人类血液DNA提取方法咨询(血液,基因组,提取试剂盒) - DNA技术 - 生物秀
标题: 人类血液DNA提取方法咨询(血液,基因组,提取试剂盒)
摘要: [人类血液DNA提取方法咨询(血液,基因组,提取试剂盒)] 请教各位高手，有谁提取过人类的基因组DNA，用的是什么方法呢？本人菜鸟一枚，想用市售的血液基因组DNA提取试剂盒做，不知道可不可行？期待您的回复！ 关键词:[血液 基因组 提取试剂盒]……
请教各位高手，有谁提取过人类的基因组DNA，用的是什么方法呢？本人菜鸟一枚，想用市售的血液基因组DNA提取盒做，不知道可不可行？期待您的回复！
回复可行。且现在基本都用 提取盒 。推荐 qiagen 的 /Products/Catalog/Sample-Technologies/DNA-Sample-Technologies/Genomic-DNA/DNeasy-Blood-and-Tissue-Kit#orderinginformation按其中操作说明，不难回复我们一直用的Omega的试剂盒，效果不错，而且价格还好回复 血液样品注意：北京艾德莱溶液型的血液基因组DNA提取，小量(DN02)，中量(DN03)，大量(DN04)这三种盒子里面成分实际完全一样，就是分量不同，然后配了小量，中量，大量3种不同样品处理量的说明书。任何一种盒子，都可以按照比例放大或者缩小提取，小量，中量，大量或者说任意量的血液样品。也就是说小量的比如0.3ml x 50次的盒子，一次提取0.3ml可以提取50次，也可以一次提取3ml可以提取5次，也可以一次提取5ml可以提取3次。大量的比如10ml x 16次，一次提取10ml可以提取16次，也可以一次提取1ml可以提取160次，也可以一次提取0.3ml可以533次。中量的盒子以此次类推。A: 新鲜的抗凝血液或者冰箱冻存的抗凝血液（抗凝良好，未凝固）(1) 样品<200?l：首选DN01小量全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）。离心柱型速度快，方便。次选DN02 小量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型）。溶液型稍繁琐对操作要求高些，但是便宜，和可以提取更大分子量的基因组DNA,更适合建文库使用。(2) 样品>200?l但是<500?l：首选DN01小量全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）。但是需要同时定购一个红细胞裂解液。次选DN02 小量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型）。(3) 样品>500?l但是<20ml：样品超过500?l尤其是超过1ml的情况下，一般会超出小量离心柱子处理范围，因此一般不能选用离心柱型的DN01，而要选择溶液型的产品如DN03，DN04，具体选择哪款就看总共处理多大量了，比如一次提取1ml，但是要提取60个样品，就可以选择中量DN03，如果一次提取1ml，但是要提取160个样品，可以选择大量DN04，当然也可以选择3个中量的盒子，就是贵了不合算。如果一次提取10ml，但是只提取5个样品，也可以选择中量的DN03，选择大量的最小包装也可以提取10ml x 16次，就浪费了。B: 抗凝不完全导致含有血凝块血液（凝固血）(1) 样品<200?l：首选DN01 小量全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）。就是添加一个操作，在操作前用枪头捣碎血凝块后按照正常步骤进行。次选DN31凝固全血基因组DNA提取系统。(2) 样品>200?l但是<500?l：首选DN01 小量全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）。但是需要同时定购一个红细胞裂解液，捣碎血凝块后先用红细胞裂解液处理后按照正常步骤进行，可以问我们索取专门用于凝固血的DN01的说明书（凝固血专用）。次选DN31凝固全血基因组DNA提取系统。(3) 样品>500?l但是<20ml：样品超过500?l尤其是超过1ml的情况下，一般会超出小量离心柱子处理范围，因此一般不能选用离心柱型的DN01，只能选择DN31凝固全血基因组DNA提取系统。 总结：一般200?l左右的小量血液提取，首先推荐DN01,超过0.5ml尤其是超过1ml血液只能选择溶液型的中量DN03和大量DN04血液提取。全血基因组DNA提取为优势产品，比起其他公司如天根产品有明显优势，离心柱型的纯度高，可用于芯片制作。溶液型的技术也更好，和凯杰qiagen，罗氏roche，普洛麦格promega的原理配方说明书操作完全一样，不用蛋白酶K消化，（天根并未掌握改技术，还是用蛋白酶K消化，所以纯度低，步骤繁琐）。无论是离心柱型还是溶液型血液基因组DNA提取产品，艾德莱提取DNA均可用于芯片制作。是一个明显优势。 回复高通量高质量的全血基因组DNA提取（可达芯片级）从全血中提取DNA是一项古老又基本的分子学的工作，根据不同的下游的实验和分析，历史上使用方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，硅胶模离心柱吸附法，磁珠法，等等。各种方法都有自己的优点和缺点。随着时代的发展，尤其是近年来，各种高通量的下游应用，比如血库HLA分型，芯片制作，遗传分析，市场需要一种低成本，速度快，操作简单，高通量的全血DNA提取方法。 在这个背景下，硅胶膜离心吸附柱型的产品成了很多客户的首选。原因分析如下：1. 随着技术的进步，尤其是PCR/RealTime PCR扩增的技术进步，很多样品的需求量大大减少，几百个纳克到几个微克足够，而最常见的离心柱型小量提取，正好可以提取几个微克到十几微克的样品。完全可以满足下游试验的需要。2. 离心柱操作不使用苯酚，氯仿有毒害物质。方便快捷，裂解后配合K消化，过柱子，漂洗，洗脱，几个简单步骤就可以完成全部过程。适合于标准化高通量操作，对操作技巧要求低，即使初学者提取也可以得到稳定的结果。3. 联合的K消化，和漂洗，可以确保了高纯度的可能性。是目前所有方法中，纯度最高的一种全血提取方法。4. 国外的公司为了追求高利润，将该类产品价格定位非常高。每个样品的价格高达3，40元人民币。极大的限制了该产品的应用。近年来，在北京艾德莱为典型的研发人员的不懈努力下，大力改进创新，质量超过进口，尤其是纯度方面，全面超越进口可以轻松应用于芯片等纯度要求最高的应用。价格也只有进口的十分之一。因此该产品在国内大量替代进口产品，并迫使进口公司大幅度降价。国家人类基因组南方研究中心遗传部全血提取艾德莱和Qiagen产品测试结果：日，国家基因组南方中心。本次测试5个样本，均为保存7，8年的陈旧血，且反复冻融，有的血颜色很淡，稀薄。这是艾德莱产品（DN01）500ul全血提取结果（2微升DNA上样，marker 4微升）。胶孔无任何残留。进一步优化操作步骤后，质量更好，轻松上芯片。用户从前使用QIAGEN的盒子，大部分提的DNA胶图上孔里残留较多的蛋白，纯度差，产量偏低，不能上芯片。下图是一个QIAGENDNA电泳图（上样孔明显杂质残留）。结论：艾德莱的试剂盒性价比远超QIAGEN数倍，上芯片分析首选艾德莱全血提取试剂盒！上海华山医院使用数据汇总复旦大学国家重点实验室大规模使用全血DNA提取试剂盒 经过严格检测和对比实验，北京艾德莱生物产品DN0101 小量全血基因组DNA快速提取试剂盒的产量和纯度完全符合客户最严苛的芯片应用级要求。日前开始给复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室大规模供货，供货量达到3000人次/月。姜博士三天提了1500个陈旧血。客户评价说该款试剂盒的质量和稳定性完全达到世界领先水平，可以应用于基因芯片的要求。客户针对大规模用量大的情况下，进一步优化流程，300uL新鲜血及冻融过陈旧血，血块 提取5-10ug的全基因组DNA， 批处理48个样板只需要20分钟 脱盐，脱蛋白，用于基因芯片研究。回复目前磁珠法提取DNA有明显优势。操作简单，无需加热、离心提取速度快，可在30分钟内完成一次提取提取灵敏度高，可从2ul血、2ul的血片、头发等微量样本中提取DNA提取得率高，对于100ul新鲜抗凝全血样本，得到的DNA不少于2ug纯度好OD260 /280在1.7-1.9之间
安全性好，无苯酚、氯仿等有机溶剂的污染该公司有磁珠类相关产品，可以看看/
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-急血浆提取DNA的问题(血浆,血浆中,提取试剂盒) - PCR实验 - 生物秀
标题: 急血浆提取DNA的问题(血浆,血浆中,提取试剂盒)
摘要: [急血浆提取DNA的问题(血浆,血浆中,提取试剂盒)] 请教各位站友，有从血浆中提取DNA的经验吗？我现在用的是QIAGEN的QIAamp DNA 提取试剂盒，从血浆中提取DNA, 说明书上用200ul血浆就行了，我提了一次，用了300ul 血浆，结果是一塌糊涂，感觉没提出来。恳请各位战友，若有经验，不吝赐教，谢谢大家 关键词:[血浆 血浆中 提取试剂盒]……
请教各位站友，有从血浆中提取DNA的经验吗？我现在用的是QIAGEN的QIAamp DNA 提取盒，从血浆中提取DNA, 说明书上用200ul血浆就行了，我提了一次，用了300ul 血浆，结果是一塌糊涂，感觉没提出来。恳请各位朋友，若有经验，不吝赐教，谢谢大家
回复我都是用200的血浆，做过几次，测出来都是26-29ng/uL, 浓度也不是很高，但是到没有提不出来过回复谢谢lizzy928，我把我提取的步骤贴上来，大家帮我看看哪里可以改进，或者哪里是关键步骤，谢谢大家了有一点，步骤9中要求离心力达到2万g，我用的离心机最大转速达不到，大概1万6,7g的样子，不知道有没有影响血浆游离DNA的提取1 吸20ul蛋白酶K加入2.0ml微量离心管底部。2 加入200ul待提取的样品于微量离心管中。3 加入200ul Buffer AL缓冲液于离心管中，旋涡15秒。4 放入56℃水浴10分钟5 离心5秒钟，以便离下附于管壁上的水珠。6 加入200ul无水乙醇于离心管中，旋涡混匀15秒后，短暂离心。7 小心地将上述混合液加入QIAamp管柱中，尽量不要溅到管壁四周并在下套一个2ml收集管，盖紧管帽后离心1分钟(6000g，8000转/分)，然后丢弃下面的收集管，重新套上一个新的收集管。8 加入500ul BufferAW1缓冲液于QIAmp管柱中，尽量不要碰到管壁，盖紧管帽后离心1分钟(6000g，8000转/分)，然后丢弃下面的收集管，重新套上一个新的收集管9 加入500ul BufferAW2缓冲液于QIAamp管柱中，尽量不要碰到管壁，盖紧管帽后离心3分钟(14000转/分,20000g)10 丢弃下面的收集管，重新套上一个1.5ml微量离心管，最高速离心1min，以彻底除去BufferAW2。11 QIAamp管重新套上一个1.5ml微量离心管，打开QIAamp管，加入200ul BufferAE缓冲液，室温静置5分钟，然后离心1分钟(8000转/分)，取下洗脱后的1.5ml微量离心管，将收集到的DNA提取液经核酸测定仪测得DNA浓度及纯度，一20℃存放备用。回复你好，不好意思回复晚了我用的是QlAmp DNA Mini盒，用的是全血。关于试验步骤，我看了一下，基本都一样，但是有几个地方前辈让我注意的，我写给你，你看看是否也和我一样注意了按照你写的步骤2 加入蛋白K后，要很好的与血液pipette，多pipette几次，有助于产物的增加3 说明书上写的是pulse-vortexing 15秒，就是间断，不能太猛，不能直接vortex，这点很重要6 也是间断vortex9 我的也达不到2万g，最大1.4万，但是不受影响的其他的基本和你一样对了，最后一步 加入200μl的bufferAE，室温加热1分，6000g离心5分钟，说明书写的让离心1分，但是我们都离心5分，增加产量回复十分感谢lizzy928，写的很详细，下次我按照你说的，实验时再注意一下之前全血提DNA，我提过很多，摸索之后，用国产试剂盒也能得到比较高的产量但是这个是提血浆游离DNA，感觉好难啊产量太低了急需各位高手们指点一二回复你好，不好意思回复晚了我用的是QlAmp DNA Mini试剂盒，用的是全血。关于试验步骤，我看了一下，基本都一样，但是有几个地方前辈让我注意的，我写给你，你看看是否也和我一样注意了按照你写的步骤2 加入蛋白K后，要很好的与血液pipette，多pipette几次，有助于产物的增加3 说明书上写的是pulse-vortexing 15秒，就是间断，不能太猛，不能直接vortex，这点很重要6 也是间断vortex9 我的也达不到2万g，最大1.4万，但是不受影响的其他的基本和你一样对了，最后一步 加入200μl的bufferAE，室温加热1分，6000g离心5分钟，说明书写的让离心1分，但是我们都离心5分，增加产量请问什么是pulse-vortexing，具体应该如何操作？回复就是把管子放漩涡振荡仪上振两下，使之充分混匀
相关热词：
..........
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-www.51kit.com
DNA试剂盒|
RNA试剂盒|
ELISA试剂盒|
蛋白试剂盒|
细胞试剂盒|
其它试剂盒|
试剂盒问题咨询 |
Copyright (C) DXY All Rights Reserved.
DXY(R)和丁香园(R)标识是北京丁香园科技有限公司在中国和/或其他国家（地区）的注册商标。
版权所有 (C) 北京丁香园科技有限公司。所有权利受到保护。
- 京公网安备号}