y-738321 p’、)‘一、颦 洳；{≥．嚎 硕士学位论文 ⑦ 低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞CBT凋亡 的研究 作者姓名———血——』也——一 指导教师———难』k蠡_圭至_—一 学科(岢业L——』驯址臼l蘭——一 所在学院———』虹t科堂堂蓝—一 提交日期———艘些j毡上L—一 漩疆天学骥士学往论文 诋溢诱导菠承鑫鲳尾鼗蝈薤CBT蠲亡熬鞲竞 致 謝 (Acknowledgments) 随着这本毕韭论文的诞生三年的时光也窝将过去，四首过去赞 种滋味都在心头；刚来时候的稚嫩和好奇学会了基本实验技能时的 欢欣，面对崭新的实验课题的一筹莫展以及文章初成时的满足和自 信。 在这三年的时问熙我的导师张铭教授对我的关怀和帮助不是简 单的┅句谢谢所能够表达的我的一点一滴的成长都包含了他辛勤的 污水，在3-作孛纯严谨级致、一丝不苟的作风一壹是我．Y-作、学习中 的榜样；他循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪 感谢赵小立老师和杜英老师在实验申给我的大力支持，以及在生 活中给我无私嘚帮助感谢明镇寰，邵键忠陈良标等老师在毒睾研的 过程中，给予我无私秘诣导与帮霸我的师兄黄华荣无论在生活中还 是在_Y-作中都給了我许多帮助和支持，工作中我有不懂的问题他都会 及时地帮我解答 实验室孛璐嗣擎徐超，溪妹张氇豢帮弟骆靖峰，还有吴娲翻 昊蓉蓉，冯树梅刘玉侃，苏中渊等都给过我无私的帮助和支持。 最后向我的爸爸、妈妈、哥哥致谢，感谢他们对我的理解与支持 茬论文馨将完成之鼯，我的心情无t法乎静姣秀褥遥入课题到论 文的顺剥完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮助 在这嫩请接受我诚挚的谢意1 2 浙江大学硕士学位论文 低温诱导淡水白鲳尾鲒细胞CBT凋亡的研究 中文摘要 淡水白鲳属于喜温性鱼类，水温降至IOC时就絀现寒害死亡。本实验室在 1997年建立了淡水白鲳尾鳍细胞系CBT发现该细胞系具有与整体相一致的温度 生长特性——lO℃胁迫致死，这为探讨喜溫性鱼类细胞的寒害机理提供了一一个较 为理想的研究模型 本实验以CBT细胞为研究对象，探讨了IOC低温导致淡水白鲳尾鳍细胞系 CBT死亡的原洇及其可能机制。实验采用ccK一8试剂盒法检测了低温处理前后 的细胞存活率；用荧光染料H2DCFDA染色测定细胞内活性氧(ros)含量的变化； 通过亚二倍体峰和Tunel分析检测细胞凋亡并用琼脂糖凝胶电泳法对死亡细胞 定乳酸脱氢酶(LDH)释放率。实验结果表明随着CBT细胞受10oC低温作用时 间延长，细胞存活率显著下降细胞内ROS含量和LDH释放率显著增加(仪O．01)。 低温处理3d的CBT细胞经流式细胞仪检测出现亚二倍体峰凋亡率为13％。再 理5d的CBT细胞核分裂荿多个小核呈现出典型的凋亡小体的形状。维生素E 浓度梯度显示维生素E对低温处理的CBT细胞有明显的保护作用，能明显改善 uM至1000u 细胞活力囷LDtt的释放现象且在50 M浓度范围内，该保护作用呈 CBT细胞损伤及凋亡过程 关键词：低温：淡水白鲳；细胞凋亡；活性氧；维生素E 3 浙江太学硕壵攀位论文 低温诱导淡水自鲳憋鲢绷胞CBT捌亡的研究 ishAbstract