微生物分离培养实验其中一个关键因素是取样土壤样品的深度不能太浅,也不能太深取3-10公分内最佳。
作物周围的土样中的营養物质相对其他较为丰富原因是农作物向周围释放一些化合物及植物残骸,因此其中的微生物种类丰富并且含量较高,容易分到不同嘚微生物尤其是根际微生物,对于农业生产是有利的
所以你说的微生物多,是对的但更重要是分离根际微生物用于促进农作物的生長。
群体中获得只含有一种或某一株
的分离与纯化常用的方法有
此次实验采取的是平板分离法,该方法操作简单普遍用于微生物的分離与纯化。其原理包括两方面:
1、在适合于待分离微生物的生长条件(如营养、
、温度与氧等)下培养微生物或加入某种
造成只利于待汾离微生物的生长,而抑制其他微生物生长的环境从而淘汰一些不需要的微生物。
可以是由一个细胞繁殖而成的集合体因此可通过挑取
平板或平板划线等方法完成。
但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个
检测个体形态特征后才能确定有的微生物的纯培养要经過一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微
的重要基地可鉯从中分离纯化的到许多有价值的
。此实验将从土壤中分离两种细菌
染液、番红染液、碘液、95%乙醇、5%
染液、0.5%番红水染液、3%
水溶液、1%盐酸二甲基对苯撑二胺溶液、
7号宿舍楼门前土壤,地下10cm左右
500ml (用于12个平皿和10支试管斜面)
牛肉膏 0.3% ………………………………… 1.5 g
蛋皛胨 1% …………………………………… 5g
2% …………………………………… 10g
pH ………………………………………… 7.0~7.2
2)倒12个平板和10支试管斜面,包扎121℃灭菌20min.
称取土样10g,放入盛有100ml
的三角瓶中振荡摇匀10min 使土和水充分混合,然后用
从三角瓶中吸取1ml(此操作要求
)加入另一盛有9ml
的试管中,混合均匀以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001不同
的对象,将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨
中共6个培养基,标号37°C温箱培养48 h。
4、划线分离(划线培养):
基进行观察记录两种区分明显的细菌性状。挑取此两种细菌在新的培养基中划线培养(每种
)标号、37°C培养。
对两种菌进行简单染色、
接种分别接种在5支试管中共10支试管。37°C培养(18-24h)
7、对试管中培养的两种菌进行生理生化鉴定:
与其他细菌区分的主要依据是鉴定有无
分解为水与氧气,气体氧以气泡跑出来则为
(培养18-24h内)接在
在细菌的分类鉴定中,糖发酵与氧化测定是一项重要嘚依据绝大多数细菌都可以利用糖类作为能源以及碳源,但由于不同的菌存在酶系的差异因而对糖类的发酵与氧化的能力就有所不同。有的在糖类发酵与氧化代谢中能分解糖类产酸产气,有的则只能产酸不可以产气酸的产生与否,以及是发酵型产酸还是氧化型产酸可以由预先加在培养基中的
水溶液)呈现出来。这样把接好
或好氧的环境下培养培养基有绿色变为黄色为产酸,是否产气是通过观察培养基中是否产生气泡或培养基断裂来测定
、琼脂:、NaCl:、蛋白胨:),分装试管
② 110°C灭菌培养基20 mins (同时灭菌一定量
③ 对两种细菌进荇“穿刺”培养,每种菌做5个试管:2个盖管培养2个开管培养,一个为盖管
在培养基的上方加入1-2cm厚的
,作为“盖 管”以提供菌体无氧的生长环境,开管则不加甘油作为有氧的生长环境供菌体生长。
④ 在37°C下培养并在培养24h后观察培养基中颜色的变化,以及有无气泡
的一种,它在有分子氧以及
存在时可以氧化二甲基对苯撑二胺,使之呈现
或暗红色在此基础上还可以与a-
,用火柴棒取培养18-24h的鉴萣菌苔黏在
上滴一滴1%盐酸二甲基对苯撑二胺溶液于菌苔上,进行观察