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安捷伦高效液相色谱仪的故障诊断及仪器维护
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高效液相色谱仪压力不稳怎么办
& 14:16:16
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压力不稳是高效（HPLC）最为常见的故障，其表现：①压力在一段时间逐渐变化（升高或降低）；②压力瞬间变化（&3kg）。&总结原因不外乎以下四种情况：⑴有气泡；（2）漏液；（3）单向阀不良；（4）泵工作相位不正确。对于①这种情况：一般是在开机的一段时间内出现，往往是流动相在内还没有平衡好、柱箱温度还没有恒定。这些都不属于仪器问题，只要多平衡一会就会稳定。若使用的是梯度程序，由于流动相的比例正处在变化中，压力也会跟随变化。&对于第②种情况：通过下面几步分析，很快就可以确定原因。&首先排除气泡因素：气泡的产生是由于流动相中溶解了空气，在泵压的作用下空气会分离出来，气泡留在泵体内排不出去，它不仅影响到流量的准确，泵压也会不稳，这时我们只要打开排废阀，利用快速冲洗功能很快就能将气泡赶出。&为防止气泡产生，最好的办法就是使用在线脱气装置。没有脱气机时，流动相要经过脱气处理。超声波震荡是常用的除气泡方法，虽然简单但效果不佳，不妨将流动相用微孔滤膜多过滤两遍，利用真空泵的负压，将溶解在流动相中的空气释放出来，其效果要好些。&如果使用中我们发现，连接过滤头的输液管中有微小的气泡流动时，这说明过滤头有堵塞现象必须清洗，你可用10％的硝酸进行超声15分钟，如果还有气泡产生那就该换新滤头了。&其次，要检查的是输液泵有没有漏液现象，一般接在泵后的管道漏液会使压力降低，对压力稳定性影响不大。如果泵内柱塞垫或柱塞杆磨损了那就不一样了，它不仅压力上不去、变化大、流量也不足。只要观察到泵头或冲洗管漏液（有冲洗瓶时液位会升高），柱塞垫或柱塞杆肯定有问题。&第三是单向阀不良，当有盐份或者杂质等污染物附着在内球体和阀体表面时，就会破坏密封性，造成输液的单向性能降低，泵虽然在工作，但就是输送不好液体，严重时不能输液。反映到压力上，表现为严重不稳或没有压力。这时你可以卸下单向阀，用异丙醇超声清洗20分钟。如果有盐份，再用热水超声清洗一遍效果会更好。若清洗后还达不到要求，可将单向阀再接到流路上用大流量异丙醇冲洗。单向阀的结构比较精细，如果没有把握最好先不要分解清洗，用超声波清洗时要注意摆放的位置防止部件震散，否则装配后效果会不理想。当单向阀内的球体损伤时就只有更换了。&最后，引起压力不稳还有一种情况，就是泵工作的相位存在问题，这种情况发生的比较少，可以通过调节泵的初始位置解决。以上四个方面基本包含了泵压不稳的所有原因，对于大多数用户只要顺着这个思路检查，一般的故障都能得到解决。&以上就是格图在线为您提供的“高效液相色谱仪压力不稳怎么办”，更多液相色谱仪原理、液相色谱仪用途、液相色谱仪使用方法等详细信息请关注高效液相色谱仪的脱气常用方法
> 高效液相色谱仪的脱气常用方法
高效液相色谱仪的脱气常用方法
在中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。流动相是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下，高效液相色谱的必要性，并总结归纳了常用的方法。　　一、脱气的必要性　　流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。　　二、脱气方法　　1. 吹氦脱气法。　　利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa 压力下，以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。　　2. 加热回流法。　　此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。　　3. 抽真空脱气法。　　此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。　　4. 超声波脱气法。　　将欲脱气的流动相置于超声波清洗机中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果最差。
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【分享】高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇
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这个帖子发布于11年零169天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
压 力 异 常操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。A、
没有压力显示，没有流动相流动原 因
解决方法1、电源问题
1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏
2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败
3、a、采取恰当的设定
b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断
4、更换柱塞杆5、泵头内有空气
5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足
6、a、补充流动相
b、更换入口滤头7、单向阀损坏
7、更换单向阀8、漏液
8、拧紧或更换手紧接头B、
流动相流动正常，但没有压力显示原 因
解决方法1、仪表损坏
1、更换仪表2、压力传感器损坏
2、更换压力传感器C、
压力持续偏高原 因
解决方法1、流速设定过高
1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞
2、a、在允许情况下反冲色谱柱
b、更换筛板
c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀
3、a、使用恰当的流动相
b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当
4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏
5、清洗或更换进样阀6、柱温过低
6、提高温度7、控制器失常
7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞
8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞
9、清洗或更换在线过滤器D、
压力持续偏低原 因
解决方法1、流速设定过低
1、调整流速2、系统漏液
2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当
3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高
4、降低温度5、控制器失常
5、维修或更换控制器E、
压力不断上升原 因
解决方法1、见列表C
1、见列表CF、
压力降为零原 因
解决方法1、见列表A、B
1、见列表A、BG、
压力不断下降，但不回零原 因
解决方法1、见列表D
1、见列表DH、
压力波动原 因
解决方法1、泵中有气体
1、a、溶剂脱气
b、从泵中除去气体2、单向阀损坏
2、更换单向阀3、泵密封损坏
3、更换泵密封4、脱气不充分
4、a、溶剂脱气
b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）5、系统漏液
5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱
6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动漏
液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、
接头处漏液原 因
解决方法1、接头松动
1、拧紧2、接头磨损
2、更换3、接头过紧
3、a、拧松，再重新拧紧
b、更换4、接头被污染
4、a、拆下清洗
b、更换5、部件不匹配
5、使用同一品牌的配件B、
泵漏液原 因
解决方法1、单向阀松动
1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）
b、更换单向阀2、接头松动
2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏
3、a、更换混合器密封
b、更换混合器4、泵密封损坏
4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏
5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏
6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏
7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换
b、检查手紧接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏
8、a、拧紧放空阀
b、更换放空阀C、
进样阀漏液原 因
解决方法1、转子密封损坏
1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞
2、更换定量环3、进样口密封松动
3、调整4、进样针头尺寸不合适
4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸
5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞
6、更换或疏通废液管D、
色谱柱漏液原 因
解决方法1、尾端接头松动
1、拧紧接头2、卡套内有填料
2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适
3、使用合适的筛板（参考下表）筛板选择指导物质粒径
筛板孔径3-4u
检测器漏液原 因
解决方法1、流通池垫片损坏
1、a、避免过大的背景压力（压力降）
b、更换垫片2、流通池窗破碎
2、更换窗口3、手紧接头漏液
3、拧紧或更换4、废液管阻塞
4、更换废液管5、流通池阻塞
5、重新安装或更换液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、
峰拖尾原 因
解决方法1、筛板阻塞
1、a、反冲色谱柱
b、更换进口筛板
c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷
2、填充色谱柱3、干扰峰
3、a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误
4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应图
5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱B、
峰前延原 因
解决方法1、柱温低
1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当
2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载
3、降低样品含量4、色谱柱损坏
4、见A1、A2C、
峰分叉原 因
解决方法1、
保护柱或分析柱污染图
1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相
2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。D、
峰变形原 因
解决方法1、样品过载
1、减少样品载量E、
早出的峰变形原 因
解决方法1、样品溶剂选择不恰当
1、a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂F、
早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因
解决方法1、柱外效应
1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）
b、使用小体积的流通池G、
K’增加时，脱尾更严重原 因
解决方法1、二级保留效应，反相模式
1、a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）
d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式
2、a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入水（或多官能团化合物）
d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对
3、加入三乙胺（或碱性样品）H、
酸性或碱性化合物的峰拖尾原 因
解决方法1、缓冲不合适
1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、
额外的峰原 因
解决方法1、样品中有其他组份
1、正常2、前一次进样的洗脱峰
2、a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速3、空位或鬼峰
3、a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积J、
保留时间波动原 因
解决方法1、温控不当
1、调好柱温2、流动相组分变化
2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡
3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、
保留时间不断变化原 因
解决方法1、流速变化
1、重新设定流速2、泵中有气泡
2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当
3、a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相L、
基线漂移原 因
解决方法1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）
1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体
3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化
5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
10、将波长调整至最大吸收波长处M、
基线噪音（规则的）原 因
解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气
1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液图
2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全
3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备
5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动
6、在系统中加入脉冲阻尼器N、
基线噪音（不规则的）原 因
解决方法1、
1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
2、检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶
3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题
4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡
5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡
6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）
7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足
8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞
9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、
解决方法1、流动相组成变化
1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低
2、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）
3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确
4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图
a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、 使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低
6、增加浓度7、保护柱污染或失效
7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低
8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷
9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低
11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃12、检测器时间常数太大
12、使用较小的时间常数P、
分离度降低原 因
解决方法1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）
1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞图
2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。Q、
所有的峰面积都太小原 因
解决方法1、检测器衰减设定过高
1、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大
2、设定较小的时间常数3、进样量太少
3、增大进样量4、记录仪连接不当
4、使用正确的连接R、
所有的峰面积都太大原 因
解决方法1、检测器衰减设定过低
1、采取较大的衰减2、进样过多
2、减少进样量3、记录仪连接不正确
3、正确连接记录仪以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。A、
手动进样阀，转动不灵原 因
解决方法1、转子密封损坏
1、更换或调整转子密封2、转子太紧
2、调整转子的松紧度B、
手动进样阀，载样困难原 因
解决方法1、进样阀安装不当
1、重新安装2、定量环阻塞
2、清洗或更换定量环3、进样器污染
3、清洗或更换进样器4、管路阻塞
4、清洗或更换管路C、
自动进样阀，不能转动原 因
解决方法1、无压力（或电源）
1、提供恰当的压力（电源）2、转子太紧
2、调整转子的松紧度3、进样阀安装不当
3、重新安装D、
自动进样阀，其它问题原 因
解决方法1、阻塞
1、清洗或更换阻塞部件2、机械故障
2、见随机维修手册3、控制器故障
3、维修或更换控制器由气味、景象和声音可以发现的问题你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。A、
溶剂的气味原 因
解决方法1、漏液
1、见section 32、溅出
2、a、检查废液瓶是否已满
b、找到溅出的部位并清洗干净B、
热气味原 因
解决方法1、仪器过热
1、a、检查并调节通风设施
b、检查并调节温度设定
c、关掉仪器，查找维修手册C、
读数不正常原 因
解决方法1、压力不正常
1、见section 22、柱温箱问题
2、a、检查并调节设定b、参照用户手册3、检测器灯失效
3、更换灯D、
灯警告原 因
解决方法1、压力超出极限值
1、a、检查是否阻塞b、检查并调节极限值的设定2、其它警示灯
2、见用户手册E、
警告音原 因
解决方法1、溶剂泄漏/溅出
1、找到并解决2、其它警告音
2、见用户手册F、
刺耳的短音或长音原 因
解决方法1、轴承失效
1、见用户手册2、润滑不够
2、进行恰当的润滑3、机械故障
3、见用户手册由气味、景象和声音可以发现的问题你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。A、
溶剂的气味原 因
解决方法1、漏液
1、见section 32、溅出
2、a、检查废液瓶是否已满
b、找到溅出的部位并清洗干净B、
热气味原 因
解决方法1、仪器过热
1、a、检查并调节通风设施
b、检查并调节温度设定
c、关掉仪器，查找维修手册C、
读数不正常原 因
解决方法1、压力不正常
1、见section 22、柱温箱问题
2、a、检查并调节设定b、参照用户手册3、检测器灯失效
3、更换灯D、
灯警告原 因
解决方法1、压力超出极限值
1、a、检查是否阻塞b、检查并调节极限值的设定2、其它警示灯
2、见用户手册E、
警告音原 因
解决方法1、溶剂泄漏/溅出
1、找到并解决2、其它警告音
2、见用户手册F、
刺耳的短音或长音原 因
解决方法1、轴承失效
1、见用户手册2、润滑不够
2、进行恰当的润滑3、机械故障
3、见用户手册常见故障及日常维护下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。溶剂瓶问 题
维 护1、进口筛板阻塞
1、a、更换（3-6个月）b、过滤流动相，0.5u滤膜2、气泡
2、流动相脱气泵问 题
维 护1、气泡
1、流动相脱气2、泵密封损坏
2、更换（3个月）3、单向阀损坏
3、过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀进样阀问 题
维 护1、转子密封损坏
1、a、不要拧的过紧b、过滤样品色谱柱问 题
维 护1、筛板阻塞
1、a、过滤流动相
b、过滤样品
c、运用在线过滤或保护柱2、柱头塌陷
2、a、避免使用PH&8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）
b、使用保护柱
c、使用预柱（饱和色谱柱） 检测器问 题
维 护1、灯失效，检测器响应降低，噪音增大
1、更换（6个月）或准备备用灯2、流通池有气泡
2、a、保持流通池清洁
b、池后使用反压抑制器
c、流动相脱气一般问 题
维 护1、腐蚀/摩擦损坏
1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁
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