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【专题】【有图有真相】聊聊神经科学领域Western Blot抗体效果
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这个帖子发布于6年零305天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做过Western Blot的战友都知道，WB的成败，几乎很大程度依赖于抗体质量。因此，我想，大家不妨将自己曾经使用过的抗体效果公布出来？抗体公司产品目录中的图很美很漂亮，但是自己拿到抗体之后，怎么做都做不出来。有时候经常怀疑抗体公司的图。也时常怀疑自己。莎士比亚在《哈姆雷特》中最著名的名言可以描述我们此时的心情：“To be, or not to be, that is a question”。是怀疑抗体公司，还是怀疑自己，这是一个严肃的问题。葛优的神州行广告词说：“选号码就像进饭馆,选人多的，神州行，听说将近两亿人用，我相信群众，神州行，我看行！”。用在选抗体上，我们同样可以说“选抗体就像进饭馆,选人多的，某某抗体，听说将近两亿人用，我相信群众，某某抗体，我看行！”。群众的眼光是雪亮的。所以希望大家将自己做出的抗体效果图公布出来。对于每种抗体，请提供当时实验的相应信息。按照如下格式：抗体名称：抗体来源：样品来源与说明：批号：推荐稀释度：实际稀释度：备注：加分规则：我们对于每个公布的信息，将给予1分奖励；对于每个公布的图片，也将给予1分奖励；若能提供其他信息，如抗体说明书，使用心得（如抗体稀释液，封闭时间等），也将加分鼓励。累计不超过3分。我们初始目的是提供神经科学方面的Wb效果图。当时也欢迎来自其他领域的。但必须是原创。若剽窃他人，将得到严厉处罚。 特别需要说明的是：成功和不成功的，我们都欢迎。这样才是做科研。科研永远不是一帆风顺的。不成功的，我们也应该给予关注。为什么不成功？怎么分析？这才是最重要的。不成功的案例告诉大家更多的信息。
谢谢大家参加此次活动！
不知道邀请谁？试试他们
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抗体名称：磷酸化-ERK1/2抗体来源：CST样品来源与说明：小鼠批号：9106推荐稀释度：1：2000实际稀释度：1：500备注：按照说明书，在完全封闭液中四度摇床过夜。
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抗体名称：Anti-GSK-3beta抗体来源：cell signaling样品来源与说明：SD大鼠，海马批号：待查（友情馈赠）推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：500备注：37℃孵育1 h，4℃摇床过夜
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甲醛 edited on
抗体名称：Anti-ERK1/2抗体来源：CST样品来源与说明：NAc SD rats批号：9102推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：2000备注：37℃孵育1 h，4℃摇床过夜,这个应该算是最容易做的抗体了。嘿嘿抗体说明书 见附件
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xyx81599 edited on
同样是抛砖引玉。也给大家提供例子。抗体名称：beta-catenin，属于Wnt家族信号通路抗体来源：Santa-Cruz样品来源与说明：大鼠，纹状体批号：sc-7894推荐稀释度：1：200至1：1000实际稀释度：1：400备注：我之前做过预试验，摸过浓度，发现1：400较好。Santa Cruz不是每个抗体都好使，真的需要碰运气。
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甲醛 edited on
抗体名称：beta-actin抗体来源：Santa Cruz样品来源与说明：大鼠，纹状体批号：待查推荐稀释度：未知。我们实验室一直用1：5000这个浓度实际稀释度：1：5000备注：beta-actin是SC最好做的抗体了。整个WB系统好不好，做actin就可以验证。如果actin都做不出来，就不要往下做了。我师兄推荐我用1：10000.我没试过效果如何。请其他版主不要给我这个图加分。actin是最简单的。我怕抢了大家这个图，会招致意见。分数对咱意义不大了。
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提供一个不成功的案例吧！也抛了一块砖。抗体名称：BDNF抗体来源：Abcam样品来源与说明：大鼠，纹状体批号：ab72439推荐稀释度：我记得换算的话应该是1：200左右，但是用过的老师告诉可以稀释到1：500实际稀释度：1：500备注：BDNF我一直做的不好，不知道为什么。这个抗体做出来在52kD会有一条比较强的带。这个需要去看看BDNF的两种形式了。但是你不需要往那儿切。我一般取30上面一点到25kD之间的胶。预测分子量在28kD。抗体说明书上给出的条带也挺浅的。见网页：/BDNF-antibody-ab72439.html
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甲醛 edited on
暂时写这几个吧，得留着给大家说说。做的成功的，不成功的，都欢迎提供图片。
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抗体名称：Anti-GSK-3beta抗体来源：cell signaling样品来源与说明：SD大鼠，海马批号：待查（友情馈赠）推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：500备注：37℃孵育1 h，4℃摇床过夜
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甲醛 edited on
感谢liuxuesheng战友支持。我其实还做过不少公司的抗体，经验不多，教训不少。但是因为想把机会留给大家，我就不多废话了，也不尸位素餐了。
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抗体名称：Anti-ERK1/2抗体来源：CST样品来源与说明：NAc SD rats批号：9102推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：2000备注：37℃孵育1 h，4℃摇床过夜,这个应该算是最容易做的抗体了。嘿嘿抗体说明书 见附件
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xyx81599 edited on
不知道有没有朋友做过抗A-beta和APP的抗体，哪个公司的好一些呀?非常感谢！
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抗体名称：MCSFR抗体来源：Sino Biological样品来源与说明：SD大鼠（模型），海马批号：待查（试用装）推荐稀释度：1：2000实际稀释度：1：10000备注：做了个梯度，1：10000稀释的效果仍然很好。
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抗体名称：beclin1抗体来源：abcam样品来源与说明：BV2细胞实际稀释度：1：2000效果最好图片有的灰度大有的灰度小，是因为处理不一样导致的，不是抗体问题
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抗体名称：AT8,TAU1,TAU5抗体来源：AT8来源pierce,TAU1和TAU5是以前师兄定的，哪个公司的不记得了样品来源与说明：mouse推荐稀释度：AT8:1：500,TAU1 1：2000，TAU5 1：10005%牛奶封闭，37℃孵育1 h，4℃冰箱过夜
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抗体名称：Vimentin抗体来源：Santa样品来源与说明：mouse推荐稀释度：1:5001X封闭液封1h，室温摇床直至4℃冰箱过夜
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抗体名称：slit2抗体来源：武汉博士德没有成功，此贴没有别的意思，大家做实验都时间宝贵，建议有进口的还是要用进口的吧，我用这个抗体反复试了N个月，最后还是不行，问技术回复是可能不特异，晕死我了，后来遇见一哥们也是用的同一个抗体，人家两个月不出直接就扔掉了，又买了进口的，抗体在路上一个月，来了以后一个月实验结束，所以大家千万要考虑清楚啊 ，时间真的很宝贵啊
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抗体名称：mouse anti-CD3抗体来源：SANTA CRUZ样品来源与说明：小鼠，脑血管及脑实质批号：sc-1127推荐稀释度：1：50到1：500实际稀释度：1：200备注：CD3一直做的不好，不知道为什么。可能是脑内T细胞含量太少，检测效果不佳。这个抗体做出来在23kD会有一条比较强的带。
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抗体名称：Mouse Anti-HisTag Mab抗体来源：中杉金桥，可能是这个公司分装的样品来源与说明：小鼠单抗，可以抗蛋白C端、N端或中间的6HIS批号：091022推荐稀释度：1:200--1:1000实际稀释度：1:800备注：做出来的WB效果很好，特异性很高，注意显色时间很短，5秒即可。
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抗体名称：ATR/TEM8抗体来源：abcam样品来源与说明：兔推荐稀释度：1:10004℃冰箱过夜效果好
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xiale2325 edited on
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抗体名称：monoclonal mouse anti glyceraldehade-3-phosphate dehydrogease(GAPDH)抗体来源：上海康成生物样品来源与说明：大鼠 小鼠的组织或培养细胞批号：推荐稀释度：1:10000实际稀释度：1:10000（一万！）备注：这是个很好的内参抗体，敏感性和特异性都很好，便宜耐用，4度保存，使用方便。
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sssea0508 edited on
抗体名称：AntiCD68抗体来源：Serotec样品来源与说明：Mouse批号：推荐稀释度：无实际稀释度：1：2000分子量：110kd备注：跑胶后湿转100V 2hr，37℃孵育2 h
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甲醛 提供一个不成功的案例吧！也抛了一块砖。抗体名称：BDNF抗体来源：Abcam样品来源与说明：大鼠，纹状体批号：ab72439推荐稀释度：我记得换算的话应该是1：200左右，但是用过的老师告诉可以稀释到1：500实际稀释度：1：500备注：BDNF我一直做的不好，不知道为什么。这个抗体做出来在52kD会有一条比较强的带。这个需要去看看BDNF的两种形式了。但是你不需要往那儿切。我一般取30上面一点到25kD之间的胶。预测分子量在28kD。抗体说明书上给出的条带也挺浅的。见网页：/BDNF-antibody-ab72439.html版主，我查的BDNF分子量怎么是14左右，难道您做的事它的二聚体？前两天做了下，隐隐约约13KD那个位置有条带，很弱，还是我在提高加样量的提前下出现的，以前一直没有，真是奇怪。更奇怪的是，17KD的位置有一较强的带，我用的BDNF抗体和你一个公司的，AB0今天准备在做，我留下50以内的蛋白，看看是不是向版主说的那样
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抗体名称：apoE抗体来源：abcam样品来源与说明：c57小鼠（模型），海马批号：ab20874推荐稀释度：1：2000实际稀释度：1：4000[img]C:\Documents and Settings\Administrator\桌面[/img]
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体名称：PSD-95抗体来源：Chemicon样品来源与说明：SD大鼠海马，生后不同发育阶段批号：MAB1596推荐稀释度：1-5 μg/mL 实际稀释度：1:1000备注：
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抗体名称：TNF-a抗体来源：Santa cruze样品来源与说明：小鼠脊髓批号：SC1350实际稀释度：1:500备注：
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zhengyaguo edited on
才开始学做WB不久，发现这个贴，过来学学~mark！
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抗体名称：b-III-tubulin/GAPDH抗体来源：Millipore样品来源与说明：neural stem cell derived from human ESCs货号mab1637lot批号jc1686015推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：1000备注：
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抗体名称：apoE抗体来源：abcam样品来源与说明：c57小鼠（模型），海马批号：ab20874推荐稀释度：1：2000实际稀释度：1：4000备注：做了个梯度，1：10000稀释的效果仍然很好。
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抗体名称：兔抗人的ERK1/2, P38和P-P38的IgG抗体抗体来源：CST样品来源与说明：哈萨克族食管癌组织批号：ab20874推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：1000备注：CST公司的抗体很好用！
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抗体名称：兔抗人的ERK1/2, P38和P-P38的IgG抗体 按1：1000稀释抗体来源：CST二抗：中山金桥公司HRP标记的羊抗兔二抗 按1：5000稀释样品来源与说明：哈萨克族食管癌组织及癌旁正常组织批号：ab20874推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：1000备注：CST公司的抗体很好用，我们实验室都是用DAB显色。ECL胶片曝光不好控制
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以上便是本人做的在食管癌患者中癌组织和癌旁组织中检测MAPK信号通路中ERK,P-ERK,P38及P-p38的蛋白的表达情况。前面都是裸图，后面是裁剪后拼接的图片。大家看完后给我加分啊！谢谢了！
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抗体名称：GABRA5（GABAA Receptor alpha 5 subunit）抗体来源：Millipore样品来源与说明：Rabbit polyclonal推荐稀释度：1：1000实际稀释度：1：500也来说一下一个，不是很理想，背景很高，杂带很多.看过很多paper,做这个蛋白的基本都不怎么好，不知道版上有没有做过比较好的
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当前位置：>>>His标签抗体做western需要考虑哪些
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His标签抗体做western需要考虑哪些
点击次数：329 发布时间： 17:53:27
&His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小，并且较容易分离和纯化，His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。然而，目前商品化His-tag的单克隆抗体(mAb)种类不多, 且价格也十分昂贵。&如何选择合适的His标签抗体？我们在选择His抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。其中需要考虑的因素包括了，His抗体的应用检测类型、His抗体的克隆性及制备来源等。比如该His抗体是否能用于Western Bloting的检测？是否可以用于免疫荧光IF实验？我是否需要特异性更好的单克隆His标签抗体？我是否需要考虑下是选择小鼠来源的还是兔来源的His抗体？之前有使用SSS（一家著名品牌的His标签抗体，名称隐去）的His标签抗体，一开始还好，过了半年后，就发现产品质量不稳定，做IF实验不行了，后来试用了下Abbkine的，IF结果很漂亮，顺带还买了他们的DyLight荧光二抗 && 广州南方医科大学一客户一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100&l His抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5,000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的His抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。
产品名称及描述
Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody (5C3)
HRP Conjugated&Anti-His Tag Monoclonal Antibody (5C3)
Anti-His Tag Rabbit&Polyclonal Antibody
&为什么推荐Abbkine品牌的His抗体？供应His抗体的进口品牌有很多，包括Sigma、Novagen、Qiagen、Abcam等，其中Abcam有一款值得推荐的His抗体，品名为6X His tag& antibody&[HIS.H8] (货号为：ab18184)，该抗体是Abcam推荐的唯一5星级His标签抗体，可用于IF/ICC、IP以及WB实验，截止到2013年，使用该抗体发表在NCBI统计的文章有16篇（详情请点击：）。该抗体为单克隆抗体，克隆号为HIS.H8，该抗体2013年的中国报价为￥&l。Abcam的抗体在品牌知名度、质量以及售后方面都是很值得推荐的，然后其价格较高。在此，我们向您推荐Abbkine的，该抗体实际上与上述Abcam抗体来源相同。与Abcam一样，其免疫原是6x His合成多肽，可识别可识别His重组蛋白和在细胞内过表达的His标记重组蛋白。然而其价格比Abcam低65%以上。Abbkine作为美国一家生产型品牌，为多个国际知名品牌提供OEM服务，因此其价格低廉，其质量也经受过市场检验。该抗体可以用于Western Bloting、免疫细胞化学及免疫荧光ICC/IF和免疫沉淀IP实验等多种不同应用。
产品名称及描述
Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody (5C3)
HRP Conjugated&Anti-His Tag Monoclonal Antibody (5C3)
Anti-His Tag Rabbit&Polyclonal Antibody
[nggallery id=3]
点击图片查看相关信息和大图显示
&一个高效价的抗体不仅影响实验结果的灵敏度，还意味着更高的性价比。Abbkine的His标签抗体在常规的WB实验里，推荐的起始稀释比率为1:1000，实际在Abbkine的应用中，还有1:4,000甚至更高的稀释比率，需要根据客户具体的实验条件进行优化。该抗体在免疫细胞化学及免疫荧光ICC/IF中同样表现优秀，5C3克隆的His标签抗体识别的免疫决定簇非常适合ICC/IF的应用。IP免疫沉淀反应也是客户选择Abbkine的一个重要原因。另外，Abbkine还同时提供经HRP偶联的His标签抗体，尤其适合IP-WB验证时去除二抗的干扰；兔源多克隆His抗体也为客户提供另一种His标签的检测方案。Abbkine还提供大包装1ml的His标签抗体，非常适合经常进行His标签系统免疫学检测的实验需求。为方便客户的使用， 上述产品，Abbkine均在中国备有现货。Abbkine针对中国市场，提供全球化的产品质量追踪和售后服务以及保障，如果您在使用过程中有任何问题， 请直接与其当地代理商艾美捷科技有限公司联系。
产品名称及描述
Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody (5C3)
HRP Conjugated&Anti-His Tag Monoclonal Antibody (5C3)
Anti-His Tag Rabbit Polyclonal Antibody
&美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，艾美捷将其引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性 价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或 区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电免费客户专线400-到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。
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ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
Western Blot内参抗体选择原则
Western Blot内参抗体选择原则
来源：互联网
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Western Blot技术专题 Western Blot内参抗体产品选择专题
内参抗体 种类很多，比如&-actin、&-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则：
一.样本种属来源：
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择&-actin、&-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atp ase等。
2、植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。
3、其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白 作为内参。
二.目的蛋白分子量 ：
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子 量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD，此时不适宜选择&-actin作为内参，可以考虑选择GAPDH或者&-tubulin作为内参。
三.目的蛋白表达 部位：
就一般的蛋白检测来说，&-actin、&-Tubulin抗体等就可以了，而针对于核蛋白的定量，特别是样本蛋白就是核蛋白时，选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3，除此之外，其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为Na,K ATPase。对于线粒体蛋白的检测，常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况，但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献，在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常，应考虑这方面因素。
相关实验方法
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