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A 基因工程 B.动物细胞培养 C.体外受精

D.核移植技术 E.体外早期胚胎培养 F.胚胎分割 G.胚胎移植 H.动物细胞融合

【摘要】：目的:通过实验探究DNA损傷修复相关蛋白DNA-PKcs介导辐射诱导的EMT发生进一步阐明DNA损伤修复蛋白DNA-PKcs介导辐射诱导的EMT作用及机制。从而为DNA-PKcs在辐射诱导的肺纤维化方面的生物学功能提供基础依据方法:采用6°Coγ射线照射A549细胞,利用Western blot、免疫荧光、流式细胞术在不同剂量不同时间下检测上皮标志物与间质标志物的变化,建立辐射诱导的上皮间质转化模型。采用Western blot、免疫荧光、流式细胞术检测敲低DNA-PKcs蛋白后对辐射诱导的EMT的作用,探究DNA-PKcs是否介导了电离辐射诱导的EMT的發生采用Western blot实验检测敲低DNA-PKcs蛋白后对辐射诱导的EMT的上游转录因子的变化,推测DNA-PKcs介导辐射诱导的的EMT的具体作用机制。同时检测在DNA-PKcs敲低细胞系中敲低twi st是否能逆转DNA-PKcs敲低对辐射诱导的EMT的影响,以判断DNA-PKcs是否通过twist来影响EMT以及检测DNA-PKcs敲低后twist表达的变化及twist蛋白降解速率,探究DNA-PKcs对twist稳定性的调节。采用免疫共沉淀实验检测DNA-PKcs与twist之间是否存在相互作用从而推测DNA-PKcs介导辐射诱导的EMT的可能机制。结果:1.Western blot结果显示60Coγ射线照射A549细胞后,随着照射时间和照射劑量的增加,上皮标志物含量逐渐减少,间质标志物逐渐增多,在6Gy,48h最为明显,此结果和免疫荧光、流式细胞术结果共同说明了辐射能够诱导肺上皮細胞发生EMT2.Western blot、免疫荧光、流式细胞术.结果显示,DNA-PKcs敲低后相对于对照组,进一步促进了辐射诱导的EMT。3.采用Western blot结果显示,DNA-PKcs敲低后,twist蛋白表达上调并且降解速率变慢,说明DNA-PKcs可调节twist的稳定性结论:1.电离辐射能够诱导肺上皮细胞发生EMT。2.DNA-PKcs介导了辐射诱导的EMT的发生。3.DNA-PKcs可能是通过调控twist的降解来调节辐射誘导的EMT

【学位授予单位】：石河子大学
【学位授予年份】：2017