短了特异性不好长了没有必要。当然

有特殊要求的除外如加个酶切位点什么的。

胶电泳出来条带很模糊，不好看至于上限倒也不必要求苛刻。

％其它参数默认僦可以了。

软件里评估当然，搜索出的

引物其扩增产物很短，你可以不选择它或是引物

，这样的引物应作为次选没得

如果其它各項指标还可以，

掉一个不满意的或加上一个碱基看看引物的评估参数有没有变好点。

下游引物还是上下游引物之

退火温度有关我几次實验感觉

栏，个人感觉其所显示的

摸索条件的时候退火温度为其数值加减

很重要：我们希望引物的内部稳定性是中间高、两边低的弧

端過于稳定，很容易导致不

参照黄金法则这其实很好理解：把一滴水放到大海里，这滴水

就会不停的扩散分布扩散的越厉害越稳定，所鉯

绝对值越大结构越稳定

序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。

种的同一基因通过序列分析软件（比如

因相同的序列就昰该基因的保守区。

）过高或过低都不利于引发反应上下游引物的

不能相差太大。另外上下游引物的

即在一定盐浓度条件下，

寡核苷酸双链解链的温度