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抗凋亡基因Bcl-2在皮肤良恶性肿瘤中的表达
15:30:35 责任编辑：华夏医界网 来源：转载 浏览次数：0
摘要：为探讨Bcl-2蛋白与皮肤肿瘤的关系，作者用流式细胞免疫荧光技术，检测了33例皮肤良恶性病变。结果显示：Bcl-2蛋白的相对含量FI(fluorescenceindex)在恶性肿瘤中的表达明显高于良性肿瘤，P0.001。提示细胞凋亡抑止作用在肿瘤的发生、发展中也起着重要的作用，同时研究下调Bcl-2的机制，可能成为Bcl-蛋白过度表达肿瘤治疗的一种途径。
&&& 关键词：肿瘤，皮肤；Bcl0-2蛋白；鳞癌
&&& Abstract:In order to explore the relation ship between Bcl-2 protein and the skin tumors, authors analysed 33 cases of various skin tumors with immunofluorescence staining technique and flow cytometry. The results showed that the fluorescence
&&& indices(FI) representing the relative content of Bcl-2 protein in malignant skin tumors were all higher than those in benign ones, P 0.001.This suggested that the Bcl-2 was very likely play an important role in the develoment and progress of the
&&& skin malignant tumors. We studed further the mechanism of reducing the expression protein of Bcl-2, may be become a treatment method to the tumors with over expressed Bcl-2 protein.
&&& Key words: Tumors, Bcl-2protein, SCC
&&& 近年来，关于肿瘤发生机制的研究表明，多数肿瘤均有癌基因的异常表达，原癌基因异常常引起细胞过度增生，但细胞凋亡受阻，在肿瘤发生中也起着重要作用[1]。Bcl－2基因(B－cell lymphoma/leukemia 2 gene)的表达产物为Bcl－2基因蛋白，可抑制细胞凋亡。已发现不少肿瘤有该蛋白的过度表达，如B细胞淋巴瘤、基底细胞癌等[2,3]。本研究应用流式细胞免疫荧光技术对33例皮肤良恶性病变细胞中的Bcl－2蛋白相对含量进行了定量分析，以探讨该蛋白与皮肤良恶性肿瘤的关系。
&&& 1　材料和方法
&&& 1.1　标本来源：采用我院1989年～1997年活检及手术切除标本的石蜡包埋组织块，其中鳞状细胞癌(SCC)10例，角化棘皮瘤(KA)10例，脂溢性角化病(SK)10例，另设3例正常皮肤组织为对照，共计33例。所有病例均由有经验的病理医师做出诊断。
&&& 1.2　细胞DNA含量检测的样品制备：每例石蜡组织块切取40m左右厚度切片3～5片分别放入试管内，依次脱蜡、水化、以搓网法制取单细胞悬液，调整细胞数为1106/mL后，用溴化乙啶
&&& 对DNA染色，置4℃冰箱30min后上机测定[4]。
&&& 1.3　Bcl－2蛋白免疫荧光染色样品的制备：对1106/mL的单细胞悬液进行间接免疫荧光标记，一抗应用1∶100倍的鼠抗人Bcl－2蛋白单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，二抗应用1∶100倍的羊抗鼠FITC－IgG。上机测定时，除设正常皮肤对照外，还设有PBS阴性对照，1∶100倍的FITC－IgG及Bcl－2单抗阳性对照。操作过程详 见文献[5]。
&&& 1.4　流式细胞检测方法：使用FACS420型(美国BD公司产品)流式 细胞仪进行测定，方法详见文献[5]。
&&& 1.5　测量资料的分析方法：DNA含量以DI值(DNA Index，DI)作为判定细胞核DNA含量的标准，DI=样品细胞的G0/G1峰均道值/正常皮肤组织细胞G0/G1峰均道值。DI=1.02CV为二倍体肿瘤，DI1.02CV为异倍体肿瘤。Bcl－2基因蛋白表达的定量分析按照Morkve等[6]提出的荧光指数(fluore scence index,FI)表示，计算公式为：FI=(肿瘤细胞Bcl－2表达的平均荧光强度－对照样品的平均荧光强度)/正常皮肤组织细胞Bcl－2表达的平均荧光强度。
&&& 1.6　统计学处理方法：采用t检验进行统计学处理。
&&& 2　结果
&&& 脂溢性角化病(SK)，角化棘皮瘤(KA)，鳞状细胞癌(SCC)及正常皮肤组织对照的DI值、FI值及显著性检验见表1，2。
&&& 表1　各种瘤细胞DI、Bcl－2的FI值(s)
&&& 组织类型 例数 DI FI
&&& Ⅰ SK 10 0..
&&& Ⅱ KA 10 0..
&&& Ⅲ SCC 10 1..
&&& Ⅳ 对照 3 1..
&&& 表2　各组DNA含量、荧光指数不同均数的显著性检验(t检验)
&&& Ⅰ－Ⅱ Ⅰ－Ⅲ Ⅰ－Ⅳ Ⅱ－Ⅲ Ⅱ－Ⅳ Ⅲ－Ⅳ
&&& DI t值 0.727 4.167 0.483 8.732 0.724 2.417
&&& P值0.40.0.40.05
&&& FI t值 0.495 8.254 1.393 9.089 2.078 7.057
&&& P值0.50.0.050.001
&&& 由上面两表可以看出，良性肿瘤(SK，KA)及正常皮肤中DNA含量及Bcl－2蛋白相对含量均低于恶性肿瘤(SCC)，P0.001或0.05；而良性肿瘤间以及良性肿瘤与正常皮肤间无统计学差别。在各
&&& 10例皮肤肿瘤中，SK无DNA异倍体，KA有2例，而SCC有9例出现。
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吴良芝，女，妇科副主任，主任医师。从事妇产科临床、科研及教学工作二十多年，精通妇科急腹症、妇科肿瘤、子宫内膜异位症、功血、妇科炎症、多囊卵巢综合症、高泌乳血症等疾病的治疗，擅长于腔镜类手术，特别是妇科肿瘤早期诊断、手术治疗及并发症的防治有丰富经验，主持参与多项科研课题研究，发表论文近20篇。
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浅论Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究
来源：　 14:28:00　【】　
&&&&&&&& 作者：谷燕娇 苏荣健, 高志安【摘要】& 目的 探讨分子伴侣Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的可能性。方法 应用免疫印迹技术对36例疑似肺癌病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测，并将检测结果与胸水脱落细胞学检查结果和临床病理资料对照。结果 免疫印迹结果表明Grp78高表达的21例病人，经过临床观察和病理学检查，有19例被临床诊断为肺癌，Grp78表达水平较低15例病人中，没有病例被诊断为肺癌，灵敏度为90%，特异度为85.7%；而应用传统的检测方法对36例肺癌疑似病人胸水进行脱落细胞学检查，有12例病人怀疑为肺癌，经过临床及病理学检查有4例被排除，灵敏度为47%，特异度为85%。结论 检测肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平可以提高肺癌鉴别诊断的灵敏度，有利于胸部恶性肿瘤的早期诊断及鉴别诊断。 【关键词】& Grp78；胸部肿瘤；鉴别诊断&& Abstract：Objective& To explore the possibility of detecting Grp78 expression levels in the hydrothorax detached cells in the differential diagnosis in chest tumors. Methods&& The expression levels of Grp78 in 36 cases of suspended chest tumor patients were detected by western blot and the hydrothorax detached cells analyses were also detected by HE staining. Results& In the 21 cases of patients that Grp78 is overexpressed in the hydrothorax detached cells, 19 cases of patients were identified as lung cancer by retrospective analysis of clinicopathological data. In the 15 cases of patients that Grp78 was radically expressed, none of which was diagnosed as cancer. In the 12 cases of patients diagnosed as lung cancer by the hydrothorax detached cells analysis by HE staining, 4 cases were excluded from the diagnosis of cancer based on clinicopathological analysis. The sensitivity of HE staining is 47% compared with 81% of western blot. The specificity of HE staining and western blot is 85% and 85.7% respectively.Conclusions& Detection of Grp78 expression levels in the hydrothorax detached cells is a useful target in the differential diagnosis of chest tumor.&& Key words：Grp78; differential diagnosis&& 肺癌发病率高预后较差是一种严重威胁人类健康的疾病，其早期发现对于肺癌病人的治疗及预后具有重要意义。胸水脱落细胞学检查是早期诊断肺癌的一种常用方法，但是传统的脱落细胞学检查过多依赖于操作者的业务能力，主观性较强，而且灵敏度低，在一定程度上延误了肺癌的诊断，因此，提高检测的灵敏度和客观性是非常必要的［1］。&& Grp（glucose regulated protein）78是内质网合成的分子伴侣，在内质网中与新生蛋白质和错误折叠的或非折叠蛋白质结合，帮助其折叠形成正确的构象。近年来的研究表明，Grp78的表达与功能与肿瘤的发生、进展关系密切，在正常细胞中低/不表达，在恶性肿瘤细胞中高表达［2-5］。在分化程度不同的细胞中Grp78表达的水平不同，在分化程度低的细胞中其表达水平较高而在分化程度高的细胞中其表达水平较低［6］。本研究，对36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测，以探讨胸水脱落细胞中Grp78表达作为肺癌鉴别诊断的一个辅助指标的可能性。&& 1& 材料与方法&& 1.1& 样品&& 36例肺癌疑似病人的胸水均来者本钢胸科医院肿瘤科，32例胸膜炎病人的胸水均来自本钢胸科医院结核内科。&& 1.2& 样品的处理&& 将胸水5 000 g离心3 min，收集细胞，PBS漂洗3次，向沉淀中加入500 μL RIPA 缓冲液,混匀,置于冰上作用30 min，12 000g离心10 min，将上清移入一个干净的EP管中。另取少量沉淀涂片，3.7%多聚甲醛固定，HE染色进行形态学检查。&& 1.3& 蛋白质定量&& 取细胞裂解液2 μL加入去离子水3 μL，考马斯亮蓝3 mL，标准管加入蛋白标准液2 μL代替细胞裂解液。对照管用2 μL RIPA缓冲液代替细胞裂解液，应用分光光度计与575 nm读取吸光度值，计算细胞裂解液中蛋白质浓度。蛋白质浓度＝（A测定－A对照／A标准－A对照）×标准液蛋白质浓度。&& 1.4& Western Blot&& 取相当50 μg蛋白质的细胞裂解液上样于10％的SDS-PAGE，电泳至溴酚蓝出胶，然后将蛋白质转印的用甲醇浸透的PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭过夜，然后加入一抗（山羊抗小鼠Grp78IgG，山羊抗小鼠Actin IgG）杂交2 h，二抗杂交1 h，ECL显色。用凝胶分析系统测定Grp78和Actin的灰度值，并计算二者比值，作为Grp78表达的相对量。&& 1.5& 统计学分析&& 应用 t检验对炎性胸水和癌性胸水中Grp78表达水平进行比较；应用2检验比较两种检查方法的灵敏度及特异性。1&&&
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?&&( 13:37:00)?&&( 13:19:00)?&&( 13:17:00)?&&( 13:16:00)?&&( 13:16:00)?&&( 13:15:00)
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中国科学院研究生院权威支持(北京)　电 话：010-　传 真：010-谢丹，女，广东汕头人，主任医师，教授，临床医学博士，硕士研究生导师。
擅长于综合应用影像学检查及各种定位穿刺技术发现并诊断早期乳腺癌；根据肿瘤性质及病人体质制定个体化的治疗方案，使病人获得更好的疗效并最大限度规避治疗带来的副作用；应用中医药手段进行乳腺癌治疗后的身体调理。
承担广东省乳腺癌临床研究项目2项，研究重点为1.科学安排化疗时间以提高乳腺癌的化疗效果。2.中药抗化疗耐药的临床研究。以第一作者身份在国内各级学术期刊发表科研论文15篇。
1.乳腺良恶性肿瘤的个体化治疗
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职称：副主任医师、副教授
1 中西医结合治疗乳房肿瘤性疾病 2 中医辨证治疗乳腺增生性疾病 3 中医内外治结合治疗炎症性乳房疾病
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职称：主任医师
乳腺增生病、乳腺癌、乳腺纤维腺瘤、乳腺炎等疾病甲状旁腺良恶性肿瘤的鉴别;
&#12288;&#12288;目的:原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)是一种常见的内分泌疾病,主要是由于甲状旁腺本身的病变引起甲状旁腺激素(PTH)合成、分泌过多,导致钙、磷和骨代谢紊乱的一种全身性疾病,引起PHPT的原因主要是甲状旁腺肿瘤,包括腺瘤和癌。由于甲状旁腺肿瘤的……
[关键词]：;;;;;;;;;
[文献类型]：会议论文
[文献出处]：《》
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