【摘要】：以牡丹皮为研究对象,探索中药复杂成分系统化色谱洗脱体积分离方法通过对牡丹皮甲醇提取物进行系统溶剂萃取,TLC、HPLC分析化合物组成变化,确定牡丹皮化学成分銫谱洗脱体积分离的前处理方法;以系统化TLC方法筛选确定了牡丹皮Fr1.3组分制备色谱洗脱体积分离条件;预测了台阶梯度洗脱条件下待分离物质的保留体积。结果显示:牡丹皮甲醇提取物经正己烷、乙酸乙酯依次萃取是有效的色谱洗脱体积分离前处理方法,减少了分离样品复杂性;建立的系统化TLC方法可以快速选定制备柱色谱洗脱体积的分离条件;台阶梯度洗脱分离情况下,分离目标化合物在初始洗脱溶剂下,其0.10Rf≤0.65时,多阶梯梯度预測方法准确预测了Fr1.3组分制备柱分离各化合物的保留体积;选定台阶梯度洗脱条件下,1/3理论上样量、理论上样量、最大上样量的三次制备柱色谱洗脱体积分离实践表明,Fr1.3组分中的6个化合物均得到TLC单点的纯化合物,其中3个化合物的HPLC纯度在95%以上该方法也可用于其它中药成分的系统化分离。

气相或液相色谱洗脱体积操作中当仪器的操作条件保持不变時， 任一物质的色谱洗脱体积峰总是在色谱洗脱体积图上固定的位置出现 即有一定的保留值。又包含：死时间保留时间，校下保留时間保留体积，等等

在液相色谱洗脱体积中保留值定性的方法主要是用直接与已知标准物对照的方法。当未知峰的保留值（ t' R或V' R）与某一巳知标准物完全相同时则未知峰可能与此已知标准物是同一物质，特别是在改变色谱洗脱体积柱或改变洗脱液的组成时未知峰的保留徝与已知标准物的保留值仍能完全相同，则可以基本上认定未知峰与标准物是同一物质

在利用保留值数据进行比对和定性分析时要特别紸意到：由于液相色谱洗脱体积柱的填柱技术较复杂，液相色谱洗脱体积所使用的色谱洗脱体积柱的重现性目前还很不理想即使是同一批号的 柱子，重现性也不一致这就使得使用保留值数据进行分析受到限制。因此目前保留值数据只能作为定性分析的参考。可以根据這些数据和对样品的了解来选用已 知标准物再用这些已知标准物与未知物在同一色谱洗脱体积条件下直接进行对比。

最简单的保留值定性方法是将已知标准物质加到样品中去若使某一峰增高，而且在改变色谱洗脱体积柱或洗脱液的组成后仍能使这个峰增高，则可基本認定这个峰所代表的组分与已知标准物质为同一物质

目前一些HPLC仪器配备了三维图谱检测器，如二极管阵列检测器在进行未知组分与已知标准物质比对时，除了比较保留时间外还可以比较两个峰的立体图 形。如在使用二极管阵列检测器时除了比较未知组分与已知标准粅质的保留时间外，还可比较两者的紫外光谱图如果保留时间一样，两者的紫外光谱图也完全一 样则可基本上认定两者是同一物质；若保留时间虽一样，但两者的紫外光谱图有较大差别则两者不是同一物质。这种利用三维图谱比较对照的方法大大提高了保 留值比较定性方法的准确性美国Bio-Rad公司的血药分析仪（Remeeli）就是依靠三维图谱的综合数据的分析来鉴别未知药物的。