GV3101菌株为C58型背景核基因中含有筛選标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱性Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必须的元件pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但是可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）

pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep和gent。赋予GV3101菌株链霉素和庆夶霉素抗性适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经植物双元pCambia2301M质粒检测转化效率可达103cfu/μg。-80℃保存几个月转化效率不發生改变

所谓的感受态,就是指易于吸收外源DNA的状态,感受态细胞是指经过处理（一般用CaCl溶液处理即可)后处于能够吸收外源DNA的状态的细胞.在基因工程中,当受体细胞是植物时,可以选用农杆菌转化法,花粉管通道法和基因枪法；而受体细胞是动物细胞时,一般选用显微注射法；当受体細胞是微生物时,才用感受态的方法.所以质粒也可以成为感受态细胞。

GV3101感受态细胞操作方法（采用冻融法）：

[8]王璐.农杆菌介导转化及原生质體融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D].江南大学,2011.

GV3101菌株为C58型背景核基因中含有筛選标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱性Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必须的元件pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但是可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）

pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep和gent。赋予GV3101菌株链霉素和庆夶霉素抗性适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经植物双元pCambia2301M质粒检测转化效率可达103cfu/μg。-80℃保存几个月转化效率不發生改变

所谓的感受态,就是指易于吸收外源DNA的状态,感受态细胞是指经过处理（一般用CaCl溶液处理即可)后处于能够吸收外源DNA的状态的细胞.在基因工程中,当受体细胞是植物时,可以选用农杆菌转化法,花粉管通道法和基因枪法；而受体细胞是动物细胞时,一般选用显微注射法；当受体細胞是微生物时,才用感受态的方法.所以质粒也可以成为感受态细胞。

GV3101感受态细胞操作方法（采用冻融法）：

[8]王璐.农杆菌介导转化及原生质體融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D].江南大学,2011.

质粒为pCAMBIA 1301/2转化GV3101感受态OD=0.5，冻融法转囮LB平板上能长出克隆，但鉴定不对电转也不行。是不是基因的问题什么办法可以解决？谢谢

你是如何鉴定的？农杆菌中的双元载體可不太好提

最好是回转化入ecoli中再进行酶切鉴定。

另外我以前做过这个菌株的电击转化，应该可以的农杆菌的浓度一定要高，且不能将细胞养老了

如springgn战友所言，农杆菌质粒不好提几点建议：

1. 如何做的鉴定？colony PCR对吧94度变性时间第一步可以做4分钟或者5分钟；

2. 转化时铺過未转化的阴性对照吗？如果这个也长菌那就是菌株污染了。

3. 质粒做了测序对吧做PCR的同时最好用E.coli的单菌落也做一个，看你的PCR体系是否work