定义/限制性核酸内切酶
是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
由来/限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶一般是以属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示（品系）。例如，从Bacillus&amylolique&faciens&H中提取的限制性内切酶称为Bam&H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等。
限制性内切酶（restriction&endonuclease）：一种在特殊核苷酸序列处水解双链DNA的内切酶。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。
别名&Endodeoxyribonuclease简称限制酶
酶反应&限制性内切酶能分裂DNA分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源DNA并将其降解。
单位定义&在指明pH与37℃，在0.05mL反应混合物中，1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位。
性状制品不含非专一的核酸水解酶（由10单位内切酶与1μg&λDNA，保温16小时所得的凝胶电泳图谱的稳定性表示），这类酶主要是从原核生物中分离出来的，迄今已经从近300多种不同的微生物中分离出约4000种限制酶。
分布/限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E.&coli的pMB4(EcoRI酶）和H.&aegyptius(Hal&Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H.&aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。
分类性质/限制性核酸内切酶
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。其分子量较大；反应过程中除需Mg2+外，还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上没有特异性的酶解片断，这是I、Ⅱ类酶之间最明显的差异。因此，I类酶作为DNA的分析工具价值不大。Ⅱ类酶有EcoR&I、BamH&I、Hind&Ⅱ、Hind&Ⅲ等。其分子量小于105道尔顿；反应只需Mg2+；最重要的是在所识别的特定碱基顺序上有特异性的切点，因而DNA分子经过Ⅱ类酶作用后，可产生特异性的酶解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。
限制性内切酶识别DNA序列中的回文序列。有些酶的切割位点在回文的一侧（如EcoR&I、BamH&I、Hind等），因而可形成粘性末端，另一些Ⅱ类酶如Alu&I、BsuR&I、Bal&I、Hal&Ⅲ、HPa&I、Sma&I等，切割位点在回文序列中间，形成平整末端。Alu&I的切割位点如下：
5'-A&G^C&T-3'
3'-T&C^G&A-5'
在已发现的限制性内切酶中，近百种酶的识别顺序已被。有很多来源不同的酶有相同的碱基识别顺序，这种酶称为“异源同功酶”（isochizomer，同切限制内切酶；同裂酶）。应该注意的是，这些酶虽然有相同的识别顺序，但它们的切点并不完全一样。例如Xma&I和Sma&I都识别六核苷酸CCCGGG，但Xma&I的切点在cCCGGG，而Ema&I的切点则在CCCGgGG，前者切割DNA分子，形成带有CCGG粘性末端的DNA片段，而后者并不形成粘性末端。当然，也有识别顺序和切点都相同的酶，如Hap&Ⅱ、Hpa&Ⅱ、Mno&I，都在识别顺序CCGG内有一相同的切点，Hal&Ⅲ和BsuR&I同样在识别顺序GGCC内有一相同的切点。
用途/限制性核酸内切酶
用于DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程。
限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是提高自身的防御能力.
限制酶一般不切割自身的，只切割外源DNA。
命名/限制性核酸内切酶
限制酶的命名是根据细菌种类而定，以EcoRI为例：EEscherichia（属）cocoli（种）RRY13（品系）I首先发现在此类细菌中发现的顺序
类型/限制性核酸内切酶
根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type&I）、第二型（Type&Ⅱ）及第三型（Type&Ⅲ）。第一型限制酶
同时具有修饰（modification）及认知切割（restriction）的作用；另有认知（recognize)DNA上特定碱基序列的能力，通常其切割位（cleavage&site）距离认知位（recognition&site）可达数千个碱基之远。例如：EcoB、EcoK。第二型限制酶
只具有认知切割的作用，修饰作用由其他酶进行。所认知的多为短的回文序列（palindrome&sequence）；所剪切的碱基序列通常即为所认知的序列。是遗传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、HindⅢ。第三型限制酶
与第一型限制酶类似，同时具有修饰及认知切割的作用。可认知短的不对称序列，切割位与认知序列约距24-26个碱基对。例如：HinfⅢ。
生理意义/限制性核酸内切酶
限制作用实际就是限制酶降解外源DNA&，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。但并不是说一旦甲基化了，所有限制酶都不能切割。大多数限制酶对DNA甲基化敏感，因此当限制酶目标序列与甲基化位点重叠时，对酶切的影响有3种可能，即不影响、部分影响、完全阻止。对甲基化DNA的切割能力是限制酶内在和不可的特性，因此，为有效的切割DNA，必须同时考虑DNA甲基化和限制酶对该类型甲基化的。另外，现在很多商业限制酶专门用于切割甲基化DNA。
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常用限制性内切酶
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公司名称：上海诗溪化工科技有限公司
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常用限制性内切酶
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常用限制性内切酶
现干GMS50105.2
组织血红素氧合酶（HEME
OXYGENASE）活性比色法定量检测试剂盒
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细胞血红素氧合酶-1（HEME
OXYGENASE-1）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50612.2
组织血红素氧合酶-1（HEME
OXYGENASE-1）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50110.2
细胞醛缩酶（ADOLASE）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50110.2
组织醛缩酶（ADOLASE）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50116.1
细胞多聚ADP核糖聚合酶－1（PARP-1）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50116.2
组织多聚ADP核糖聚合酶－1（PARP-1）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50125.1
细胞异柠檬酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50125.2
组织异柠檬酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50129.5
酵母乙醇脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50477.2
组织乙醇脱氢酶III活性比色法定量检测试剂盒
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组织乙醛脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50131.3
血液乙醛脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50299.3
血液乙醛脱氢酶1活性比色法定量检测试剂盒
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细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50300.3
血液乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50301.1
细胞乙醛脱氢酶3活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50137.2
组织3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒
现干GMS50137.3
血液3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒
现干GMS50137.4
植物3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒
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细菌苹果酸脱氢酶（MDH）活性比色法定量检测试剂盒
现GMS50559.2
组织苹果酸酶（malic
enzyme）活性光度法定量检测试剂盒
现GMS50263.1
细胞磷酸腺苷脱氨酶（AMPD）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50276.1
真菌/酵母β1，3
D葡聚糖合成酶活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50303.1
细胞NADPH细胞色素C还原酶（NADPH
Cytochrome C Reductase）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50303.2
组织NADPH细胞色素C还原酶（NADPH
Cytochrome C Reductase）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50369.1
植物铁型亚硝酸盐还原酶活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50374.1
细胞谷氨酰胺酶（glutaminase）活性比色法（340）定量检测试剂盒
现干GMS50374.2
组织谷氨酰胺酶（glutaminase）活性比色法（340）定量检测试剂盒
现干GMS50374.4
细菌谷氨酰胺酶（glutaminase）活性比色法（340）定量检测试剂盒
现干GMS50375.1
细胞谷氨酰胺合酶（glutamine
synthetase）活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒
现干GMS50375.2
组织谷氨酰胺合酶（glutamine
synthetase）活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒
现干GMS50378.1
细胞甘油-3-磷酸脱氢酶（Glycerol-3-Phosphate
Dehydrogenase）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50414.3
纯化高尔基体UDP半乳糖转移酶（UDP-glactosyl
transferase－Golgi）活性比色法定量检测试剂盒
现GMS50448.4
植物多酚氧化酶（polyphenol
oxidase；PPO）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50476.4
真菌/酵母磷酸葡萄糖变位酶（phosphoglucomutase；PGM）活性光谱法定量检测试剂盒
现干GMS50478.4
真菌/酵母磷酸葡萄糖异构酶（phosphoglucose
isomerase；GPI）活性光谱法定量检测试剂盒
现干GMS50546.1
细胞胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50546.3
细菌胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50546.4
真菌/酵母胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50546.5
植物胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50550.1
细胞胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase；CGL）活性光度法定量检测试剂盒-412
现干GMS60093
真菌/酵母尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP
glucose pyrophosphorylase）活性比色法定量检测试剂盒
常用限制性内切酶
现干GMS60094
真菌/酵母脱氧胸苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（dTDP
glucose pyrophosphorylase）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50453.2
组织对氧磷酶1（PON1）芳香酯酶活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50495.3
细菌醛酮还原酶（aldo-keto
reductase）总活性比色法定量检测试剂
现干GMS50046.1
细胞钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50046.2
组织钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒
组织样品组织蛋白酶K（CATHEPSIN
K）活性荧光定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶B（CATHEPSIN
B）活性荧光定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶H（CATHEPSIN
H）活性荧光定量检测试剂盒
组织样品组织蛋白酶H（CATHEPSIN
H）活性荧光定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶G（CATHEPSIN
G）活性荧光定量检测试剂盒
组织样品组织蛋白酶C（CATHEPSIN
C）活性荧光定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶L（CATHEPSIN
L）活性比色法定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶B（CATHEPSIN
B）活性比色法定量检测试剂盒
细胞组织蛋白酶C（CATHEPSIN
C）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50235.1
细胞血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50235.2
组织血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50235.3
血液血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50235.4
体液血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50308.3
血液血管紧张素Ⅰ转化酶2（ACE2）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50238.2
组织艾滋病毒1蛋白酶（HIV-1
PROTEASE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒
现干GMS50239.1
细胞切割酶/β分泌酶（MENAPSIN
2；β－SECRETASE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒
现干GMS50239.2
组织切割酶/β分泌酶（MENAPSIN
2；β－SECRETASE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒
现干GMS50353.1
细胞逆转录酶（REVERSE
TRANSCREPTASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50353.2
组织逆转录酶（REVERSE
TRANSCREPTASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50353.3
血液逆转录酶（REVERSE
TRANSCREPTASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50353.4
体液逆转录酶（REVERSE
TRANSCREPTASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50606.1
细胞α分泌酶（α－SECRETASE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒
现干GMS50607.1
细胞γ分泌酶（γ－SECRETASE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒
现干GMS50839.5
发酵产物蛋白酶（PROTEASE）活性红色荧光法定量检测试剂盒
现干GMS50048.1
细胞基质金属蛋白酶（MMP）总活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50048.2
组织基质金属蛋白酶（MMP）总活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50048.3
体液基质金属蛋白酶（MMP）总活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50069.1
细胞基质金属蛋白酶（MMP-1）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50069.2
组织基质金属蛋白酶（MMP-1）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50069.3
体液基质金属蛋白酶（MMP-1）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50070.1
细胞基质金属蛋白酶（MMP-2）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50070.2
组织基质金属蛋白酶（MMP-2）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50070.4
细胞基质金属蛋白酶（MMP-2）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50073.5
组织基质金属蛋白酶（MMP-8）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50074.1
细胞基质金属蛋白酶（MMP-9）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50074.2
组织基质金属蛋白酶（MMP-9）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS80062.2
细胞基质金属蛋白酶（MMP2/9）原位明胶酶谱法（in
situ zymography）荧光染色试剂盒
现干GMS80062.3
冰冻切片基质金属蛋白酶2（MMP2）原位明胶酶谱法（in
situ zymography）荧光染色试剂盒
现干GMS80062.4
细胞基质金属蛋白酶2（MMP2）原位明胶酶谱法（in
situ zymography）荧光染色试剂盒
现干GMS80062.5
冰冻切片基质金属蛋白酶9（MMP9）原位明胶酶谱法（in
situ zymography）荧光染色试剂盒
现干GMS50085.3
体液基质金属蛋白酶（MMP-2）生物素明胶法比色定量检测试剂盒
现干GMS40057.1
细胞基质金属蛋白酶（MMP-9）免疫捕获检测试剂盒
现干GMS50053.1
细胞尿激酶（UROKINASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50053.2
组织尿激酶（UROKINASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50053.3
血液尿激酶（UROKINASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50053.4
体液尿激酶（UROKINASE）活性荧光定量检测试剂盒
现干GMS50053.5
细胞尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50053.6
组织尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50053.7
血液尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50053.8
体液尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量检测试剂盒
常用限制性内切酶
现干GMS50061.4
细胞肌酸激酶（CK）总活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50252.4
细胞肌酸激酶同工酶脑型（CK－－BB）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50252.5
组织肌酸激酶同工酶脑型（CK－－BB）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50252.6
体液肌酸激酶同工酶脑型（CK－－BB）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50064.1
细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒
现干GMS50064.2
组织PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒
现干GMS50094.2
组织丙酮酸激酶（PK）总活性比色法定量检测试剂盒
现干GMS50111.1
细胞磷酸果糖激酶（PHOSPHOFRUCTOKINASE）酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50111.2
组织磷酸果糖激酶（PHOSPHOFRUCTOKINASE）酶连续循环比色法定量检测试剂盒
现干GMS50112.1
细胞己糖激酶（HEXOKINASE）酶偶联反应比色法定量检测试剂盒
现干GMS50112.2
组织己糖激酶（HEXOKINASE）酶偶联反应比色法定量检测试剂盒
现干GMS50054.1
细胞Akt1/PKBa激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50054.7
细胞Akt/PKB激酶总活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50055.1
细胞AURORA-A激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50055.2
组织AURORA-A激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50056.1
细胞ERK1/2激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50057.1
细胞P38a激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50057.2
组织P38a激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50058.1
细胞PI3K激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50058.2
组织PI3K激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50059.2
组织PKA激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50060.1
细胞Src激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50060.2
组织Src激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50126.1
细胞PKC激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50126.2
组织PKC激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50140.1
细胞AMPK激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50140.2
组织AMPK激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50145.1
细胞CDK1/CYCLIN
B激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50145.2
组织CDK1/CYCLIN
B激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50146.1
细胞CDK2/CYCLIN
A激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50146.2
组织CDK2/CYCLIN
A激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50147.1
细胞CDK2/CYCLIN
E激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50147.2
组织CDK2/CYCLIN
E激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
GMS50148.1
细胞CDK3/CYCLIN
E激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
GMS50148.2
组织CDK3/CYCLIN
E激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50149.1
细胞CDK4/CYCLIN
D激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50149.2
组织CDK4/CYCLIN
D激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50150.1
细胞CDK5/P25激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50150.2
组织CDK5/P25激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50151.1
细胞CDK5/P35激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50151.2
组织CDK5/P35激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50152.1
细胞CDK6/CYC
D1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50152.2
组织CDK6/CYC
D1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50160.3
细胞GRK4激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50160.4
组织GRK4激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50161.1
细胞GSK3α激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50161.2
组织GSK3α激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50161.3
细胞GSK3β激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50161.5
细胞GSK3激酶总活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50161.6
组织GSK3激酶总活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50162.3
细胞IKKβ激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50162.4
组织IKKβ激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50163.1
细胞IRAK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50164.1
细胞JNK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50175.1
细胞PDK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
现干GMS50178.2
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限制性内切酶常见问题及注意事项
限制性内切酶常见问题及注意事项
来源：互联网
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限制性核酸内切酶产品选择专题
1)购买的限制性内切酶
带有两种不同的酶切缓冲液，该用哪一种?
每种限制性内切酶
带有一管酶的最适反应液(通常是一种4-CORE反应液)，可能还带有一只MULTI-CORE反应液。
2)4-CORE酶切缓冲液体系是什么?
大多数(大约75%)Promega公司的限制性内切酶
有一种最适酶切缓冲液，即4-CORE酶切缓冲液，分别叫作A、B、C和D。其余的25%的限制性内切酶带有一种特定的酶切缓冲液(酶切缓冲液E-L)。每一种限制性内切酶带有一只最适酶切缓冲液。
3)MULTI--CORE酶切缓冲液体系是什么?
MULTI--CORE酶切缓冲液适用于双酶切。每一种Promega公司的限制性内切酶
都测试了在MULTI--CORE酶切缓冲液中的活力，如果酶切活力达25%，就提供一只MULTI--CORE酶切缓冲液。作双酶切时，如果两个酶在MULTI--CORE酶切缓冲液中的活力达到50-100%，就可替代A-L酶切缓冲液。应选用酶活力最高的酶切缓冲液。
4)如何保存限制性内切酶
不太常用的限制性内切酶多保存在-70oC,每周或每天用的酶保存在-20 oC。有一些酶需要不同的保存条件。每一种Promega公司的限制性内切酶都提供一份分析说明以供查讯。使用限制性内切酶时，应将酶保存在冰上。
5)一般的限制性内切酶反应中(也叫消化)，应用多少内切酶?
所用的酶量取决于DNA的纯度、量和型态。限制性内切酶的活力单位定义为在适当的温度下，在1小时内，1ugDNA在50ul体积中，被完全消化所需的限制性内切酶的量。一般说来，线性DNA比超螺旋DNA更易消化。比如，酶切1uglambdaDNA，需要1-2单位的酶，而酶切1ug质粒DNA，需要3-5单位的酶。
6)使用限制性内切酶的一般步骤是什么?
一般步骤如下：
A)测试酶切DNA的量
B)计算完全酶切所需的酶量。为使终体积中甘油的浓度低于8%，计算能加的酶量，最多能加终体积的10%(甘油的浓度为5%)。
C)10X反应液的体积应为终体积的1/10;10X反应液的体积不应小于酶的体积。
D)加入计算好的DNA，10X反应液，酶。
加入水到终体积(20-50 ul)，轻轻混匀，在适当的温度下保温。一般酶的最适温度为37 oC，但有例外。应查讯分析说明。
质粒DNA (2ug/ ul) 5 ul
10X反应液 5 ul
酶(5ug/ ul) 5 ul
dH2O 35 ul
37 oC保温2-3小时。
应最后加酶。
7)一次使用两个限制性内切酶的一般步骤是什么(比如双酶切)?
一次使用两个限制性内切酶的一般步骤，如同使用一个限制性内切酶的一般步骤。但要注意两个限制性内切酶在同一种缓冲液中都要有活力。甘油的浓度不应超过终体积的8%。应注意有些酶对末端敏感，活力差。
8)能否在一次反应中用很多的限制性内切酶?
可以，一般而言，甘油浓度超过8%对酶切有抑制。有些酶在高的甘油浓度中会产生星活力。限制性内切酶提供在50%的甘油中，故10 ul反应体积中不应加入超过1.6 ul的酶。
9)消化反应中是否需要加牛血清白蛋白(BSA)?
不需要。酶切不需要加BSA。但Promega公司的限制性内切酶活力测定时，均加入乙酰化的BSA达0.1mg/ml。BSA可以提高许多限制性内切酶活力。Promega公司的限制性内切酶均提供一管乙酰化的BSA(R396D，E，F)，并建议酶切时加入BSA达0.1mg/ml。
10)星活力是什么?
星活力是指在保温条件改变，如NaCl过多存在于反应液中，使酶切的核酸序列不同于它特定的识别序列。
11)什么是同切酶?
同切酶指两个酶的识别位点和酶切位点相同，如SphI(CGTAC'G)和BbuI(CGTAC'G)互为同切酶。
12)什么是neoschizomer?
Neoschizomer指两个酶的识别序列相同，但酶切位点不同，如SmaI(GGG'CCC)和XmaI(G'GGCCC)互为neoschizomer。
13)基因组规格指的是什么?
基因组规格的酶适用于酶切包裹在琼脂中的基因组DNA。另外，染色体DNA的制备、酶切和凝胶分离的条件对基因组规格的酶作了优化。
14)如果一个限制性内切酶不是基因组规格，是否表明它不能用于处理染色体DNA?
不一定。如果一个限制性内切酶不是基因组规格,Promega公司没有测试它能否处理包裹的基因组DNA。因此需作一些测试来决定酶是否会切割底物。
15)需要用多少单位的限制性内切酶对琼脂包裹的染色体DNA进行酶切?
切割包裹的DNA比普通底物需要更多的酶，一般需要多2倍。
16)什么是蓝/白克隆测试?
蓝/白克隆测试是一种确定酶切样品中，存在的少量外切核酸酶活力的质量检查过程。通过测定一个功能基因(Beta-半乳糖苷酶)酶切和重新连接后，蓝/白斑的比例，来确定外切核酸酶活力。如果存在少量外切核酸酶活力，或不存在外切核酸酶活力，得到的是蓝色菌落。产生粘性末端的酶实验产生的白色菌落应小于2%，而产生平头末端的酶实验产生的白色菌落应小于5%。这个方法的灵敏度很高，可以检测出缺失一个碱基的酶切末端。
17)限制性内切酶是如何命名的?
限制性内切酶命名的次序如下：
A) 用3个字母代表来源的生物(如Bam代表 Bacillus amyloliquefaciens)
B) 1个字母或阿拉伯数字代表菌株(BamH)
C) 1个罗马字母代表发现或鉴定的次序(BamHI)
18)如何稀释限制性内切酶?
如果1小时内会使用限制性内切酶，可用补充有0.5mg/ml BSA的1X反应液稀释，如果在更长的时间内才会使用限制性内切酶，用酶贮存液稀释。
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