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外周血单个核细胞的分离
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【求助】外周血白细胞提取
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问题已解决悬赏丁当:10
我的试验是需要提外周血白细胞总蛋白用于跑WB，初接触试验，想请教各位老师如何分离外周血白细胞，查看各种资料发现有用红细胞裂解液的，有用白细胞分离液的，但都没具体的Protocol，求各位老师指点 ，希望能附上具体的Protocol
不知道邀请谁？试试他们
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这个应该有试剂盒的，试剂盒都有说明书的
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试剂盒不知道价格如何 我们经费有限
想选个相对性价比高的方法
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取抗凝血，加红细胞裂解液之后离心用PBS洗洗，再离心即可。
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我在网上查也说这是性价比比较高的方法，但都没有具体的Protocol ， 如果你有做过这个能给我发个具体的Protocol 给我吗？ 刚入门所以好多都不懂，谢谢
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外周血白细胞分离提取与保存方法： 实验步骤：1，取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。 2，小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中，-80度保存。 3，在血细胞中加入3倍体积的红细胞裂解液，摇匀，冰浴15min。 4, 2500rpm离心10min，弃上清。 5，加入10ml红细胞裂解液，摇匀，冰浴15min。 6, 3000rpm离心10min，弃上清。 7，倒置离心管，去掉残液。 8，得白细胞，-80℃保存。 实验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
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外周血五种白细胞形态特征
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官方公共微信外周血单个核细胞的分离及其寿命
外周血单个核细胞的分离及其寿命
外周血单个核细胞的分离&
(Separation of mononuclear cell in peripheral
&&&外周血单个核细胞
外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear
cell,PBMC)即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞，目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞递经洗涤高心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。　　
外周血单个核细胞（PBMC）
人外周血淋巴细胞（PBL）
外周血单核细胞（PBM）
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
血细胞寿命
1、红细胞-携带氧的“运输兵”红细胞是血细胞中最多的细胞，内含血红蛋白，它能把人体从肺部吸入的氧气结合后，通过备注徨再释放给各组织，因此被称为携带氧气的“运输兵”。
红细胞的平均寿命为120天，每天均有细胞衰老、死亡、也就是说，每天约有20亿个红细胞死亡。
2、白细胞—人体健康的“卫士”白细胞能吞噬进入人体的细菌和病毒以及代谢产生的对人体有害的“异物”，白细胞还有免疫功能。
白细胞的平均寿命很短，约7-14天。
粒细胞在骨髓内经10天左右释放入血液，在血液不到1天然后溢出血管进入组织或体腔内。在组织或体腔内可以行使防御功能2－3天。素爱老的粒细胞被单核-巨噬细胞系统清除，也有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排出。淋巴细胞：B淋巴细胞寿命较短，一般3－4天，景观抗原刺激后分化为浆细胞，产生特异性抗体，参与体液免疫。T淋巴细胞寿命较长，可达数月，甚至数年，经抗原致敏后，可产生多种免疫活性物质，参与细胞免疫。单核细胞放入血液，在血中停留3－6天，即进入组织演变为巨噬细胞寿命可达2－3个月。
血小板—凝血的“功臣”
尽管血液凝固是一个相当复杂的过程，但不可否认血小板在血液凝固中发挥的作用。因此，血小板被称为凝血的“功臣”。
血小板的平均寿命约为7-9天。
2、T淋巴细胞是骨髓中的淋巴干细胞移行至胸腺内分化发育而成。它们是人体内数量最多和具有多方面功能的一类淋巴细胞，约占周围血中淋巴细胞的50％～70％。T淋巴细胞的生成依赖于胸腺，故也被称为依赖胸腺淋巴细胞，“T”即英文胸腺(thymus)的第一个字母。T淋巴细胞离开胸腺随血流或淋巴液进入淋巴结的副皮质区、脾脏的动脉周围淋巴鞘等全身外周免疫器官，在血液与各种淋巴组织之间不停地再循环，能够直接攻击侵入人体的微生物和体内的肿瘤细胞等，发挥细胞免疫功能。T淋巴细胞的寿命不一，短寿命的可以为几周，长寿命的可长至十几年或终身。在普通光学显微镜下观察，T淋巴细胞与B淋巴细胞几乎没有什么区别，而在电子显微镜下观察则可以发现T淋巴细胞的体积较大，表面较光滑，有少数粗而短的微绒毛。根据T淋巴细胞不同的发育阶段、表面标记和免疫功能，又可将其分为：①辅助性T淋巴细胞。②抑制性T淋巴细胞。③杀伤性T淋巴细胞。④免疫记忆性T淋巴细胞。⑤放大作用的T淋巴细胞等若干个亚群。
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