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日本同仁cck-8试剂盒
产品报价：780元
更新时间： 18:41:56
产地：日本
品牌：日本同仁化学
厂商性质：生产商
公司名称：
北京沃比森科技有限公司
产品关键词：
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检测步骤向各孔中加入细胞悬液。在℃下预孵育培养板。向各孔中加入各浓度的待测溶液。℃下孵育。向各孔中加入的溶液。℃下孵育小时。测定处的值。使用适当的培养基制备个的细胞悬液。建议使用培养箱过夜预培养。使用培养基或来制备溶液。如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有的待测溶液在处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基和进行检测。白细胞可能需要培养较长时间。活力计算细胞活力（％）加药（空白）（加药）（空白）（加药）：具有细胞、溶液和药物溶液的孔的吸光度（空白）：具有培养基和溶液而没有细胞的孔的吸光度（加药）：具有细胞、溶液而没有药物溶液的孔的吸光度细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
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产品展示/Products
产品名称：CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 活动促销
产品型号：GKT
产品产地：美洲
采购热度：103
简介内容：CCK-8试剂盒可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。Cell Counting Kit-8 简称CCK-8，是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8基于WST-8,与MTT类似，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。
CCK-8试剂盒可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。&& & & & & & & & & & Cell Counting Kit-8&简称CCK-8，是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。& & & & & & & & & & CCK-8基于WST-8，与MTT类似，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原& & & & & & & & & & 生成橙黄色的formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。& & & & & & & & & &&使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。& & & & & & & & & & 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。CCK-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8显色后，& & & & & & & & & & 可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。CCK-8优势：& & & & & & & &1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；& & & & & & & &2、能快速检测；& & & & & & & &3、检测灵敏度很高；& & & & & & & &4、重复性优于MTT 法；& & & & & & & &5、对细胞毒性小；& & & & & & & &6、即用型溶液，无需配置，使用方便。1、使用标准96孔板时，通常细胞增殖实验每孔加入2,000个细胞/100ul培养基，细胞毒性实验每孔加入& & & & & & & &5,000个细胞/100ul培养基(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定。& & & & & & & & &按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激。& & & & & & & &2、酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰，可以通过减去空白孔中本底的吸光度而消除。& & & & & & & &3、CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。& & & & & & & &4、CCK-8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，& & & & & & & &以免影响结果& & & & & & & &5、当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔容易干燥挥发，导致体积不准确而增加误差。一般情况下，& & & & & & & &最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。& & & & & & & &6、在培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，& & & & & & & &还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。& & & & & & & &7、金属对CCK-8显色有影响：终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、 & 铜会5%、15%、90%的抑制显色反应，& & & & & & & &使灵敏度降低。如果终浓度是10mM，将会100%抑制显色反应。& & & & & & & &8、部分悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量并延长培养时间。MTT和CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择&& & & & & & & & & && & & & & & & & & && & & & & & & & & &&&&& & & & & & MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的formazan& & & & & & 水溶性很差，需要额外的步骤溶解formazan。& & & & & & 如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，& & & & & & 建议选择使用Cell Counting Kit-8。
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CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 活动促销产品询价/message
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DOJINDO操作说明
细胞活性检测
1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。
2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖 -毒性检测
1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。
2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。
4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
制作标准曲线
1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。
DOJINDO检测步骤
CCK-8 检测步骤
1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a) 2. 在37℃下预孵育培养板。b)
3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。
4. 37℃下孵育。
5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。
6. 37℃下孵育1-4小时。e)
7. 测定450 nm处的OD值。
a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。
c) 使用培养基或PBS来制备溶液。
d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。
e) 白细胞可能需要培养较长时间。
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100 A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
1.一个孔中应接种多少个细胞？
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
2.能否用384孔板进行试验？
可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8体积太少，可以先将CCK-8溶液稀释1倍，然后加入培养基体积20%的量。
3.能否用24孔板进行试验？
可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。
4.酚红会影响检测吗？
不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
5.CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性？
有。然而，请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此结果可能不同。
6.CCK-8能否检测细菌细胞？
可以检测E.coli，但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。
7.CCK-8稳定吗？
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存，我们推荐-20℃的储藏条件。
8.如果没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他滤光片？
还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。
9.如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？
可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。
10.CCK-8是什么颜色？
应该是粉红色。若颜色不一样，有可能会影响测定。
11.CCK8能否对活细胞进行染色？
不能。因为CCK8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST8)，并通过电子载体1Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的，因此CCK8不能对细胞进行染色。
12.CCK8检测溶液对细胞是否有毒？
CCK8溶液自身因为高浓度的1Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可
以的。同一个细胞培养液在CCK8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测一下细胞在加入CCK8培养后的活力。
13.在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK8发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK8之前更换培养基，去掉药物的影响。
14.每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？
可能会有以下几个原因： 1. 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,个/孔范围内摸索条件。
15.如何设定空白对照？
在不含细胞的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
16.哪些物质会影响CCK8的测定？
当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。
17.在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？
可以缩短加入CCK8后的培养时间。例如：可以把加入CCK8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。
18.设定参比波长的目的是什么？必须设定吗？
不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。
19.说明书上仅写了96孔板的测定方法，如果使用24孔板货12孔板，应该加多少量CCK-8试剂？…
一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。
20.在CCK-8显色过程中，如何终止反应？
有一下几种方法（96孔板）： 1、在显色反应后，将培养板放置4℃冰箱内。 2、每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、每孔加10 μl 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸钠）溶液。注意：反应停止后，应在24小时之内测定。
21.必须预培养细胞吗？
不一定。如果要向保持细胞的最好状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养，但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。
22.如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？
金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话，将会100%抑制。
23.CCK-8试剂的保存条件？
在避光条件下CCK-8试剂在4℃可保存一年。如果需要保存较长时间的话，推荐在-20℃下保存。但是CCK-8若反复解冻和冰冻将会增加空白吸收，从而影响检测结果，若经常使用可将试剂存放在4℃冰箱内保存。
24.预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？
一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数盘计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。
25.CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
26.悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？
悬浮细胞由于染色比较困那，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。
27.应该每次做标准曲线吗？
建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样，对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能会有轻微的差异，对于不同的批号建议分别做标准曲线。
三亿文库包含各类专业文献、高等教育、各类资格考试、幼儿教育、小学教育、应用写作文书、生活休闲娱乐、CCK-8操作说明与检测步骤79等内容。　
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CVTK细胞活力检测试剂使用常见问题及解决方案
&&&&&&&&&&&& ---上海锐赛生物技术部
Q: 能否用24孔板、48孔板或384孔板进行试验？ A: CCK-8检测实验通常在96孔板中进行，但根据实验需要也可以在24孔板、48孔板或384孔板中进行，具体为向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。如果用384孔板进行实验，担心由于加入的CCK-8体积太小而引起实验误差，可以先将CCK-8溶液稀释1倍，然后加入培养基体积20%的CCK-8。
Q: 每孔应该接种多少细胞？ A：接种时，需要根据实验目的来确定接种的细胞数，例如进行细胞增殖检测需要较低的细胞起始密度，而进行药物毒性实验则需接种较高密度的细胞。当使用96孔板进行细胞增殖检测时，贴壁细胞的最小接种量为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)，而用96孔板进行细胞毒性实验时，贴壁细胞的最小接种量为5,000 个/孔 (100 μl 培养基) 。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。另外，根据细胞大小等具体情况，调整接种密度。
Q：如何设置对照？ A：在不含细胞的培养基孔中加入CCK-8，测定450 nm的吸光值即为空白对照。在做加药实验 (细胞毒性实验) 时，还应考虑药物的吸光值，可在不含细胞含药的培养基中加入CCK-8，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
Q: 培养基中的酚红是否影响CCK-8的检测？ A：在有酚红存在的情况下，会增加样品溶液的吸光值，但这并不影响实验结果，因为结果计算时要扣除掉空白对照的吸光值。
Q: CCK-8对细胞的毒性大小如何？ A: CCK-8对细胞的毒性相当低，同样的细胞在CCK-8法检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，如结晶紫检测法，中性红检测法或DNA荧光检测法等。
Q: CCK-8能否对活细胞进行染色? A: 不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8)，并通过电子载体1- Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST-8上，因为WST-8及其生成的甲H染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK-8不能对活细胞进行染色。
Q: 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？ A：有时会有影响。如果药物具有还原性，就会和CCK-8试剂发生显色反应，增加吸光值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小吸光值。解决办法：正式实验前，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。
Q: 没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他的滤光片？
A: 可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
Q: 必须设定参比波长吗？设定的目的是什么？ A: 不一定要设定，CCK-8试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。
Q: 如果OD值太低，可以采取什么办法？ A: 可以采取以下两个办法： ① 适当增加细胞数量。 ② 延长加入CCK-8试剂后的孵育时间。
Q: 如何减少检测误差？ A: 实验时注意以下几个方面： ①. 用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意液体蒸发的问题。由于96孔板周围一周最容易蒸发，可以采取弃用外围一圈孔，改加PBS、水或培养基保湿；同时，把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 ②. 铺板时尽量保证每个孔细胞数量均匀。 ③. 加入CCK-8时移液器的枪头和培养板的孔壁上有残留会严重影响结果，因此操作时应尽量细心以免照成认为误差，也可用培养基将CCK-8试剂稀释1倍，混匀后每孔加入20ul。 用酶标仪检测前确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
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