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新闻及动态Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体
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周经理(联系我时，请说明是在中国化工仪器网上看到的，谢谢)
Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体，产品经无数次市场验证，若出现质量问题可无条件换货或退货，现货直销,免费送货上门。【产品规格】：0.1ml/0.2ml【抗体来源】：Rabbit OR Mouse【产品用途】：Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体用于免疫组化实验,WB实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。【货 期】： 现货【性 状】： Lyophilized or Liquid【浓 度】： 1mg/1ml【亚 型】： IgG【贮 存】： 贮存于-20℃.【相关标记】：HRP Biotin Gold RBITC AP FITC Cy3 Cy5 Cy5.5 Cy7 PE PE-Cy3 PE-CY5 PE-CY5.5 PE-CY7 APC Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 647 &&Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体溶解方法：方法1：我们的抗体（冻干粉）已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂（叠氮钠或庆大霉素），您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后，置于-20℃保存，最好分装后使用，避免反复冻融，可保证至少1年有效；方法2：也可以只加入一半体积的双蒸水，再用一半体积的甘油补足，置于-20℃保存，这样抗体不会冻，有利于抗体的稳定。后续试验时，再使用对应的缓冲液稀释成工作液，即用即配。我们的抗体（冻干粉），在常温放置下，至少一个月有效；若在-20℃下保存（推荐），至少三年有效。抗体修复方式：方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温；方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。酶标抗体效价测定程序：各种HRP酶标记成抗体的效价测定程序如下（如：羊抗鼠IgG-HRP的效价测定）：1、抗原包板：15ug/ml 小鼠IgG-pH9.6&CB液 0.1ml/孔；2、37&C包被60min或4&C过；3、PBST洗板3次，5min/次；4、加入倍比稀释的HRP标记抗体 0.1ml/孔；5、37&C 30min；6、PBST洗板5min/次&3；7、底物液0.1ml/孔 37&C 5-10min；8、终止液：2N H2SO4 0.05ml/孔；9、450nm 测定OD值；10、阳性OD值比对照值大3倍，为判断效价稀释度。Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体多肽的溶解与保存：多肽有着很多特性，关于一些特殊肽您需要的有关信息可与博奥森公司的技术人员联系。当然首先建议您用少量肽来试验最适合的溶解方法，当多肽完全溶解后，才能加缓冲液（注意：应将多肽加入到适当溶剂中搅拌）。一、冻干多肽的溶解1、多肽溶解的主要问题是二级结构的形成。虽然疏水肽链二级结构的形成更明显，但除最短的肽链外，此现象产生在几乎所有肽链,与极性无关。所以，溶解多肽的第一个原则是使用无菌蒸馏水或去离子水，当然无氧水最好。多肽溶液可能遇到细菌降解，为防止此情况的发生，应溶解在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化，应溶于无氧的水中，无氧水可通过注入惰性气体（氮、氦、氩）减压除气得到；2、若多肽不溶于纯水，超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热或多肽降解；3、若多肽含有多个碱性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液：对于疏水性强的多肽，应使用50%的乙酸；4、若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整；5、异丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱，有机溶剂的量必须很少否则将严重影响停留时间；6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香链而高度疏水、或为中性肽时，DMF或DMSO等膜变性剂的使用，有利于多肽的溶解：a.高浓度模变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶；b.膜变性剂适于多肽分析液的制备，但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰；c.DMF是变性剂（最高浓度可达30%），滴加至多肽溶解；d.反相层析法时，DMF将与洗脱液前锋一起流出，根据入量的多少，峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出，若肽链很小，洗脱太早，多肽的量将很低。二、冻干多肽的保存标有&冻干保存&说明的多肽应该保存在冰冻条件下，以-20℃以下，其活性可保持多年。当使用干冻产品时，开盖前其容器应在装有新鲜干燥箱内升至室温。-20℃的产品，此过程需要一小时或更长，随保装而定。否则，当容器打开，水气进入导致凝缩而降低稳定性。一旦打开，应迅速称量完毕，立即封闭以免潮解，亲水肽更应注意。三、溶解多肽的保存多肽溶液比干粉的稳定性差很多，为了获得较好的效果，遵循以下原则：1、分成小包装避免反复冻融。使用多少解冻多少；2、溶于pH5-7无菌的缓冲液中，-20℃储存；3、由于细菌能降解多肽，储存前应过滤细菌；4、包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化，因此应保存在无氧化剂的环境中。我公司免费提供抗血清亲合层析纯化服务，得到目的蛋白的抗体IgG。我公司还免费提供真空冷冻抽干服务，得到冻干粉状的抗体IgG产品，以便产品的使用及长期保存。制备要求：客户需提供制备抗体的相关蛋白的英文名称的全称，也可同时提供该蛋白的全序列或氨基酸（多肽片断）序列，供参考(不要求) 制备时间：2.5-3个月左右制备流程：签订制备合同&&付首付款&&制备抗体&&付清全款&&免费将抗体寄给客户抗体制备抗体产量：1、20ml兔多克隆抗体血清原液（小鼠为5ml腹水）2、经亲和层析纯化抗体IgG 10mg3、多肽抗原3mg（用于客户自行检测抗体使用）抗体效价：1：8000以上（ELISA）说 明 书：提供抗体制备报告及抗体使用说明书抗原要求：若客户提供通过基因工程表达的抗原，则要求：抗原纯度85%以上，分子量大于10KDa，抗原量12-13mg产品包装：免费真空冷冻抽干，最终为您提供易于保存的冻干粉产品特殊说明：特殊抗体的制备，价格另议Anti-ADAMTSL4抗体,整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体RS-1693R&& &CANX抗体,钙连蛋白抗体RS-1790R&& &CRMP2抗体,二氢嘧啶酶相关蛋白2抗体RS-1725R&& &CYP2E1抗体,细胞色素P450ⅡE1抗体RS-1728R&& &CX3CR1抗体,趋化因子受体1抗体RS-1731R&& &phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340)抗体,磷酸化原癌基因c-Raf抗体RS-1732R&& &phospho C-Myc(Thr58/pSer62)抗体,磷酸化致癌基因C-Myc抗体RS-2042R&& &CD33抗体,CD33抗体RS-1738R&& &phospho-c-kit(Tyr936)抗体,磷酸化原癌基因c-kit抗体RS-1735R&& &phospho-c-Jun(Thr91+Thr93)抗体,磷酸化原癌基因c-Jun抗体RS-6981R&& &CLCN3抗体,氯离子通道蛋白3抗体RS-3120R&& &phospho-Cyclin E (Thr395)抗体,磷酸化周期素E抗体RS-3096R&& &Phospho-cdc25C (Ser216)抗体,磷酸化细胞分裂周期蛋白25C抗体RS-3097R&& &Phospho-CDK9 (Thr186)抗体,磷酸化周期素依赖性激酶9抗体RS-3098R&& &Phospho-Connexin 43 (Ser368)抗体,磷酸化Connexin 43蛋白抗体RS-2759R&& &cofilin抗体,丝切蛋白抗体RS-3100R&& &phospho-Cortactin (Tyr466)抗体,磷酸化皮层肌动蛋白抗体RS-3122R&& &Phospho-Cyclin B1 (Ser147)抗体,磷酸化周期素B1抗体RS-3123R&& &Phospho-Cyclin B1 (Ser133)抗体,磷酸化周期素B1抗体RS-3124R&& &Phospho-Cyclin D1 (Thr286)抗体,磷酸化cyclin D1抗体RS-1383R&& &CD13抗体,CD13氨肽酶N抗体RS-1268R&& &CCL20/MIP3 alpha抗体,巨噬细胞炎性蛋白MIP-3a抗体RS-1376R&& &Connexin-32抗体,间隙连接蛋白32抗体RS-1410R&& &CTBP1抗体,C端结合蛋白1抗体RS-1494R&& &CK1+5+10+14抗体,高分子量角蛋白抗体RS-15138R&& &C22orf39抗体,22号染色体开放阅读框39抗体RS-1389R&& &Cyclin G抗体,周期素G抗体RS-2763R&& &Crk p38抗体,Crk p38抗体RS-3121R&& &phospho-Crk p38 (Tyr221)抗体,磷酸化Crk p38抗体RS-1134R&& &RUNX2抗体,核心结合因子&1抗体(成骨特异性转录因子)Cbf&1RS-0764R&& &CCK8抗体,胆囊收缩素8抗体RS-1169R&& &CCR-1抗体,细胞表面趋化因子受体1抗体RS-0562R&& &CCR-2抗体,细胞表面趋化因子受体2抗体RS-1167R&& &CCR3抗体,细胞表面趋化因子受体3抗体RS-1168R&& &CCR4抗体,细胞表面趋化因子受体4抗体RS-0081R&& &Caspase-3抗体,活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体RS-0553R&& &Collagen VI alpha 1抗体,抗Ⅵ型胶原抗体
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蛋白纯化经验指南生物谷整理原创：，推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60％左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5％CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点，这也是个办法。请问楼主有没有合成过配体为FMN的亲和胶？亲和的填料合成过20来种,你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗,我看FMN可偶联的有限,倒是FAD有活泼的氨基好偶联,何况它们几乎是同一个辅酶,你是不是考虑把FAD连上去.当然FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上,而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好,因此我觉得这个没有什么问题.此外如果是以FMN为辅酶的,那我还可以建议你试试蓝色琼脂糖凝胶,因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似,它能纯化不少脱氢酶和激酶.如果它可以你就不需要合成填料了,有现成的.我已经给你发了相关一些偶联的材料，请查收，现在一般要自己合成亲和填料，有很多公司都提供活化好的介质，自己偶联就可以，其中比较常用的有溴化氰琼脂糖凝胶，环氧琼脂糖凝胶，氨基琼脂糖凝胶，羧基琼脂糖凝胶，活化酯琼脂糖凝胶，以及巯基琼脂糖凝胶等，但是如果是小分子的配基最好选择有3-10碳作为手臂的活化介质为好，此外也曾经有文献报导固定辅酶时，偶联位置不同，选择性有差别，因此你可以选择自己适合的活化介质。不同的活化的介质对偶联的配基有不同的要求，所以要对自己的配基了解比较清楚就可以选择合适的活化介质。我一般在合成的时候大多选择环氧琼脂糖凝胶，它能应用的范围广氨基巯基羟基都可以，而且合成的介质刚性好，非特异吸附少，所以不需要特殊处理未反应基团。此外键合的键很稳定，配基脱落少。我觉得是不错的选择。包涵体的蛋白复性做得不多,但是我记得有个哥们说最管用的办法也是最简单的方法,他说在复性的时候尽量别想什么太高难的技术,那些时髦但不一定好用,常用的有透析复性,稀释复性,包括国外的专家也这么说.我觉得有时候开始摸不出来未必就是方法不行,关键要经常改变条件.层析复性很时髦,但是真正能用的不很多,我觉得蛋白这东西难就在于大多都不相同,所以关键要多看文献,多琢磨自己蛋白的特性,多尝试。SephadexG-25（medium）柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗？若有，一般对盐浓度限度如何？大家别客气，除盐对于浓度应该也是有一定的限制的，同样的样品盐浓度高的自然要比浓度低的要在柱子上走的峰要宽些，相对需要的柱子的分辨率也要高点，但是在正常的范围如1-2M应该影响不大，不过要除得很干净还是尽量少上点样品，我觉得上样的体积毕竟比浓度的影响更大。我的蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，一般用离子交换和亲和层析纯化，现在我用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，修饰率不可能达到100％，请问修饰后能用什么纯化方法可以把修饰的和未经修饰的分开？（当然修饰后还残留有聚乙二醇，这个小分子也要除掉）他们大多用凝胶过滤，我觉得这也不错的做法，毕竟PEG是链状的分子，在柱子上和普通蛋白行为不一样，修饰度越高那么出峰也越后，因此你的蛋白选择sephadexG50试试，它的范围在，应该是不错的选择。此外PEG是个疏水性的链，修饰后的蛋白疏水性增强，修饰度越高，疏水性越强，可以用这个原理分离。离子交换也可以选择，因为同样道理，修饰度越高，电荷被屏蔽也越多，电荷也越少，因此应该修饰度越高越先出。亲和也离子交换一样的道理，你可以试试，你手头的亲和能不能分开，你在这几个方法里选择看哪个更经济好用就可以。我是个新手，谢谢楼主给我解决了许多难题。我有个问题困绕很久，从细菌中提取酶，好象用常规的方法（超声波破壁，缓冲液提取），总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁
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