肾功，葡萄糖测定（空腹）尿素2.2什么意思
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肾功，葡萄糖测定（空腹）尿素2.2什么意...
病情描述（发病时间、主要症状、症状变化等）：肾功，葡萄糖测定（空腹）尿素2.2什么意思
我怀孕7个多月
共1条医生回复
因不能面诊，医生的建议仅供参考
职称：副主任医师
专长：妇产科
&&已帮助用户：71710
问题分析： 您好，根据您的以上这些内容的描述，您的情况考虑是怀孕后检查的情况意见建议：您好，你的情况一般情况考虑是这种情况进行复查是可以的，估计是不会有事的
问尿素支原体阳性是什么意思？
职称：医师
专长：心脑血管疾病
&&已帮助用户：60389
病情分析： 你好，朋友，根据你的描述，尿素支原体阳性你这种情况考虑是支原体感染的情况。意见建议：建议你支原体感染的治疗原则是早诊断,早治疗,及时,足量,规范治疗
问乙肝dna测定结果1.11e+8是什么意思
职称：医师
专长：真菌性外阴炎,痛经,前庭大腺炎
&&已帮助用户：233996
指导意见：您好，乙肝，有炎症感染 时可口服阿莫西林胶囊消炎的，要同时注意乙肝的情况，必要时加护肝药物治疗。
问肌酐测定偏低是什么意思
职称：医生会员
专长：中医科相关疾病
&&已帮助用户：12171
病情分析： 你好，根据你描述的情况考虑在肾功能检查中，尿素氮与肌酐结果偏低于正常值时，意见建议：一般没有临床意义。肌酐低的原因有很多，可能与贫血、肌营养不良、肌萎缩、白血病、尿崩症等疾病有关。如肌酐测定值比肌酐正常值稍偏低，可再复查一次。
问你好，大夫，肾功中尿素氮和肌酐都低于参考范围，？
职称：医生会员
专长：子宫肌瘤 月经不调
&&已帮助用户：119697
病情分析： 这种情况尿素氮和肌酐只有在高于正常范围的时候才有临床意义，低于正常范围不需要进行治疗意见建议：目前认为不需要进行治疗，肌酐和尿素氮低于正常范围一般不代表身体出现异常
问你好，尿素测定(酶促动力学法 偏低是什么意思
职称：医生会员
专长：高血压、心血管内科
&&已帮助用户：9086
病情分析： 尿素氮参考值为3.90-7.00mmol/l
生理性尿素氮偏低，是吃太少营养所致，宜增加食物的摄取。尤其是好的蛋白质例如动物的肉、鱼、奶、蛋、及大豆制品豆腐、豆干等食物.
病理性尿素氮指标偏低时，一般指向肝脏可能有实质性损害。因为肝脏能将蛋白质代谢产物氨基酸中的氨合成成尿素，如果该指标降低，说明肝脏的代谢功能下降。意见建议：要在医生正确的诊断下进行诊疗，及早对症治疗
问你好，大夫，肾功中尿素氮和肌酐都低于参考范围，？你...
职称：医生会员
专长：阴道炎 子宫肌瘤 不孕不育
&&已帮助用户：121155
病情分析： 这种情况尿素氮和肌酐只有在高于正常范围的时候才有临床意义，低于正常范围不需要进行治疗意见建议：目前认为不需要进行治疗，肌酐和尿素氮低于正常范围一般不代表身体出现异常
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脲酶．谷氨酸脱氢酶偶联速率法测定血清尿素
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这个帖子发布于2年零323天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关键词：有证标准物质
兽药标准品
岩石标准物质
药检所对照品
【实验原理】
尿素经脲酶催化水解生成氨和二氧化碳。在谷氨酸脱氢酶(GLDH)催化下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶I(NADH)反应生成谷氨酸与NAD+。NADH在340nm波长处有吸收峰，其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的含量成正比。【试剂与器材】
1．酶试剂试剂成分和在反应液中的参考浓度如下：
pH 8．0 Tris一琥珀酸缓冲液
150mmol／L
0．3mmol／L
α-酮戊二酸
1 5mmol／L
1．5mmol／L
目前较多采用双试剂法，将NADH与α-酮戊二酸分开保存有利于试剂稳定。
2．尿素标准贮存液(100mmol／L)精确称取于60~65℃干燥恒重的尿素(MW为60．06)0．6g，溶解于无氨，并定容至100ml，加0．1g叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。
3．尿素标准应用液(5mmol／L)取上述贮存液5．0ml置100ml容量瓶中，用去离子水定容至100ml。
自动生化分析仪或分光光度计。
【操作步骤】
1．自动生化分析仪
两点速率法，标本与酶试剂比为1：100，反应温度37~C，波长340nm，延迟时间30秒，读数时间60秒。详细操作程序参照仪器和试剂盒说明书。
2．手工法混匀后立即在附有恒温装置的分光光度计上监测吸光度变化速率，计算出各管ΔA／min。【结果计算】尿素（mmol／L）=（测定管ΔA/min—空白管ΔA/min）/（标准管ΔA/min—空白管ΔA/min）×标准应用液浓度
【参考区间】
健康成年人血清尿素浓度：2．9～8．2mmol/L。
【临床意义】
1．血清尿素浓度升高
(1)生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0．3~0．5mmol／L，并随着年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0．63mmol／L。
(2)病理因素1)肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期腹泻等。2)肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。3)肾后性疾病：前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等都可能使尿路阻塞，引起血液中尿素含量增加。2．血清尿素浓度降低
较少见，严重肝病如急性黄色肝萎缩、肝硬化、肝炎合并广泛性坏死，导致尿素合成减少可使血液尿素浓度降低。【注意事项】
1．在测定过程中，各种器材和去离子水均应无氨离子污染，在340nm波长下以去离子水调零，试剂空白吸光度应大于1．0。试剂混浊或试剂空白吸光度低于1．0时不宜使用。
2．标本最好用血清，高浓度氟化物可抑制脲酶而使结果偏低。
3．血氨升高可使尿素测定结果偏高，采用两点速率法能较好地消除内源性氨的干扰，采用液体型双试剂有利于试剂稳定。
【评价与思考】
尿素测定的方法可分为两大类：①直接法：尿素直接和某试剂作用，测定其产物，如二乙酰一肟法；②脲酶法：利用脲酶催化尿素水解生成氨，然后对其进行测定。氨可用纳氏试剂、酚一次氯酸盐或酶偶联反应显色测定，也可以用离子选择性电极法。指示染料与氨反应的方法可应用于干试剂方法。电导法也是一种很特异、快速的动力学方法，具有很高的应用价值。二乙酰一肟法需强酸、煮沸等反应条件，试剂有腐蚀性，特异性不高，瓜氨酸等对反应有正干扰，精密度差，目前临床实验室已很少使用。脲酶．谷氨酸脱氢酶偶联法采用两点速率法，适合于自动生化分析仪检测，在检验科己广泛使用，其线性上限为17．6mmo1／L，批内CV 0．8％，批间CV 2．9％；回收率93．0％～105.3％。溶血、脂浊、胆红素及其他含氮化合物对酶法测定尿素的干扰较小。
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pH 8．0 Tris一琥珀酸缓冲液如何配制？为什么网上找不到相应的配制方法？谢谢解答！
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关于丁香园第36卷第2期2009年3月
浙　江　大　学　学　报(理学版)
JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition)
http://www.journals./sci
Vol.36No.2Mar.2009
DOI:10.3785/j.issn.09.02.014
等温滴定量热法测定脲酶催化尿素水解反应动力学
宋熙熙1,邵　爽2,雷群芳1,方文军1,林瑞森1
(1.浙江大学化学系,浙江杭州.浙江教育学院化学系,浙江杭州)
摘　要:采用等温滴定量热法研究脲酶催化尿素的水解反应(尿素浓度?--7mmol?L-1,pH=7.0磷酸缓冲溶液)动力学,测定了该反应在298.kcat和米氏常数Km等动力学参数.结果表明:在实验条件下,2Menten机理;温度对
kcat的影响遵循阿累尼乌斯方程,表观活化能为16.-参数的测定,.
关　键　词:;;动力学参数
3:A　　　文章编号:09)02-175-05
SONGXi2xi1SHAOShuang2,LEIQun2fang1,FANGWen2jun1,LINRui2sen1(1.DepartmentofChemistry,ZhejiangUniversity,Hangzhou.DepartmentofChemistry,ZhejiangEducationInstitute,Hangzhou310012,China)
Kineticsofurease2catalyzedhydrolysisreactionofureadeterminedbyisothermaltitrationcalorimetry.JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition),):175～179
Abstract:Isothermaltitrationcalorimetry(ITC)wasusedtoobservetheenzyme2catalyzedhydrolysisreactionofurea.Twokineticparameters,theenzymaticconversionrateconstant,kcat,andtheMaichaelisconstant,Km,fortheurea(147mmol?L-1)/urease(3.0×10-7mmol?L-1)enzymaticsysteminsodiumphosphatebufferatpH7.0atT=(298.15to318.15)Kweredeterminedfromtheisothermaltitrationcalorimetryexperimentaldata.Theresultsindicatedthattheurease2catalyzedreactionapproximatedwelltotheMichaelis2Mentenequationundertheexperimentalconditions.TheeffectofthetemperatureonthevariationofthevaluesofkcatcanbecorrelatedquantitativelytotheArrheniusequationwiththeapparentactivationenergyof16.6kJ?mol-1.Theresultsshowedagoodexampleofeffectivelyevaluatingkineticparametersforenzyme2catalyzedreactionbyITC.ItissuggestedthatITCshouldbesuitableandhavesignificantpotentialforthekineticstudyofenzymeactivity.
KeyWords:isothermaltitrationcalorimetry(ITC);enzyme2kineticparameter
　　酶的催化活性和动力学行为是生物化学和生物技术研究中非常重要的内容.用于酶催化反应研究的实验方法主要有谱学法和电化学方法等[1-3].通常,在蛋白质浓度较低时,光学或电化学方法比较有效,但是如果蛋白质浓度较高,会出现大分子的拥挤现象[2],或者由于光的散射和吸收导致灵敏度降低,应用受到一定程度的限制.因此,研究者一直在探索其他新的实验方法.
热效应是化学反应的本质特征之一,精密的量热法可有效地检测物理过程和化学反应引起的微量热量变化.量热法的应用已经有几十年,随着电子技术的进步而不断发展,已经成为一种先进的现代测量技术[4-11].依据热效应随时间的变化特征可以确定化学反应的动力学行为,称为热动力学方法.等温
滴定量热(Isothermaltitrationcalorimetry,ITC)法通过在类似于化学滴定的过程中,跟踪化学反应的
收稿日期:.
基金项目:国家自然科学基金资助项目();浙江省自然科学基金资助项目(M203090).作者简介:宋熙熙(1984-),女,硕士研究生,主要从事生物物理化学研究.
浙江大学学报(理学版)　第36卷　
热流随时间的变化,具有较高的灵敏度和较好的重现性,是发展最快、应用最多的热动力学方法
对于酶催化反应,在一定浓度的酶溶液中,连续滴定增加底物浓度,通过精确地测定热量随时间的变化,测定补偿功率及其积分量,可以确定反应速率,实时跟踪酶的活性.如果酶催化反应的速率与底物浓度的关系遵循Michaelis2Menton机理,则可用相应的动力学方程拟合实验数据而获得重要的动力学参数,如米氏常数Km,酶催化反应速率常数kcat等.
脲酶(尿素水解酶)是一种镍蛋白酶[15-16],它能催化尿素经中间产物氨基甲酸盐水解为氨和二氧化碳[17]:(NH2)2CO
热效应Q与底物尿素水解的物质的量n及水解焓ΔHhydr成正比:
ΔHhydr=[S]0?ΔHhydr,Q=n?V?
其中,[S]0是初始的底物浓度,V是反应池的体积.
催化反应速率可表示为
hydr　dt(4)
[,NH3+NH2COOH2NH3+:
脲酶催化反应在农业、有重要的应用:中尿素的含量;率;,;在食品方面,,了解皂素是否被破坏.因此,研究尿素的水解速率及脲酶的催化活性一直是受关注的课题.本文以脲酶催化尿素水解反应为研究对象,探讨等温滴定量热法在测定反应动力学参数中的应用.
通过量热测定和以上公式可以计算得到反应的速率,再由Michaelis2Menten方程
可以拟合出动力学参数Km和kcat,并计算酶的催化
(=kcat/Km),其中[E]0是酶的总浓度.效率ε
2　结果与讨论
1　实验部分
2.1　摩尔水解焓
1.1　试剂与仪器
在298.15～318.15K的不同温度下,在pH=7.0的磷酸缓冲溶液中,通过等温滴定量热实验,根
试剂:脲酶,Sigma2Aldrich试剂,-20℃储存;尿素,分析纯,宁波化学试剂公司生产;磷酸氢二钠、磷酸二氢钠,分析纯,上海新华化工试剂公司生产;磷酸缓冲溶液,pH=7.0,200mmol?L-1.滴定量热实验所用的尿素和脲酶溶液均在缓冲溶液中新鲜配制.
仪器:等温滴定量热仪为VP2ITC(MicrocalInc.,
USA),量热池1.45mL,操作系统为VPViewer.1.2　实验方法
据式(3),得到脲酶催化尿素水解反应的摩尔水解焓
ΔHhydr,如表1所列.
表1　脲酶催化尿素水解反应的摩尔水解焓ΔHhydr
Table1　ThemolarhydrolysisenthalpyΔHhydrfor
urease2catalyzedhydrolysisreactionofurea
298...15318.15
ΔHhyd/kJ?mol-1
-38.56-30.83-29.84-29.27-27.46
在量热池中注满3.0×10
mmol?L脲酶溶液,
恒温至滴定温度,控制搅拌速率为502r?min
量计自动平衡后,记录60s后,开始滴定,连续滴定50滴,每滴5μL,间隔时间300s.记录热流和时间,使用软件Origin7进行实验数据分析.1.3　数据处理
2.2　水解反应动力学参数
在298.15～318.15K的不同温度下,在pH=7.0的磷酸缓冲溶液中,尿素的浓度为147mmol?L-1,每
次滴定5μL连续滴50次,两次间隔300s,脲酶的浓度为3.0×10-7mmol?L-1.脲酶催化尿素水解反应的等温滴定量热曲线如图1(a)～图6(a)所示.
对于等温滴定量热法测定动力学参数的理论方法,文献[5,12-13]中有不少报道.量热实验直接测定的是热功率P,它反映了热效应Q随时间t的变化:
　第2期宋熙熙,等:等温滴定量热法测定脲酶催化尿素水解反应动力学
滴定量热曲线中每一个尖峰表示的是底物溶液进入反应池的稀释峰,在连续滴定的过程中,酶及底物瞬时浓度不断变化,初始基线和新基线之间的热量变化反映了酶催化反应的速率,由式(4)和(5)可将每滴定一次所产生的热量转化为该反应的速率与底物浓度的关系,如图1(b)～图6(b)所示.
由等温滴定量热实验数据和Michaelis2Menten方程(6),用非线性最小二乘法拟合可以得到脲酶催化尿素水解反应的速率常数kcat和米氏常数Km等动力学参数,然后可以计算酶催化效率ε,如表2所列.在实验温度298.15～318.15K范围内,测得的米氏常数Km=13.95±1.5mmol?L-1,不同温度下基本保持常数,与文献报道的Km=12mmol?L-1(pH=6.72的磷酸缓冲溶液中)[17],Km=10.±0.6mmol?L-1(pH=6.2的M)接近
图1　(a)298.15K时脲酶催化尿素水解反应的等温滴定量热曲线和(b)由热流值转化的
反应速率随尿素浓度的变化
Fig.1　(a)RawdataofanITCexperimentat298.15Kforurease2catalyzedhydrolysisreactionofurea.(b)Theplotsofthereactionratetransformedfromheat2flow
againsturea
concentration
浙江大学学报(理学版)　第36卷　
图6　(a)318.15K时脲酶催化尿素水解反应的等温滴定量热曲线和(b)反应速率随尿素浓度的变化
Fig.6　(a)RawdataofanITCexperimentat318.15Kforurease2catalyzedhydrolysisreactionofurea.(b)The
reactionrateplottedagainstureaconcentration
表2　脲酶催化尿素水解反应的速率常数kcat
和催化效率ε
Table2　Theenzymaticconversionrateconstantkcat,
andcatalyticefficiencyεforurease2catalyzed
hydrolysisreactionofurea
298...15318.15
ε/s-1(-1)
　　由表2可知,反应速率常数kcat和催化效率ε随温度的升高而单调增大,kcat和ε越大表明酶的活性越高,说明脲酶的活性在实验温度范围298.15～318.15K没有被破坏,最高催化温度高于318.15K.
温度越高,分子的扩散加剧,碰撞程度剧烈,氢键、质子迁移和极性改变使酶2底物有效结合增强,形成了更为稳定的复合体过渡态,稳定的复合体有助于促}