全血溶解法与Ficoll分离法分析人T细胞亚群的比较--《上海免疫学杂志》1989年05期
全血溶解法与Ficoll分离法分析人T细胞亚群的比较
【摘要】：正 在使用流式细胞仪的基础上,我们比较了全血溶解法与Ficoll分离单个核细胞法分析人T细胞亚群的结果,证实二法确有差异,报告如下。
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在使用流式细胞仪的基础上,我们比较丁全血溶解法与FicoU分离单个核细胞法分析人T细胞亚群的结果,证实二法确有差异,报告如下。4ml,3m】用Fi“011分离单个核细胞,。.4回作全血溶解染色。二、试剂仪器:同前报道LlJ。三、T细胞亚群染色法:见流程图。 材料和方法一、标本:随机取
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华中首例白血病CAR-T细胞疗法喜获成功收藏
（含病例）人类健康的大杀手肿瘤君，现在有望滚蛋啦。12月23日，武汉同济医院光谷院区传来好消息，该院与光谷生物城武汉科技大学生物医学研究院携手，成功完成华中首例白血病的终极治疗，这种最新细胞免疫疗法将显着提高白血病患者疗效。　　白血病患者病情恶化医生使出最后一张“王牌”　　李先生（化名）是一名30岁的口腔科医生，今年4月被诊断为急性B淋巴细胞性白血病，经过6个疗程的化疗，效果一直不理想，在骨髓库也一直没有找到合适的供体进行骨髓移植。　　“当时治疗前景非常悲观，即使实施半相合的骨髓移植，疗效也十分有限，成功率最好的估计也只有30%左右。”同济医院血液内科主任周剑峰教授介绍。　　经过反复讨论和论证，周剑峰决定打出最后一张“王牌”。10月28日，周剑锋教授的团队与位于光谷生物城的武汉科技大学生命科学院张同存教授的团队合作，决定使用国际上仍属医学前沿的尖端技术——CAR-T细胞疗法，为李先生争取生存和痊愈的机会。　　改造细胞专杀肿瘤细胞　　“先抽出病人的血液，提取白细胞，利用基因工程技术，把它们变成‘GPS导航’的‘肿瘤杀手’，再将血液回输到患者体内。”周剑峰说：“我们给李先生使用这个疗法之后，生命奇迹出现在细胞回输后的第十天，即使医生用了最敏感的分子检测技术，李先生的血液和骨髓里也完全找不到任何白血病细胞的踪迹，这表明李先生的治疗效果非常好。”　　之后，医生和科研团队为李先生准备了多种巩固疗效的预案，经过不间断地跟踪检查发现，李先生的恢复状况明显。记者在病房看到李先生时，他精神劲儿很足。了解这次新生来之不易，李先生说：“我的生命从判死刑到获得重生，全靠同济医生给我用了最高端的技术，我感到自己很幸运！”　　与传统治疗白血病的方法相比，CAR-T细胞疗法好在哪？周剑峰说：“传统治疗白血病疗法是一个漫长的治疗过程，即使有合适的骨髓移植，治疗费用不低于50万元，在这期间还要对付随之即来的各种慢性病，风险代价都非常大。使用CAR-T细胞疗法将使绝望的患者获得重生，后期对患者做好监控措施，不仅使患者获得即刻疗效，长期疗效也显而易见。”　　细胞免疫疗法仍为免费应用阶段　　周剑峰和张同存两位教授一致表示，当现有治疗白血病的方法都无效时，同济医院光谷院区的血液免疫和分子靶向治疗中心将考虑对患者采用CAR-T细胞疗法。对于符合这个治疗标准的白血病和淋巴瘤病人，该中心目前实施CAR-T细胞疗法治疗和相关检测费用全免的优惠政策。　　据周剑峰介绍，近年来，此项技术在美国已用于临床。在北京、上海等大的医疗中心用于实体肿瘤的治疗试验也取得了显着疗效。迄今，同济医院目前成功完成了2例白血病的治疗，均取得显着疗效。目前还有5例患者正在该中心接受系统治疗。数月后，与国际同步的临床治疗方案也将陆续在白血病，淋巴瘤和骨髓瘤等疾病治疗中逐步开展。希望不久的将来，该技术将会造福于更多的血液系统恶性肿瘤的患者。
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为兴趣而生，贴吧更懂你。或分离调节性T细胞的利器_医药保养_中国百科网
分离调节性T细胞的利器
    
　　调节性T细胞（Treg）是抑制性T细胞的一种功能亚群。它们抑制了不需要的免疫反应，有可能在自体免疫疾病、癌症的治疗以及器官移植中发挥重要作用，因此也就成了目前研究的热点。
　　过去，由于Treg细胞表面缺乏特异的细胞表面标志物，且这些细胞在外周血中的频率低，Treg的分离就成了一件困难的事情。过程漫长，且效率不高。然而，Treg研究领域发展迅速，人们不断发现新的细胞表面标志物，将Treg与其他类型的T细胞区分开。这些标志物让Treg细胞的分离逐渐改善。最近上市的一些新产品或许能加速Treg的分离和纯化。
　　对于细胞分离，磁珠和抗体是最常见的选择。拥有金标准MACS技术的美天旎公司近期推出了两款Treg分离试剂盒，分别为CD4+ CD25+ CD127dim/C Regulatory T Cell Isolation Kit II和CD25+ CD49d- Regulatory T Cell Isolation Kit。
　　CD4+ CD25+ CD127dim/C 调节性T细胞的分离是利用生物素化的抗体混合物和抗生物素的磁珠来进行的，分离过程中去除了非CD4+和CD127high细胞，随后用CD25 MicroBeads II进行阳性筛选。CD127是IL-7受体的α链，它表达在大多数成熟T细胞上，且在增殖和分化中扮演了重要角色。然而，在调节性T细胞上，CD127缺失。因此，CD127可以作为另外的标记物，来区分人调节性T细胞和激活的T细胞。
　　CD25+ CD49d- 调节性T细胞的分离分为两步。首先，CD8+和CD49d+ 细胞经过磁性标记，之后去除。其次，CD49d- 调节性T细胞被CD25磁珠标记，然后通过阳性选择而分离。第一步的去除除掉了污染的CD25+ T细胞，从而提供了高纯度的调节性T细胞。
　　StemCell公司则综合了两个细胞分离平台――RosetteSep和EasySep，整合成完整的Treg分离试剂盒。Treg细胞的分离分成两步，在RosetteSep上通过阴性选择预富集细胞，接着在EasySep上阳性选择CD25+细胞。从全血或buffy coat中获得纯的Treg，整个过程仅需要三个小时。这种不需要柱子的试剂盒使用简单，对细胞也很“温柔”，获得的Treg细胞能立即用于下游分析。
　　StemCell上个月还发布了两款高效分离Treg细胞的试剂盒，分别为the Complete Kit for Human CD4+CD127lowCD25+ T Cells及the Complete Kit for Human CD4+CD127lowCD49d-CD25+ T Cells。这两款试剂盒与上面美天旎的试剂盒原理类似，也是基于CD127的低表达，及CD49d的不表达。
　　也许你担心细胞上的磁珠或抗体可能会干扰下一步实验。Life Technologies则提供了一种方案，能够分离出不带磁珠或抗体的人CD25hiCD4+foxP3+ Treg细胞。分离过程分为以下几步：首先从PBMC中阴性分离出untouched的人CD4+ T细胞，然后在这个细胞亚群中阳性选择出CD25+的T细胞，再利用DETACHaBEAD从CD4+CD25+ Treg细胞中去除磁珠。
　　来自Life Technologies的科学家Karoline Schjetne表示：“有了这个产品，你就能同一个起始材料中分离出效应T细胞和调节性T细胞，用于抑制分析或扩增。”
　　在不久的将来，潜力巨大的Treg细胞将用于多种临床试验，比如自体免疫疾病、器官排斥等。如何将Treg细胞的分离与扩增与临床应用结合起来，这或许是研究人员面临的最大挑战。（生物通余亮）
收录时间:日 00:10:15 来源:中国显微图像网 作者:匿名
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[导读]&周洋去年9月退伍，一个月后，他突然发现自己流鼻血，止不住，稍微动一下就头晕，腹部疼痛，甚至夜里疼得睡不着觉。于是赶往当地县医院检查......徐州健康热线：2
　　：日，20岁的急性B淋巴细胞白血病患者周洋(化名)在母亲的陪伴下，向主治医生曹江博士和床位护士道谢之后，从出院回到安徽萧县的家中。周洋在接受了CAR-T治疗后的四周内，体内肆虐的肿瘤细胞不见踪迹，身体各项指标已经恢复正常。据悉，这是中国首例报道的人源化CDl9 CAR-T治疗白血病并获得成功的案例。
　　，任江苏省医学会血液学分会青年委员会学术秘书、委员，江苏省&333工程&中青年学术带头人、江苏省&六大人才高峰&人才、徐州市十大青年科技奖获得者、徐州医学后备人才，从事血液病诊治十多年，在内科及血液系统常见病、疑难杂症的诊治和危重病的抢救等方面积累了丰富的临床经验，擅长血液肿瘤的免疫治疗，如CAR-T疗法。
　　曹江博士在接受记者采访时表示，白血病俗称&血癌&，是人体的&造血工厂&&&骨髓的造血细胞系统发生癌变所导致的疾病。我国每年大约有4万人患上白血病。最近10年来，白血病的发病率几乎是此前的两倍。&10年前，白血病的发病率每10万人里有3-5个，如今发病率是每10万人里有8-10个。在所有儿童肿瘤中，白血病占1/3。化疗和造血干细胞移植是治疗白血病常见的治疗方案。但化疗对患者的伤害较大，部分患者还会复发。而造血干细胞移植存在费用高、术后副反应大、配型成功率较低等问题。CAR-T技术目前是全球最新最先进的血液肿瘤治疗方案，国际相关数据统计，约60-90%的患者在接受这项技术的治疗中可获得完全缓解。此次人源化CAR-T临床试验的成功将有效的推动国内人源化CAR-T治疗的步伐，造福广大血液肿瘤患者。&
　　手术回顾：术后4周，体内的肿瘤细胞完全消失
　　周洋去年9月退伍，一个月后，他突然发现自己流鼻血，止不住，稍微动一下就头晕，腹部疼痛，甚至夜里疼得睡不着觉。于是赶往当地县医院检查，之后又转院到徐医附院血液科，经过血常规、骨髓细胞学、免疫学等检查，被确诊为急性B淋巴细胞白血病。在接受常规化疗后病情有所缓解，但今年2月复查时，发现体内肿瘤细胞数量正在回升。
　　&他这么年轻，要做移植，他家的经济负担比较重，而且一半白血病患者找不到合适的配型&，曹江博士经过严密的筛选和临床评价，认为周洋适合使用CAR-T治疗，&CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy(嵌合抗原受体T细胞免疫疗法)。通过抽取患者血液并分离出健康的T细胞后进行&武装&，再回输到患者体内，从而杀死肿瘤细胞。该技术几年前发明，通过近几年改良，已成为一种最新的临床细胞免疫疗法。在急性白血病、淋巴瘤和骨髓瘤的治疗上已经显示出显著的疗效，被认为是目前最有前景、可以改变未来的肿瘤治疗模式的疗法之一。&
　　据悉，周洋的姐姐在加拿大生活，她的身边有CAR-T疗法治愈白血病的实例，所以，当医生和周洋及其家人征询治疗意见的时候，得到了积极的响应。3月11日，曹江博士带领医疗小组对周洋实施了CAR-T治疗。
　　&我们血液科在血液病的免疫治疗上积累了丰富的经验和技术，紧跟国际前沿，有创新疗法的基础&，曹江博士介绍，CAR-T细胞治疗作为一种新疗法，重要的是疗效，与疗效同样重要的是副作用的防控，&一是脱靶效应：CAR-T细胞回输后可攻击携带靶向抗原的正常组织，在实体肿瘤治疗方面尚不满意;二是&细胞因子风暴&：CAR-T细胞在识别杀伤肿瘤细胞的同时，释放大量的炎症因子，常可导致高烧、肌痛、恶心等症状。个别严重的可导致低血压，甚至器官衰竭，处理不及时，会给患者造成生命危险。&
　　当时周洋在回输细胞1周之后，也曾出现高热、神经系统毒性等副作用，但在医疗团队的严密监控和干预下控制了所有的副反应。在回输后的第4周，经各项检查证明，体内的肿瘤细胞已经完全消失，临床评价为&完全缓解&。&再经过一段时间的休养，周洋就可以像健康人一样生活&，曹江博士介绍：&出院后，我们还要对他进行定期复查、随访，长期观察，以完善技术，为更多血液病患者造福。&
　　原理解析：利用患者的自身免疫细胞来清除癌细胞
　　人体的免疫系统是一个有着精兵强将、作战技术精湛的防御战队，能够识别细菌、真菌、寄生虫和病毒等入侵身体的坏分子，将其清除消灭。然而，由于基因突变所导致的细胞癌变，却能成功逃避免疫监视，关闭免疫应答，导致癌症的发生或恶化。如何驾驭免疫细胞的功能，增强免疫反应，恢复战斗力从而遏制癌症，是肿瘤免疫学家和医生一直以来的不懈努力。
　　曹江博士介绍，CAR-T疗法通俗地说就是利用病人自身免疫细胞清除癌细胞，拯救自己的生命。它首先要提取患者外周血(骨髓外的血液)中的T细胞，然后在实验室进行基因工程修饰和再造，达到&武装&的效果，再回输到患者体内。此时，被重新编码的T细胞能获得特异性识别和攻击杀伤肿瘤细胞的能力，如&细胞导弹&，能精准&点杀&白血病细胞，而不会伤及正常细胞。
　　这个过程听起来简单，事实上每一步都有很高的技术含量，门槛非常高。
　　&CDl9 CAR-T治疗&中T细胞是淋巴细胞的一种，成熟的T细胞能活化其他免疫细胞，调节免疫功能，识别特异的抗原并杀死受到感染的细胞或者癌细胞。而CD19是一个分子量为95kDa的跨膜(细胞膜)糖蛋白，分布于B细胞表面，在所有癌变的B细胞上都有表达。因此，攻击CD19分子就能杀死癌变的B细胞。这一疗法目前技术最为成熟、疗效最为确切的是治疗B淋巴细胞白血病和淋巴瘤，治疗其他恶性肿瘤的CAR-T细胞各国都在研发中，前景令人期待。
　　强强合作：CAR-T技术治愈癌症不是梦
　　2011年，美国宾夕法尼亚大学招募了30位白血病病人接受CAR-T治疗。这是对CAR-T治疗的最早报道。30位病人都经历了各种可能的治疗方法，包括化疗、靶向治疗，其中15位进行了骨髓移植，但是不幸的都失败了。通常情况下，他们的生存时间不可能超过半年。结果这批&吃螃蟹&的人震惊了世界：27位病人的癌细胞治疗后完全消失!最成功的案例是艾米丽，5岁时，她被诊断患有急性淋巴细胞白血病，首轮化疗时发生感染，差点失去双腿。后来病情复发，在等待骨髓移植手术期间，病情再次恶化。在此情况下，宾夕法尼亚大学的科学家对6岁的艾米丽进行了CAR-T治疗。如今4年半过去了，艾米丽体内没有再发现任何癌细胞，成为CAR-T治疗的招牌人物。
　　曹江博士表示，和传统治疗手段相比，CAR-T治疗的效果更为明显，目前世界各国都在积极开展CAR-T疗法的临床试验，&从经济上考虑，骨髓移植费用要40-50万，而CAR-T治疗只有3万多元，费用低、安全性又好，必将成为治疗白血病的新方法。&
　　尽管我国已有多例CAR-T治疗白血病成功的报道，但目前全球大多数临床注册以CDl9为靶点的CAR-T免疫细胞治疗所使用的识别肿瘤的序列来源于鼠源抗体，回输人体后易被自身免疫系统清除，影响临床疗效。本次临床试验使用的CAR-T的抗体识别序列经过人源化改造，理论上体内存活期更长，患者完全缓解期也可相应延长。CAR-T治疗领域国际领先的研究机构己开始着手研发人源化产品。周洋是中国首例报道的人源化CDl9 CAR-T治疗白血病并获得成功的案例。
　　本次临床试验所使用CAR-T细胞由爱康得生物医学技术(苏州)有限公司联合江苏省肿瘤生物治疗协同创新中心共同制备。爱康得生物公司的CAR-T技术处于国内领先地位。江苏省肿瘤生物治疗协同创新中心由徐州医科大学/徐医附院牵头组建，是国际首家通过肿瘤免疫细胞 AABB认证的机构，一直致力于肿瘤细胞免疫治疗的开发及产业化进程，是具有国际水平的肿瘤生物治疗技术研发、临床转化应用基地和学术、人才高地。此次人源化CAR-T临床试验的成功将有效推动国内人源化CAR-T治疗的步伐，将进一步造福广大血液肿瘤患者。
　　徐州健康热线：2
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