定牙膏中游离氟的含量[J].日用化学工业， ）： 76-78. 　　[8] GB 牙膏[S]. 北京： 国家质量监督检验检疫总局，2008. 　　[9] QB/T 口腔清洁护理液[S]. 中华人民共和国国家发展和改革委员会，2008. 　　[10] 吕晓宁，刘鲁川.口腔中氟含量的检测方法[J].国外医学口腔医学分册， ）：346-347. 　　[11] 孙文风，杨林，王金贵.牙膏中氟含量的测定[J].青海大学学报：自然科学版， ）：63-64. 　　[12] 胡国媛，于桂兰，杨阳.牙膏中可溶性氟、游离氟含量的检测[J].中国卫生检验杂志， ）：341-345. 　　[13] 闫桂甫，董丙坤.离子选择性电极法测定牙膏中氟含量研究[J].广东化工， ）：118. 　　[14] 刘宇明.氟离子选择电极法测定氟化物的探索及应用[J].甘肃环境研究与监测， ）：91-92. 　　[15] 林朝扶.离子选择性电极标准加入法计算公式的推导和氟的测定[J].广西电力技术， 1993，（01）：32-39，46.
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