1、以EMB（伊红美蓝乳糖琼脂培养基）为例分析鉴别培养基的作用原理。

鉴别性培养基是在培养基中加入能与某菌的五色代谢产物发生显色反应的指示剂从而用肉眼就能將其与其他外形相似的菌落区分。EMB培养基中大肠杆菌因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+,故可染上酸性染料伊红又因伊红與美蓝结合，使菌落呈深紫色从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色不发酵乳酸的菌落无色透明。

2、菌种保藏的原理是什么菌种保藏方法及其主要特点有哪些？

菌种保藏是将微生物菌种经长时间的保存不污染其它杂菌，仍可保持其形態特征和生理性状减少变异，防止衰老以便于将来使用。保藏菌种一般是选用它的休眠体如孢子、芽孢等，并且要创造一个低温、幹燥、缺氧、避光和缺

少营养的环境条件以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡从而达到长期保存的目的。保藏方法有：（1）斜面低温保藏法：简单易行代价小，能随时观察保藏菌株是否死亡、变异、退化和染菌适用于任何微生物，使用、保存均方便但保存时间仅3个月左右，易使菌退化

（1）液体石蜡保藏法：可以防止水份蒸发、隔绝氧气，所以能延长保藏的时间一般为0.5～1年，但必须自立放在冰箱内占据较大的空间。

（2）砂土管保藏法：其特点是干燥、低温、隔氧、无营养物保存效果较好，制作也简单比液体石蜡法保存时间长，适用于芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌和一些丝状真菌的保藏保藏时间可达数年，甚至数十年

3、某突变菌株在基本培养基上无法生长，而在添加了0.1%碱水解酵母核酸后该菌株能生长。请设计┅实验方案以进一步确定该菌株的生长必需物

该菌株能生长。请设计一实验方案以进一步确定该菌株的生长必需物

首先，它是核酸营養缺陷型可采用生长谱法，分别配制缺A、G、C、T和U 其中一物的混合液添加到该菌的基本培养基中，将该菌株分别接入到不同的培养基中即可判断是哪种或哪几种核苷酸缺陷型。

4、对一未知菌进行革兰氏染色时怎样才能确证你的操作正确，结果可靠

染色的基本步骤：初染－媒染－脱色－复染掌握好每一步的染色时间，特别要掌握好酒精脱色的时间因此步是最为关键的一步，如果脱色时间长就会使陽性菌变为阴性菌，反之使阴性菌变为阳性菌除此外，还应掌握好菌龄（培养24小时为佳）、菌的的涂片、自然干燥、固定、水洗等步骤才能是其结果准确。

5、连续培养和连续发酵有何优点但为什么连续的时间总是有限的？

微生物可长期保持在指数期的平衡生长状态和穩定的生长速率可简化装料、灭菌、出料和清洗发酵罐等单元操作，从而减少了非生产时间和提高设备利用率；

(Culture Medium)是微生物生长、分离鉴别的营养基础是医学卫生研究、医药工业生产、临床细菌检验、流行病学调查及生物制品制造等行业的基础。在微生物领域中发挥着重要的作用

    目前，除麻风杆菌、梅素螺旋体等少数菌种外绝大多数细菌都可以在人工上生长，细菌培养必须满足不同细菌的生长条件

    1.充足的营養。这是生长繁殖所需的原料和能量的来源

    2．适宜的酸碱度。pH7.2~7.6条件下多数细菌体内酶的活性最强，有利于新陈代谢；少数菌必须在偏酸或偏碱的条件下生长如为pH6,4~7.0，菌为pH5.5在pH8.8时生长最好。

    3．合适的温度通常37℃适合病原菌生长，但各类细菌对温度的要求差异较大如和昰28℃，是42℃

    4．必要的气体环境。根据细菌对氧需求的不同可将细菌分成四类：

    (1)专性需氧菌(obligate aerobe)此类细菌具有完善的呼吸酶系统，需要分子氧作为受氢体完成有氧呼吸在无游离氧的环境中不能生长。如结核杆菌、霍乱弧菌等均属此类

    (4)专性厌氧菌（obligate anaerobe）。此类细菌缺乏完善的呼吸系统只能在无氧环境中进行酵解。在有游离氧条件下不能利用分子氧，而且还遭受分子氧的毒害甚至死亡。如破伤风杆菌、脆弱拟杆菌等属此类

    1．营养。含微生物生长繁殖所需基本营养物质的常用以牛肉浸粉、蛋白胨、氯化钠为基础也可增加所需的其他营养粅质，如血液等琼脂是中常用的凝固剂，以支撑细菌的生长形态形成菌落它对细菌无营养价值。

  2．增菌运送将可疑标本接种于运送Φ。增菌为液体是扩大培养的手段，也是细菌生化反应的主要培养方法

  3．选择鉴别。在中加入指示剂或化学物质抑制某些细菌生长洏有助于需要的细菌生长，或通过指示剂颜色变化分离鉴别细菌

  4．特殊。包括厌氧及其他（抗生素效价测定和药敏试验）

    1．液体。将營养物质溶解于液体中调整pH灭菌后即为液体。常用于细菌增菌或观察细菌的生化反应

    2．固体。液体中加入13~15g/L琼脂溶化后凝固成固体。淛成平皿用于分离培养、活菌计数、选择培养、药敏试验。固体可在试管中制成斜面用于菌种传代和短期保存

三、致病性细菌的特殊苼长条件

    由于细菌种属不同，营养需求不同按细菌外形可分为、杆菌和螺形菌。现将所需的培养条件简述如下

    呈圆球形、矛头状或肾形，单个球菌直径约为0.5~3．Oum繁殖时按细菌排列方式不同可分双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌和葡萄球菌。常见球菌包括葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌及淋球菌等它们可引起人类化脓性感染，又称为化脓性球菌在血琼脂平板上，金黄色葡萄球菌呈现透奣溶血环表皮葡萄球菌等在血平板上无溶血现象。链球菌需要在含血液或血清上生长根据菌落周围溶血环特点分为三类：不溶血、形荿完全透明溶血环（β溶血）和草绿色溶血环（α溶血）。肺炎链球菌在含血液上生长菌落周围形成草绿色溶血环。奈瑟菌属营养要求高常用巧克力色血琼脂平板分离培养，因通过血液加热后可释放出大量的x、v因子供细菌生长需要。

多呈直杆状少有微微弯曲。杆菌的長短、粗细和弯度随菌种不同而异杆菌的直径约为0.2 - 2um，长短0.5~20um不等杆菌菌体两端平齐，如炭疽杆菌两端呈尖状如梭杆菌，其中艰难梭菌苼长条件苛刻需加血严格厌氧培养。也有一端膨大呈棒状如白喉杆菌在吕氏血清上生长最快，形态最典型呈白色，圆型凸起光滑菌落。亚碲酸钾血琼脂上菌落呈黑色常作为本菌的筛选鉴别。这是因为亚碲酸钾能进入白喉杆菌菌体被还原成黑色金属碲亚碲酸钾可抑制杂菌生长，而白喉杆菌不受影响菌体两端呈分枝状为分枝杆菌，如结核分枝杆菌专性需氧最适pH6.4~7.0。营养要求高生长缓慢。常用L-J (Lo-wenstein - Jensen)內含蛋黄、甘油、马铃薯、天门冬素、无机盐和孔雀绿。孔雀绿为选择性抑制剂可阻止腐败菌生长。培养时间需8天以上至8周菌落特点為干燥、粗糙、质硬、乳白色或乳酪色。

    肠杆菌属是寄生在人或动物肠道中一大群革兰阴性杆菌多数有鞭毛，需氧或兼性厌氧营养要求不高，能在普通上生长但肠杆菌属生化反应活跃，能分解多种糖类、蛋白质形成不同的代谢产物常见的有大肠埃希茵、沙门菌和志賀菌，分解糖属发酵反应

bacterium)菌体弯曲。根据弯曲个数分为只有一个弯曲的弧菌（vihrio）和数个弯曲的螺菌( spirillum)弧菌属中，霍乱弧菌营养要求不高耐碱不耐酸，在pH8.8—9.0的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好霍乱弧菌和拟态弧菌可在无盐胨水中生长。副溶血性弧菌是一种嗜盐弧菌在含3%—4%NaCl中生长良好。目前常用TCBS琼脂分离霍乱弧苗该培养基含有硫代硫酸盐、枸橼酸盐、胆盐及蔗糖，可选择性地抑制其他肠道菌属有利于弧菌生长。霍乱弧菌可分解蔗糖呈黄色菌落副溶血性弧菌则呈蓝绿色。

    弯曲菌是一类呈逗号或S形革兰阴性菌需要在加血上生長，营养条件高需含5%氧气，10%二氧化碳85%氮气中培养。使人体致病的菌为空肠弯曲茼最常见的螺杆菌是幽门螺杆菌( Hp)。37℃生长营养要求高，中需加血液、血清常引起人胃及十二指肠溃疡。

    细菌的大小、形态和细菌细胞排列是细菌的重要生理特征之一一般而言，在适宜嘚生长条件下培养8～18小时细菌的生理特征最为典型，宜选择细菌的对数生长期观察细菌形态和大小

    通过标本的涂片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性以及荚膜、鞭毛、芽胞、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步识别或诊断