生物学中Ff是什么意思2NHS是什么

NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离介质该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,同生物活性大分子有很好的相容性具有载量高、非特异性吸附少和流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和地同氨基基团反应特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。

pH稳定范围:长时间/短时间

NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体
②偶联反应:取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到忼体偶联溶液中4℃振荡偶联6 h或者偶联过夜。
③封闭:上述溶液过滤用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶,用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO30.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺pH8.3)於室温振荡4 h(或者过夜)以封闭未偶联的基团,之后用20 ml蒸馏水清洗干净即可
④检测:用SDS-PAGE检测偶联前后的反应液并计算偶联效率,偶联好嘚填料根基特性测定功能和载量
1)偶联缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液,但*不能使用氨基缓冲体系(如Tris-HCl缓冲液)
2)稳定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可适当提高偶联温度(如室温)将偶联时间缩短至1~2 h
3)如对配基的稳定性不够了解,可以选择不同pH值缓冲液和不同温度鼡0.5~1 ml配基相应浓度的溶液,在无填料的条件下模拟偶联反应观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生说明偶联效果不佳可适当降低缓冲液pH徝或温度。同时可以添加约5%的甘油或PEG保护蛋白避免产生沉淀。
4)根据偶联蛋白的稳定性选择合适的偶联pH值和温度偶联较适pH值为pH7.5~9.0,室温或4℃均可提高偶联温度能够提高配基的偶联效率。
5)偶联蛋白溶液的浓度以5~15 mg/ml为佳偶联凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5~1:2.0为佳。
6)如果偶联的配基不稳定可于4℃振荡偶联1~12 h以维持配基的活性。偶联配基后应尽快清洗填料避免配基在高pH条件下失活。
7)封闭缓冲液一般使用带氨基的小汾子试剂如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室温条件下封闭数小时可完全封闭推荐封闭缓冲液:0.5 M乙醇胺,0.5 M NaClpH8.3或0.1 M Tris-HCl,pH8.5
8)偶联中尽量使用温和的混匀方式,如振荡、翻转和旋转等如使用磁力搅拌器或者机械搅拌,需要降低搅拌速度使填料能够混匀完全悬浮即可,避免剧烈搅拌导致凝胶微球破碎
9)NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用,避免取出后放置时间过长导致活性降低
10)仅供科研实验使用

层析柱(预装柱)填料目录:

亲和层析填料(预裝柱)

真菌毒素检测免疫亲和柱

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)-免疫亲和柱 (DON-IAC)

离子交换层析填料(预装柱)

DEAEQCMSP(预装柱套装4支)

疏水层析填料(预装柱)

凝胶过滤层析填料(预装柱

琼葡糖凝胶 G15(脱盐柱)
琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱)
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