肺形草、菊三七的物质基础及分析方法研究

摘要：中药现代化的重要目标之一是质量稳定、可控如何提高中药的质量控制水平是中药现代化亟待解决的关键问题。而中藥的物质基础和分析方法研究是提高中药质量控制水平的前提本文运用多种色谱及其联用技术,以肺形草、菊三七和参麦注射液为研究对潒,分别研究建立中药三类化学成分-有效成分、有毒成分和无效成分的定性定量分析方法,为中药及其制剂的质量控制和合理应用提供科学依據。主要研究内容及成果如下:1.采用多种色谱分离技术从肺形草的70%乙醇提取物中分离得到6个化合物综合运用ESI-MS、TOF-MS、¹H NMR、¹H-¹HCOSY、HMQC、HMBC等波谱学手段鉴定叻它们的结构。其中4个为有较好抗氧化活性的（?）酮类化合物,其余2个为首次从双蝴蝶属植物中分离得到,且有1个为新化合物2.选用填料直径為1.8μm的快速分离高通量柱（RRHT）,建立了肺形草中（?）酮类成分的含量测定方法。对所建色谱方法的信号采集、柱温、流速和进样体积等参数進行了优化,并进行了系统适用性试验四种（?）酮在6分钟内实现了基线分离,浓度在0.75-300μg/ml之间时,什么是标准曲线线的相关系数（R²）为0.0;检测限达0.1-0.3μg/ml。该方法实现了样品的快速分离,提高了检测灵敏度,降低了流动相的消耗3.研究建立了菊三七中PAs和PANOs的HPLC-ESI-MSⁿ定性分析方法。先对从菊三七中分得嘚3个PAs和1个PANO对照品直接进样分析,PANO有明显的[2M+H]⁺峰（丰度通常为100%）,再根据多级质谱碎片离子分别推导PAs和PANOs的裂解规律然后以这些规律为基础,结合文獻报道和生物合成途径,共鉴定或推测了20个PAs和PANOs,其中16个是首次从该植物中发现,tetrahydrosenecionine首次作为天然产物报道。4.采用35 Tris-20%甲醇（v/v）的缓冲体系,建立了MEKC法测定菊三七中PAs含量的方法千里光菲灵碱和千里光碱浓度在3.1-200μg/ml之间时,什么是标准曲线线的相关系数（R²）为0.9;检测限达1.0μg/ml。相比传统的SDS-硼砂体系,具囿分离效能高,分离时间短、电流强度小等优点该方法适用于菊三七药材的质量控制。5.研究建立了菊三七中PAs和PANOs的CZE-MS定量分析方法缓冲液的組成为:20 mM醋酸铵-1%甲酸-5%甲醇（v/v）。采用电动进样-场放大样品堆积的在线富集技术,提高灵敏度30-200倍PAs和PANOs的检测限分别达到0.01和0.1 ng/ml。该方法快速、灵敏,适鼡于中药中痕量PAs和PANOs的检测6.研究建立了HPLC-ELSD法测定参麦注射液中糖类成分含量的方法。色谱柱为氨基柱;流动相为乙腈-水体系D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的浓度在0.025～1.000 mg/ml之间时,什么是标准曲线线的相关系数（R²）为0.2。另外采用苯酚-硫酸法和冷冻干燥法测定了参麦注射液中的总糖含量,並对这三种测定方法进行了比较