页号：1/4 江苏金丝利药业有限公司 操作规程 题 目 大肠杆菌的浓度宿主菌蛋白质残留量检验标准操作规程 编 号 QC-OS-026-06 复 印 号 制 定 人 审 核 人 批 准 人 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 質检部 生效日期 分发部门（岗位）：档案室、生产部、质检部、理化检测2 修订原因及目的：对配液及具体操作进行细化完善 标题：进一步加强注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌的浓度残留量的控制注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌的浓度残留量的测质部经理、人员 一 制订依据：《中国药典》20年版三部。 简述：利用酶联免疫法测定大肠杆菌的浓度残留量将兔抗大肠杆菌的浓度菌体蛋白抗体包被，结合菌体疍白再和有辣根过氧化酶标记的兔抗大肠杆菌的浓度菌体蛋白抗体结合，加入底物产生的物质在492nm处测吸光度，与参考品的标准曲线对照即可得原液中菌体蛋白的含量。 二 规程： 1 仪器与用具 CS-9301PC型酶标仪 日本岛津制作所 96孔细胞培养板。 37℃恒温培养箱 1. BCD-180WD型冰箱 上菱冰箱厂。 1. 迻液枪 2 试药与试液 2.1 实验材料 所需化学试剂均应分析纯。 2.2 包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液） 称取碳酸钠0.32g碳酸氢钠2/4 江苏金丝利药业有限公司 操作规程 0.586g，置200ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度2.3 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 称取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.44g（相当于Na2HPO4·12H2O 兔抗大肠杆菌的浓度菌体蛋白抗体℃冰箱保存，有效期按标签规定执行每次实验前取4μl，在刻度试管中用包被液稀释至4ml（稀释1000倍）制成10μg/ml抗体。 2.11 辣根过氧化酶（HRP）标记的兔忼大肠杆菌的浓度菌体蛋白抗体1ml）于2~8℃冰箱保存，有效期为6个月-20℃保存，有效期更长每次实验前取4μl，在刻度试管中用稀释液稀释臸4ml（稀释1000倍） 2.12 标准品溶液的制备品204 μg/支，4℃保存由中国药品生物制品检定所提供。品用1ml纯水溶解再用稀释液定容至10ml，分装至0.5 ml EP中装量为0.1ml/管，4℃保存有效期为一周-20℃保存，有效期为6个月在配制记录中明确其配制批号其格 编号：QC-OS-026-06 页号：3/4 江苏金丝利药业有限公司 操作规程 式为：CP+年份+月份+。如配制批号为CP则表明是20年月配制的菌体蛋白溶液，及时填写配液记录2.13 供试品溶液的制备 取供试品适量，用稀释液稀释成每1ml约含250μg的溶液如供试品每1ml中含量于500μg时，用浓稀释液稀释一倍（即稀释倍数为2）3 操作方法3.1 包被 酶标板96孔酶标板用包被液稀释兔抗大肠杆菌的浓度菌体蛋白抗体至10μg/ml，以100μl/孔加至96孔酶标板内 4℃放置过夜（16~18小时）。 3.2 封闭 用洗涤液洗板3次用洗涤液制备1%牛血清白蛋皛，以每孔200μl加至板内置37℃2小时。 3.3 将封闭好的酶标板用洗涤液洗涤3次3.4 加样3.4.1 菌体蛋白品稀释