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[求助]MTT试验中测IC50的意义和方法
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[求助]MTT试验中测IC50的意义和方法
新手最艰难在做MTT，我一开始从设置100umol/L开始10倍稀释设立5个浓度，作出一组数据，量效关系还好，但是老板叫我测一下IC50，不太明白，希望高手给点拨和指点一下。谢谢！
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像做抗肿瘤IC50就是对癌细胞的清除率为50%时对应的样品浓度,而如果是清除某种特定物质时就是清除率为50%时对应的样品浓度,关键还是看你用什么做为指标,从而用相应的指标来衡量.方法是以浓度为横坐标,表示方式所对应的数值为纵坐标,通过线性回归得到纵坐标值为50%时对应的横坐标数值,所得到的浓度即为IC50.
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你做的什么实验我不太清楚，就以做抗肿瘤为例。那么结果是以抑制率为指标。样品的浓度选择要有一定的梯度，最高浓度样品对应的清除率应高于５０％，同样最低浓度样品对应的清除率也应低于５０％。做图时以浓度为横坐标，清除率为纵坐标，在纵坐标上找到清除率为５０％的点，做横线，找到与曲线相交的点，再向下找到这个点的横坐标对应的数值，得到的浓度就是IC50。当然也可以用回归方程来找IC50，只不过我觉得前者方便些。回归方程用Excel和SPSS都能做出来。做回归方程时要注意线性拟合度，不能太低，我做的时候一般要达到0.99以上，不过具体的界限我也不太清楚。用不同方法求出来的IC50一定会存在差异，这也是正常的，即使是用回归方程采用不同的拟合曲线结果也不同，只要前后方法一致、曲线同所得到的点比较吻合就行了。
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我就是做的抗肿瘤增殖,但是我的药却起到促进增殖的作用
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不要灰心，再重新做几次看看，看看是原料的问题还是手法的问题。或是从原料上入手，将原料提纯，或许结果能好一些。我也做过体外抗肿瘤，倒不象你有促进增殖作用，反而是清除率比较低，或者可以试试调整实验方法，做一些体内的指标，应该能有一定的收获。
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MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
步骤如下：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔
个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS &ph=7.4&配)20ul.
继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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注意事项：
（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系，
IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。要点：药品2倍稀释，多做梯度，做点线图即可！
举个例子：各组浓度0.1、0.01、0.001、0.01、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。代入
计算公式：
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
有一个公式可供参考;
lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量)
P:阳性反应率之和
Pm:最大阳性反应率
Pn:最小阳性反应率
抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值
公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率
用96孔板培养SMMC-7721肝癌做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适?根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定
一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。
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一般要低于IC50，避免非调亡性杀伤的细胞太多，造成流式细胞仪检测碎片太多。我一般用1/2-1/3的IC50，作用时间为36h。一般肿瘤细胞系空白处理的调亡率应低于1%，用药后一般为5-10%（Annexin V），细胞周期的亚G0峰比较明显.
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介绍的非常精彩了，对于新手，我还有一个建议。
相信对新手（甚至是老手）而言，MTT结果不稳定是个非常恼火的问题，因此如果老板不反对，可以不用96孔板来做，而用48孔板做，这样消耗的试剂和细胞比较多一些，但是由于体积较大，因此加样时的系统误差就减小了，特别是对于新手而言，可以减少看到复孔中上下起伏不定的OD值的机会，获得比较稳定和具有重复性的实验数据。，
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有些是不是会有雌激素样作用呢
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我前段时间也在做MTT,是在测骨髓基质干细胞诱导成骨成脂过程中的细胞生长情况。用的是96孔板，每空2×103，开始4天，OD值基本集中于0.7-0.9，后来，值陡然减小，基本在0.2-0.3徘徊，而且出来的曲线是锯齿型的，波动很大，请教，这是为什么呢？论文中的脚注要写什么
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论文中的脚注要写什么
导读：等会计学专业在职硕士学位论文脚注中的作者部分要将引用资料的所有作者姓名完整地写出来。&2、题目&题目包括论文、&是一篇完整的短文，可独立使用，不要写成目录形式，不允许以章、节、目或一、二、三南京审计学院金审学院学年论文撰写格式规范3.结论&正文的结论部分，应反映论文中通过实验、观察研究并经过理论分析后得到 注释 论文一律用脚注（在word中&插入&&&引用&&&脚注和尾注&设置）。 脚注（ 若超过十篇，按著作和论文分类。 参考格式样张 试论戴震思想中的理欲问题 复旦大学哲前言要写得简明扼要，篇幅不要太长。 本论是毕业论文的主体，包括研究内容与方法、 论文写作格式规范，符合有关规定。论文中的图表在书写和制作上规范，能够执行国家有 正文中在引用的地方用括号说明文献的出处，如*** [1,2,3]；脚注：正文中只在引用地方 论文中的表格一律采用3线表格式，表头应简洁，必要时可加脚注（中英文），即表注。表注用右上角半括号阿拉伯数字或小写英文字母如&1）&、&2）&、&a）&、&b）&等脚注中的作者部分要将引用资料的所有作者姓名完整地写出来。 2、题目 题目包括论文、 是一篇完整的短文，可独立使用，不要写成目录形式，不允许以章、节、目或一、二、三3.结论 正文的结论部分，应反映论文中通过实验、观察研究并经过理论分析后得到的学术 正文中脚注号的位置一般在标点符号之后，如&等，除非专门用来说明句子中的某个词，适合多种专业论文的撰写，是科技论文最好的结构。 2.2 引言是什么问题） 2.3 材 4.4.2 著录格式错误
此外，参考文献表中的文献序号不加括号，其后空1格。作者 直接注释时，在文中用括号。不随文列出的注释叫脚注。脚注用加半圆括号的阿拉伯数置研究生论文印刷、答辩、归档过程中的注意事项 1.研究生学位论文必须按照《关于统一博 应征得有关方面的同意，以脚注方式顺序标明。参考文献表选用顺序编码制，按文章中出
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论文中的脚注要写什么ID50是IC50吗?_百度知道
ID50是IC50吗?
常用于药物评价之类的。
IC50指半数抑制浓度，EID50，如TCID50ID50 一般指半数致死剂量
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