这是原核表达步骤首先高保真擴增一段含酶切步骤位点的目的基因,后进行连接克隆载体
连接后,转化克隆菌株中菌液pcr 鉴定和测序鉴定。将鉴定正确的质粒双酶切步骤,回收目的片段
将回收的目的片段连接表达载体,此时可以转化克隆菌株中菌液pcr 鉴定、双酶切步骤鉴定(不回收)和测序鉴定。将鉴定正确的质粒转化至表达菌株中
菌液pcr鉴定,也可以进行测定鉴定防止发生突变。将鉴定正确的菌株进行诱导分别取未诱导的,诱导不同时间的菌体进行蛋白电泳观察蛋白表达状况。
根据表达状况决定是否放大培养,纯化蛋白注意每次测序正确的菌株要保菌。
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