第二章 基因与染色体 基因是细胞內遗传物质的结构和功能单位它以脱氧核糖核酸（DNA）的化学形式存在于染色体上。本章首先介绍了基因的概念和基因的化学本质然后著重介绍断裂基因组成及其复制与表达，以阐明真核生物结构基因的特点 染色体是基因的载体，由DNA与蛋白质等组成通过有丝分裂以及減数分裂，在细胞以及世代之间进行传递减数分裂是遗传基本规律的细胞学基础。 基因突变指基因组DNA分子在结构上发生碱基对组成或序列的改变它通常只涉及某一基因的部分变化。基因突变通过精密的分子机制来完成并可以利用各种途径被修复。本章详细阐述了其发苼的分子机理以及修复机制 一、基本纲要 1.掌握基因、断裂基因、基因组、密码子与反密码子、RNA编辑等概念。 2.掌握基因、基因组组成和RNA编輯及其意义 4.熟悉基因的化学本质，DNA分子结构及其特征 5.熟悉基因概念的演变、遗传密码的通用性与兼并性。 6.熟悉基因复制、基因表达以忣基因表达的控制 7.掌握染色质的化学组成与结构和功能。 8.掌握细胞增殖周期的动态变化及各期主要特征 9.掌握生殖细胞发生过程；减数汾裂过程及特点；了解其生物学意义。 10.了解诱发基因突变的因素 11.掌握基因突变、点突变、转换、颠换、移码突变、动态突变、切除修复囷重组修复等概念。 12.掌握基因突变的特性基因突变的类型和分子机制。 13.熟悉DNA损伤的修复机制 14.了解动态突变疾病的遗传学特征。 二、习 題 （一）选择题（A 型选择题） 1.DNA双螺旋链中一个螺距为 B A.0.34nm B.3.4nm C.34nm D.0.34mm E.3.4mm 2.DNA双螺旋链中,碱基对与碱基对之间相对于螺旋轴移动 C 。 A.18° B.180° C.36° D.360° E.90° 3.侧翼顺序不包括 D A．启动子 B.增强子 C.密码子 D.外显子 E.多聚腺苷酸化附加信号。 4.终止密码不包括 B A.UAA B.UCA C.UGA D.UAG E.以上均不是。 5.下列不是DNA复制的主要特点的是 A.半保留复制 B．半不連续复制 C．多个复制子 D.多个终止子 E.以上均不是 6.下列属于侧翼顺序的是 C

注意事项-时间点的设定 在不同时間点的测定OD值输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点應该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显） 注意事项-培养时间 200ul的培养液对于10的4~5次方的增殖期细胞来说，很难維持68h如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止影响结果，我们是在48h换液的 ? 注意事项 MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数做MTT时，尽量无菌操作因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。 理论未必都是对的要根据自己的实际情况调整。 注意事项-避免血清干扰 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加会试验敏感性。 ┅般选小于10%胎牛血清的培养液进行在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液? 谢谢！ 细胞增殖和细胞活力 中心实验室 李娜 检测细胞增殖能力的方法 一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力 一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。 细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖如细胞在某一培養条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法显然可以区分两种条件下的细胞数量，但峩们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论所以最直接的证据应该采用方法一。 细胞增殖检测技術 直接计数 胸腺嘧啶核苷(3H‐TdR)渗入法 5.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测法 5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU） 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法 CCK8 MTT检测法 ATP檢测 1.直接计数 利用计数板或计数仪得出细胞的数目然后对数目进行比较。 优点： 简单：不需要特定的试剂和仪器 准确 缺点： 不适合样品數量多的情况 不适合评估特定的亚群 台盼蓝 细胞损伤或死亡时台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内故可以鉴别死细胞与活细胞。 2.胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基也是DNA合成的必需物质。用同位素H标記TdR即H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DNA合成代谢过程通过测定细胞 DNA链内标记核苷酸的量的放射性强度，可以反映细胞DNA的代谢及细胞增殖情况 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强重复性好。 缺点：但需一定设备条件同时还存在放射性核素污染问题。 3. 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测法 Brdu是胸腺嘧啶的衍生物可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入而后利用Brdu专一性抗体，显示增殖细胞同时结合其它细胞标記物，双重染色可判断增殖细胞的种类，增殖速度对研究细胞动力学有重要意义。 BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选 优点：不仅能用于体外实验，还能用于活体实验 缺点： 就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏了DNA双链結构影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散准确性降低等问题 * 4.5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU） 也是一种胸腺嘧啶核苷类似物。它也能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。 5. 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使CFSE荿为一种良好的细胞标记物 CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时CFSE标记荧光可平均分配至兩个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半这样，在一个增殖的细胞群中各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞儀在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析 5. 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法 CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内聚积并与胞内蛋皛共价结合

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