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病理学理论指导：肿瘤的生物学行为
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Capn4在鼻咽癌恶性生物学行为中的作用与机制
鼻咽癌是起源于鼻咽上皮细胞的恶性肿瘤，发病率具有明显的地域分布特征，在东南亚地区和中国南方有极高的发病率，年发病率为20-30/10万。根据国际癌症研宄署的全球恶性肿瘤的统计数据显示2008年新发鼻咽癌病人超过84,000人，其中80％在亚洲，5%在欧洲。病因学研宄显示鼻咽癌的发生与EB病毒感染、种族背景、饮食习惯、喝酒和环境因素相关。现在，随着影像诊断、放疗技术的进步和联合放化疗的应用，使鼻咽癌局部病灶得到更好的控制。然而，多数鼻咽癌患者在初次诊断时已为晚期，其治疗效果还不尽如人意，Ⅲ期和Ⅳ期患者的5年生存率分别为53%-80%、28%-61%。因此，努力更好地理解肿瘤发生发展的分子机制，寻找新的特异性治疗靶点，在鼻咽癌早期诊断、个体化治疗治疗、预后中显得尤为重要。　　Calpain是Ca2+依赖的半胱氨酸蛋白水解酶家族。至今，在人类已鉴定14个家族成员，大部分成员与细胞粘附相关，参与细胞的伸展、迀移、增殖、细胞周期的的调控和凋亡等。Capn4(又称为Capn4S1)是calpain蛋白的一个小分子调节亚基，在调节calpain的稳定性和活性中发挥着至关重要的作用。多项研宄表明Capn4的缺失引起calpain-1和calpain-2功能障碍。在转基因小鼠中的研宄显示敲除Capn4基因可显著降低calpain活性，从而影响小鼠的正常发育，导致胚胎早期死亡；KnockdownCapn4降低成纤维细胞的迀移和粘附能力。最近的研宄报道Capn4在肝细胞癌和肝内胆管上皮细胞癌中高表达，而且Capn4表达程度与患者的预后密切相关。干扰Capn4的表达能够显著降低肝细胞癌和肝内胆管上皮细胞癌的细胞侵袭和迀移能力。由此，推测Capn4在转移癌的细胞迀移和粘附中发挥一定的作用，其在鼻咽癌的发生发展过程中是否发挥类似的作用尚不清楚。　　目的:　　1、研究Capn4在鼻咽癌中的表达情况，及与临床病理学特征的关系；2、探讨Capn4在鼻咽癌发生发展中的作用及潜在的分子机制。　　方法:　　1、分别应用RT-PCR和Western-blot方法检测Capn4在新鲜活检鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平；2、免疫组化分析Capn4在鼻咽癌组织中的表达及统计学分析其与临床病理学特征的关系；3、构建Capn4siRNA，应用transwell实验和裸鼠尾静脉注射转移实验分析Capn4对鼻咽癌细胞系5-8F、CNE2体内外侵袭和转移能力的影响；4、Westernblot分析Capn4对转移相关基因表达的影响；6、分别应用RT-PCR和明胶酶谱法分析MMP2的mRNA表达情况和酶活性；7、上调、下调MMP2的表达，transwell实验观察MMP2对Capn4调节鼻咽癌细胞侵袭转移的影响；8、Westernblot分析NF-kBp65的磷酸化情况；9、细胞增殖实验、平板克隆实验、裸鼠体内成瘤实验分析Capn4对鼻咽癌细胞在体内外增殖能力的影响；10、流式细胞仪分析Capn4对鼻咽癌细胞周期的影响；11、Westernblot分析Capn4对细胞周期相关调控蛋白的影响。　　结果:　　1、Capn4在鼻咽癌组织中的表达显著高于正常鼻咽组织无论是在mRNA水平还是在蛋白水平，新鲜细针穿刺活检鼻咽癌组织（7例）中的Capn4表达要明显高于正常鼻咽组织（2例）。同样，Capn4在鼻咽癌细胞系5-8F,、CNE2、6-10B的表达明显高于永生化的正常鼻咽上皮细胞系NP69。我们进一步扩大样本量收集了183例的石蜡组织，其中153例鼻咽癌组织，30例非癌鼻咽组织，应用免疫组化进行检测分析。结果：显示Capn4在鼻咽癌组织中的表达高于非癌鼻咽组织，差异具有统计学意义(P<0.001)。统计分析结果显示Capn4的表达强度与EB病毒感染、鼻咽癌组织的浸润深度、分化程度、TNM分期及是否发生远处转移、淋巴结转移相关。即EB病毒感染者Capn4阳性表达率高于无EB病毒感染；肿瘤分化程度越高，Capn4的阳性表达率越低；肿瘤分期越晚，Capn4的阳性表达率越高；出现远处及淋巴结转移的阳性表达率要明显高于未转移的，差异均具有统计学意义(P<0.01)。Kaplan-Meier生存期分析显示Capn4在鼻咽癌中表达的程度与鼻咽癌患者的预后密切相关，Capn4高表达的患者总生存期、无进展生存期均低于低表达者(^=0.002,P=0.003)。　　2、下调Capn4的表达能够在体内外降低鼻咽癌细胞的转移、侵袭能力　　成功构建了两对Capn4小干扰RNA(Capn4/siRNA-1andCapn4/siRNA-2)，稳定转染5-8F、CNE2鼻咽癌细胞系。RT-PCR和Westernblot分析显示与对照细胞相比，转染Capn4/siRNA-1、Capn4/siRNA-2的细胞内Capn4mRNA和蛋白表达水平均明显降低。Transwell和裸鼠体内转移实验在体内外证实转染Capn4/siRNA细胞的转移、侵袭能力显著低于对照细胞，结果显示：对照组出现7/10例肝肺转移，而注射转染Capn4/siRNA细胞的裸鼠只出现1/10的肝转移和2/10例的肺转移。　　3、Capn4通过上调MMP2的表达促进鼻咽癌细胞的转移为深入研宄Capn4调节鼻咽癌细胞转移、侵袭的分子机制，Westernblot结果表明siRNA下调Capn4的表达能够引起MMP2、Snail和Vimentin的低表达，E-cadherin的高表达，但对MMP9、N-cadherin和P-catenin的表达没有影响。RT-PCR进一步证实转染Capn4/siRNA能引起鼻咽癌细胞内MMP2mRNA表达的下调；明胶酶谱检测MMP2的酶活性也显示在5-8F、CNE2两个细胞系内下调Capn4的表达均能引起MMP2酶活性的降低。为了确定Capn4是否是通过诱导MMP2的表达来调节鼻咽癌细胞的迀移和侵袭，我们首先应用siRNA技术下调鼻咽癌细胞系MMP2的表达，然后观察细胞的迀移和侵袭能力，实验结果显示：下调MMP2的表达能引起5-8F、CNE2细胞的迀移和侵袭能力下降，且其下降程度与siRNACapn4细胞相似，差异无统计学意义。最后在抑制鼻咽癌细胞内Capn4表达的基础上，过表达MMP2的表达，观察细胞的迀移和侵袭能力，结果显示：在5-8F、CNE2细胞系中外源性过表达MMP2后均能够恢复siRNACapn4所引起的细胞迀移和侵袭能力的下降。　　4、Capn4调节MMP2的表达是通过NF-kB的活化　　有研宄报道在肝细胞癌中NF-kB是Capn4促细胞转移的下游效应分子，此外，在即往的多个研宄中发现NF-kB能够上调MMP2的表达来促进肿瘤细胞的转移。因此，我们就设想Capn4在鼻咽癌细胞系中上调MMP2的表达是否也是通过活化NF-kB来完成的。Westernblotting分析显示siRNA下调Capn4的表达后能显著降低细胞内NF-kBp65的磷酸化；相反，外源性的过表达Capn4后能增加细胞内NF-kBp65的磷酸化。最后我们应用NF-kB抑制剂helenalin抑制NF-kB的活性，观察细胞内MMP2的表达变化，结果显示不管是过表达Capn4还是knockdownCapn4，细胞在应用helenalin抑制剂后，细胞内MMP2的表达水平与对照细胞相比，均有明显的下降，该结果表明抑制NF-kB的活性能够抑制Capn4对MMP2表达的诱导。　　5、体内外实验证实Capn4促进鼻咽癌细胞的增殖Westernblot分析显示与亲本细胞及对照细胞相比，5-8F/siRNA、CNE2/siRNA细胞内的细胞增殖标志PCNA蛋白的表达明显降低。紧接着，我们应用CCK8实验进一步观察Capn4对鼻咽癌细胞体外增殖能力的影响，下调Capn4的表达可使鼻咽癌细胞5-8F、CNE2生长能力下降，与亲本细胞相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。平板克隆实验结果同样显示：与转染空载体的对照细胞系相比，转染小干扰RNA的5-8F、CNE2细胞其克隆形成数明显下降(P<0.05)。我们进一步观察下调Capn4的表达对鼻咽癌细胞裸鼠体内成瘤的影响，与注射转染空载体5-8F/Control细胞相比，注射5-8F/siRNA1细胞的裸鼠体内肿瘤增长相对缓慢，肿瘤体积明显小于对照组（P<0.05)，具有统计学意义。提取裸鼠体内移植瘤的蛋白组织行Western-blot分析，结果显示：第六周时，转染小干扰RNA在体内仍可有效地抑制细胞内Capn4的表达。　　6、抑制Capn4的表达能够阻滞鼻咽癌细胞周期进展为进一步探讨Capn4促进鼻咽癌细胞增殖的分子机制，我们应用流式细胞术检测细胞DNA的含量，结果显示：与对照5-8F/Control细胞（51.2±1.1%)相比，稳定转染Capn4/siRNA1和Capn4/siRNA2的鼻咽癌细胞5-8FG1期DNA含量（68.5±1.7%;60.7±1.3%)明显增加，S期DNA含量明显减少，P<0.05。为了进一步观察Capn4影响鼻咽癌细胞的增殖能力，是否是通过调节细胞周期相关调控分子的表达。我们应用Westernblot检测了细胞周期相关分子CyclinD1、CyclinD2、CyclinE、CDK2、CDK4、P27、P57、P21的表达情况，结果显示：下调Capn4的表达，引起CyclinD1、CyclinD2、CyclinE的表达降低和P27表达的增多，而CDK2、CDK4、P57、P21的表达没有变化。　　结论:　　1、Capn4在鼻咽癌组织中的表达要显著高于正常鼻咽组织，Capn4在鼻咽癌组织中的表达水平与EB病毒的感染、组织的分化程度、TNM分期、肿瘤的体积以及是否出现淋巴结和远处转移呈正相关；2、用小干扰RNA下调Capn4的表达可以明显抑制鼻咽癌细胞转移、侵袭、增殖和成瘤能力；3、Capn4促进鼻咽癌细胞的转移、侵袭，可能是依赖NF-kB信号通路上调MMP2的表达来实现；4、抑制Capn4的表达可以阻止鼻咽癌细胞由G1期向S期进展，使细胞停滞于G0/1期，其潜在的机制可能是部分通过下调CyclinD1、CyclinD2和CyclinE，上调p27来实现。
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万方数据电子出版社肿瘤的生物学行为包括哪些
　　1.肿瘤生长的生物学　　具有局部浸润和远处转移是恶性肿瘤最重要的特点,并且是恶性肿瘤致人死亡的主要原因.　　1．肿瘤是由一个转化细胞不断增生繁衍形成的　　一个典型的恶性肿瘤的自然生长史可以分为几个阶段：　　一个细胞的恶性转化→转化细胞的克隆性增生→局部浸润→远处转移　　在此过程中,恶性转化细胞的内在特点（如肿瘤的生长分数）和宿主对肿瘤细胞及其产物的反应（如肿瘤血管形成）共同影响肿瘤的生长和演进.　　（l）肿瘤生长的动力学.肿瘤的生长速度与以下三个因素有关：　　1）肿瘤细胞倍增时间：肿瘤群体的细胞周期也分为G0、G1、S、G2和M期.多数恶性肿瘤细胞的倍增时间并不比正常细胞更快,而是与正常细胞相似或比正常细胞更慢.　　2）生长分数：指肿瘤细胞群体中处于增殖阶段（S期+G2期）的细胞的比例.恶性转化初期,生长分数较高,但是随着肿瘤的持续增长,多数肿瘤细胞处于G0期,即使是生长迅速的肿瘤生长分数也只有20%.　　3）瘤细胞的生长与丢失：营养供应不足、坏死脱落、机体抗肿瘤反应等因素会使肿瘤细胞丢失,肿瘤细胞的生成与丢失共同影响着肿瘤能否进行性长大及其长大速度.　　肿瘤的生长速度决定于生长分数和肿瘤细胞的生成与丢失之比,而与倍增时间关系不大.目前化疗药物几乎均针对处于增殖期细胞.因此生长分数高的肿瘤（如高度恶性淋巴瘤）对于化疗特别敏感.常见的实体瘤（如结肠癌）生长分数低,故对化疗不敏感.　　（2）肿瘤血管形成.诱导血管的生成能力是恶性肿瘤的生长、浸润与转移的前提之一.肿瘤细胞本身和浸润到肿瘤组织内及其周围的炎细胞（主要是巨噬细胞）能产生一类血管生成因子,如血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（b－FGF）.这些血管生成因子促进血管内皮细胞分裂和毛细血管出芽生长.新生的毛细血管既为肿瘤生长提供营养,又为肿瘤转移提供了有利条件.　　（3）肿瘤的演进和异质化.恶性肿瘤在生长过程中变得越来越有侵袭性的现象称为肿瘤的演进,包括生长加快、浸润周围组织和远处转移等.这些生物学现象的出现与肿瘤的异质化有关.肿瘤的异质化是指一个克隆来源的肿瘤细胞在生长过程中形成在侵袭能力、生长速度、对激素的反应、对抗癌药的敏感性等方面有所不同的亚克隆的过程.由于这些不同,肿瘤在生长过程中得以保留那些适应存活、生长、浸润与转移的亚克隆.　　2.肿瘤的生长方式：肿瘤可以呈膨胀性生长、外生性生长和浸润性生长.　　1）膨胀性生长：是大多数良性肿瘤所表现的生长方式,肿瘤生长缓慢,不侵袭周围组织,往往呈结节状,有完整的包膜,与周围组织分界明显,对周围的器官、组织主要是挤压或阻塞的作用.一般均不明显破坏器官的结构和功能.因为其与周围组织分界清楚,手术容易摘除,摘除后不易复发.　　2）外生性生长：发生在体表、体腔表面或管道器官（如消化道、泌尿生殖道）表面的肿瘤,常向表面生长,形成突起的乳头状、息肉状、菜花状的肿物,良性、恶性肿瘤都可呈外生性生长.但恶性肿瘤在外生性生长的同时,其基底部也呈浸润性生长,且外生性生长的恶性肿瘤由于生长迅速、血供不足,容易发生坏死脱落而形成底部高低不平、边缘隆起的恶性溃疡.　　3）浸润性生长：为大多数恶性肿瘤的生长方式.由于肿瘤生长迅速,侵入周围组织间隙、淋巴管、血管,如树根之长入泥土,浸润并破坏周围组织,肿瘤往往没有包膜或包膜不完整,与周围组织分界不明显.临床触诊时,肿瘤固定不活动,手术切除这种肿瘤时,为防止复发,切除范围应该比肉眼所见范围大,因为这些部位也可能有肿瘤细胞的浸润.　　3．肿瘤的扩散　　是恶性肿瘤的主要特征.具有浸润性生长的恶性肿瘤,不仅可以在原发部位生长、蔓延（直接蔓延）,而且可以通过各种途径扩散到身体其他部位（转移）.　　（1）直接蔓延：瘤细胞沿组织间隙、淋巴管、血管或神经束浸润,破坏临近正常组织、器官,并继续生长,称为直接蔓延.例如晚期子宫颈癌可蔓延至直肠和膀胱,晚期乳腺癌可以穿过胸肌和胸腔甚至达肺.　　（2）转移：瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管、体腔,迁移到他处而继续生长,形成与原发瘤同样类型的肿瘤,这个过程称为转移.良性肿瘤不转移,只有恶性肿瘤才转移,常见的转移途径有以下几种：　　1）淋巴道转移：上皮组织的恶性肿瘤多经淋巴道转移；　　2）血道转移：各种恶性肿瘤均可发生,尤多见于肉癌、肾癌、肝癌、甲状腺滤泡性癌及绒毛膜癌；　　3）种植性转移：常见于腹腔器官的癌瘤.　　4.恶性肿瘤的浸润和转移机制　　（l）局部浸润　　浸润能力强的瘤细胞亚克隆的出现和肿瘤内血管形成对肿瘤的局部浸润都起重要作用.局部浸润的步骤：　　1）由细胞粘附分子介导的肿瘤细胞之间的粘附力减少；　　2）瘤细胞与基底膜紧密附着；　　3）细胞外基质降解.在癌细胞和基底膜紧密接触4～8小时后,细胞外基质的主要成分如LN、FN、蛋白多糖和胶原纤维可被癌细胞分泌的蛋白溶解酶溶解,使基底膜产生局部的缺损.　　4）癌细胞以阿米巴运动通过溶解的基底膜缺损处.癌细胞穿过基底膜后重复上述步骤溶解间质性的结缔组织,在间质中移动.到达血管壁时,再以同样的方式穿过血管的基底膜进入血管.　　（2）血行播散　　单个癌细胞进入血管后,一般绝大多数被机体的免疫细胞所消灭,但被血小板凝集成团的瘤细胞团则不易被消灭,可以通过上述途径穿过血管内皮和基底膜,形成新的转移灶.　　转移的发生并不是随机的,而是具有明显的器官倾向性.血行转移的位置和器官分布,在某些肿瘤具有特殊的亲和性,如肺癌易转移到肾上腺和脑,甲状腺癌、肾癌和前列腺癌易转移到骨,乳腺癌常转移到肝、肺、骨.产生这种现象的原因还不清楚,可能是这些器官的血管内皮上有能与进入血循环的癌细胞表面的粘附分子特异性结合的配体,或由于这些器官能够释放吸引癌细胞的化学物质.　　/view/10179.htm?fr=ala0_1_1
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?肌上皮性肿瘤，可能具有中间性或低度恶性生物学行为是什么意思，是良性的还是恶性多。术后病例所写。
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男31岁|科室：肿瘤科
聊城市传染病医院
你好，提示不好说是良性还是恶性，建议做免疫组化看看
以上所描述的就是免疫组化所写，但没写是恶性的还是良性的
那就不好说了，建议病理科专家咨询
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