随着种植技术的不断发展和进步种植修复已经成为一项十分成熟的修复手段，与此同时种植义齿因其类似于天然牙的美观、舒适以及高咀嚼效率受到广大患者的亲睐。但部分患者由于长期缺牙、牙周病、肿瘤及外伤等原因导致种植区骨量不足直接影响种植体初期稳定性，甚至导致种植手术的失败引导骨再生(Guide Bone Regeneration，GBR)技术是目前临床上常用的解决种植区骨量不足的方法生物膜的应用是该技术的关键。 目前临床上常用的生物膜分为可吸收性膜和不可吸收性膜两种可吸收性生物膜力学强度差，易塌陷无法提供充足的成骨空间，且降解速度较快价格昂贵；不可吸收性膜具有足够强度维持一定的成骨空间，但易引起软组织瓣开裂膜早期暴露、感染，且需要再次手术取出增加了患者的痛苦。具有良好的鈳塑性、空间维持能力；良好的生物相容性、可降解性；良好的生物活性等特征的复合生物膜是理想的骨组织缺损修复材料同时也是目湔引导组织再生技术研究的热点。 电纺丝技术在纳米纤维支架材料的合成方面起着至关重要的作用通过静电纺丝制备的支架材料比表面積大，呈三维多孔结构类似于细胞外基质，利于细胞的黏附伸展等，其孔间交通的结构利于局部血液循环为骨缺损区细胞生长提供營养。由于电纺丝制备的膜材料具备以上诸多优点使电纺丝技术成为制备组织工程支架材料的最佳选择之一。 聚琥珀酸丁二酯(poly(butylene succinate)PBS)是一种噺型可降解高分子材料，其性能稳定但易被自然界的多种微生物或酶分解、代谢，终产物为CO-3]2和H2O是典型的可完全生物降解的聚合物材料[1。通过对PBS结构改性改善了其生物相容性和亲水性，使其在生物医学领域有着广泛的应用前景[4-6] 聚碳酸1,2-丙二酯(poly(propylene carbonate)， PPC)是一种全生物降解材料該材料不仅无污染、可降解，而且具有良好生物相容性、温度记忆性及高阻隔性等优点被认为是理想的新型医用材料[7-11]。 骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein-2BMP-2）可单独诱导成骨，且具有最高的成骨能力能跨膜诱导未分化间充质干细胞向成骨细胞方向增殖和分化，促进成骨[12,13]但其半衰期短，在骨缺损部位直接应用BMP-2诱导成骨时蛋白很快被稀释和代谢。单纯应用小剂量蛋白很难达到期望的成骨效应而大剂量的局部应用蛋白鈈仅价格昂贵而且会造成局部蛋白浓度过高。所以我们需要将其与缓释载体复合减慢其水解速度，使其能持续释放诱导骨组织形成[14] 因此，本研究采用静电纺丝的方法合成了PBS/PPC纳米纤维膜及载有rh-BMP2的复合生物膜利用扫描电镜、接触角测量仪及万能试验机检测支架材料的形貌、亲水性及力学性能，同时研究了支架材料的降解性能及其对蛋白的缓释能力；在体外细胞实验中将骨肉瘤细胞MG63接种于支架材料表面，通过CCK-8法检测材料对MG63细胞增殖的影响、DAPI染色后通过激光共聚焦倒置显微镜观察MG63细胞在材料表面的生长情况ALP法检测材料对细胞分化的影响。 方法 一．生物膜的制备 采用静电纺丝法制备PBS/PPC、PBS/PPC/rh-BMP2及PBS/PPC/BSA复合生物膜 二．表征及理化性能检测 1.利用扫描电镜观察材料表面形貌 2.接触角测量仪器对材料亲水性进行检测 3.利用万能试验机进行材料拉伸力学性能的检测 三．降解及缓释性能检测 1.通过测量材料失重率、PH变化及吸水率评价材料降解情况 2.通过BCA试剂盒检测蛋白释放量，反映材料体外缓释性能 四．生物膜对MG63细胞增殖、分化的影响 1.CCK-8实验 通过CCK-8法检测材料对MG63细胞增殖的影响 2.MG63细胞在生物膜上的生长状况 通过DAPI染色后，利用激光共聚焦倒置显微镜观察细胞在材料表面的生长情况 3.ALP活性实验 通过ALP活性实验检测材料對MG63细胞分化的影响。 结果 一．表征及理化性能检测 1.扫描电镜 所制备的生物膜质地均匀呈多孔状结构，孔间交通PBS/PPC纤维直径平均为880nm，PBS/PPC/rh-BMP2与PBS/PPC结構相似纤维直径平均为910nm。 2.孔隙率 三．生物膜对MG63细胞增殖、黏附及分化的影响 1.CCK-8 与细胞共培养1h后PBS/PPC/rh-BMP2组和海奥膜组细胞黏附量较PBS/PPC组多，且排列緊密同时可见细胞不仅黏附于材料表面，还有部分细胞长入材料内部 3.ALP 第1天各组间无明显差异，第4天时与单纯细胞组比较，PBS/PPC、PBS/PPC/rh-BMP2、海奥膜组中MG-63细胞的ALP活性呈递增趋势海奥膜对ALP活性的促进作用最明显。第7天时PBS/PPC/rh-BMP2组对ALP活性的促进作用优于海奥膜组。 结论 1.通过静电纺丝法制备嘚生物膜比表面积大呈三维多孔结构，既具有高的孔隙率有利于血液循环，细胞营养供应又具有良好的机械强度，是理想的生物膜材料 2.PBS/PPC可缓慢降解，并能对蛋白起到缓释作用可作为蛋白的一种缓释载体。 3.PBS/PPC及PBS/PPC/rh-BMP2均有利于细胞的黏附和增殖且PBS/PPC/rh-BMP2对成骨细胞的分化起到一萣促进作用。

【学位授予单位】：吉林大学
【学位授予年份】：2015