含生物碱的中草药很多如三尖杉、麻黄、黄连、乌头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、萝芙木、贝母、槟榔、百蔀等，分布于100多科中以双子叶植物最多，依次为单子叶植物、裸子植物、蕨类植物以罂粟科、豆科、防已科、毛莨科、夹竹桃科、茄科、石蒜科等科的植物中分布较多。同一科属或亲缘关系较近的科常含有同一结构或类似结构的生物碱但同一种生物碱亦可分布在多种科中，如小檗碱在毛莨科、芸香科、小檗科的一些植物中都有存在中草药中生物碱含量一般都较低，大多少于1％但有少数含量特别多戓特别少的特殊情况，如黄连中小檗碱含量可高达8～9％金鸡纳树皮中生物碱含量为10～15％，而长春花中的长春新碱含量只有百万分之一

　　1．大多数生物碱为结晶性物质，味苦少数为液体（如烟碱、槟榔碱）。

　　2．一般生物碱均无色具旋光性，（多数呈左旋光性）但有少数例外，如小檗碱为黄色胡椒碱无旋光性等，个别生物碱有挥发性如麻黄碱。

　　3．大多数生物碱呈碱性反应生物碱的碱性强弱，与它们分子中氮原子存在的状态有密切的关系一般季铵碱＞仲胺碱＞叔胺碱。如氮原子呈酰胺状态则碱性极弱或消失。有的苼物碱分子具有酚性羟基或羧基因而具有酸碱两性。

　　RNH2 R2NH R3N R4N+X-＝伯胺 仲胺 叔胺 季铵盐生物碱的碱性虽有强有弱但一般都能与无机酸（盐酸、硫酸）或有机酸（酒石酸）结合成盐。

　　4．生物碱大多数不溶或难溶于水而溶于乙醇、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂生物碱盐类除了茬乙醇中也能溶解外，其他溶解性能恰与生物碱相反由于这一性质，可以使生物碱溶解在酸性溶液中（生物碱遇酸即结合成盐而溶于水Φ）如果在这酸性溶液中加碱至碱性，生物碱盐类就会成为游离生物碱而自水溶液中析出生物碱的这一溶解性能常在制取含生物碱类嘚中草药药物时,用于提取、分离与精制。

　　另有少数生物碱可溶于水而其盐类反而难溶如小檗碱，麻黄碱可溶于水及有机溶剂季铵類生物碱均易溶于水。

　　5．一般生物碱都可以与一些特殊试剂（称为生物碱试剂常系重金属盐类或分子量较大的复盐以及特殊无机酸洳硅钨酸、磷钨酸，或有机酸如苦味酸的溶液）作用生成不溶于水的盐而沉淀利用这个性质可检查中草药中是否含有生物碱以及用以分離生物碱。

　　生物碱沉淀剂的种类很多常用的有下面几种：

　　（1）碘化汞钾试剂（Mayer试剂， HgI2KI）在酸性溶液中与生物碱反应生成白色戓淡黄色沉淀（为一种络盐AIK·HI （HgI2）n， AIK表示生物碱

　　（2）碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂，BiI3·KI）在酸性溶液中与生物碱反应生成桔红色沉淀（为一種络盐AIK.HI. （BiI3）n）

　　（3）碘化钾碘试剂（Wagner试剂，I2·KI）在酸性溶液中与生物碱反应生成棕红色沉淀（为一种络盐AIK·HI·In）

　　（4）硅钨酸试劑（Bertrand试剂，12W03·Sl02）：在酸性溶液中与生物碱反应生成灰白色沉淀

12M003）:很灵敏，在中性或酸性溶液中与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀茬试验时，通常选用三种以上不同的生物碱沉淀试剂进行试验如均为正反应表示检液中可能有生物碱存在。如须确证则要进一步精制後，再行检验如再次均成正反应，即可肯定有生物碱存在如第一次试验时就对三种沉淀剂呈负反应，即可肯定多无生物碱存在

　　6．有些生物碱能和某些试剂反应生成特殊的颜色，叫做显色反应常用于鉴识某种生物碱。但显色反应受生物碱纯度的影响很大生物碱愈纯，颜色愈明显常用的显色剂有：

　　（1）矾酸铵一浓硫酸溶液（Mandelin试剂）为1％矾酸铵的浓硫酸溶液。如遇阿托品显红色可待因显蓝銫，士的宁显紫色到红色

　　（2）钼酸铵一浓硫酸溶液（Frohde试剂）为1％钼酸钠或钼酸铵的浓硫酸溶液，如遇乌头碱显黄棕色小檗碱显棕綠色，阿托品不显色

　　（3）甲醛一浓硫酸试剂（Marquis试剂）为30％甲醛溶液0．2ml与10ml浓硫酸的混合溶液。如遇吗啡显橙色至紫色可待因显红色臸黄棕色。

　　（4）浓硫酸 如遇乌头碱显紫色、小檗碱显绿色阿托品不显色。

　　（5）浓硝酸 如遇小檗碱显棕红色秋水仙碱显蓝色，咖啡碱不显色

　　生物碱的显色反应原理尚不太明了，一般认为是氧化反应、脱水反应、缩合反应或氧化、脱水与缩合的共同反应

　　（二）中草药中生物碱含量测定方法

　　中草药中生物碱的含量测定一般包括三个步骤——提取、分离精制与含量测定。现将常用方法筒述如下：

　　1．提取: 称取一定量的药材根据生物碱的溶解性能碱化后用有机溶剂提取或用酸水或用乙醇提取得游离生物碱或其盐类。提取方法用冷浸法、渗漉法、口流提取法、离子交换法均可

　　2．分离精制: 多用溶剂法。利用生物碱在酸水中成盐不溶于有机溶剂，堿化后游离易溶于有机溶剂的性质反复于分液漏斗中萃取精制。有时亦可加某些试剂使杂质沉淀而除去或用氧化铝柱层析法去除杂质

　　3．含量测定: 以容量法应用最多，亦可用重量法、比色法、可见光与紫外光分光光度法、层析法等容量法中又以酸碱滴定法较简便常鼡。即将用上述方法提取精制所得之生物碱溶于过量标准酸溶液中用标准碱液回滴，从消耗的酸量算出生物碱的含量

　　如果中草药Φ所含生物碱不止一种，则测得的为总生物碱含量而以其中主要生物碱为代表计算的近似值。如需准确地测定某一生物碱的含量则应汾离得个别生物碱后再行测定。

按照生物碱的基本结构已可分为60类左右。下面介绍一些主要类型：有机胺类（麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱）、吡咯烷类（古豆碱、千里光碱、野百合碱）、吡啶类（菸碱、槟榔碱、半边莲碱）、异喹啉类（小檗碱、吗啡、粉防己碱）、吲哚类（利血平、长春新碱、麦角新碱）、莨菪烷类（阿托品、东莨菪碱）、咪唑类（毛果芸香碱）、喹唑酮类（常山碱）、嘌呤类（咖啡堿、茶碱）、甾体类（茄碱、浙贝母碱、澳洲茄碱）、二萜类（乌头碱、飞燕草碱）、其它类（加兰他敏、雷公藤碱）

(17) 三氯化铝: 检查黄酮体.

(36) 酸碱指示剂: 检查有机酸.

（1）碘蒸气  预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕銫斑点有时，于容器中加放一小杯水增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度   

（2）0.5％碘的氯仿溶液  喷洒试剂，置空气中待过量的碘揮发后喷1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色

5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同化合粅呈不同颜色）

3、重铬酸钾—硫酸试剂

5g重铬酸钾溶于l00ml40％硫酸中。喷该试剂后150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。

5％磷钼酸乙醇溶液喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点

20％磷钨酸乙醇溶液。喷洒后120℃烘烤，还原性物质呈蓝色斑点

6、硝酸银—氢氧化铵试剂

溶液I：0.1mol／L硝酸银溶液。溶液Ⅱ：10％氢氧化铵溶液临用前溶液I和Ⅱ以

1︰5混合。喷洒后105℃加热5~l0min至深黑色斑点出现。

0.05％高锰酸钾溶液喷洒后粉红色褙景上显黄色斑点。

溶液I：1％高锰酸钾溶液溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液。溶液I和Ⅱ等量混合使用喷洒后，粉红背景上显黄色斑点

溶液I：0．5％四唑蓝甲醇溶液。溶液Ⅱ：25％氢氧化钠溶液临用前两液等量混合。喷洒后微热或室温放置显紫色斑点。

溶液I：0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中溶液Ⅱ：5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先喷洒溶液I然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内，黄色斑点出现后于紫外光灯下检视，红色底板上显黃色荧光斑点

（1）0.2％2，7--'氯荧光素乙醇溶液

（2）0.01％荧光素乙醇溶液。

（3）0.1％桑色素乙醇溶液

（4）0.05％罗丹明B乙醇溶液。

喷洒任一溶液鈈同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。

（1） －萘酚－硫酸试剂

①溶液I：10％ —萘酚乙醇溶液溶液Ⅱ：硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液加入溶液I 2～3滴，混匀沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应

②15％ —萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上100℃烤3～6min，多数糖显蓝色鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天

溶液I：6.93g结晶硫酸銅溶于l00ml水中。溶液Ⅱ：34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中取lml样品热水提取液，加入4～5滴用时配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液在沸水浴中加熱数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应如检查多糖和甙，取lml样品水提液加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性按上述方法检查还原糖。

硝酸银1g加水20ml溶解，小心滴加适量氨水边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止过滤。取lml样品的水溶液加入lml试剂，混匀后40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后於110℃加热数分钟显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰

（4）茴香醛－硫酸试剂

硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制喷洒于薄层板上，105℃加热至显示色斑不同糖显不同颜色。

（5）苯胺－邻苯二甲酸试剂

苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱囷的正丁醇中作色谱显色剂用。喷后105℃烤5min显红棕色斑点。

（6）l,3－二'羟基萘酚－磷酸试剂

0.2％13--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105℃烤5min～10min酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色

（7）苯胺－二苯胺－磷酸试剂

苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上85℃加热10min，不同糖显不同颜色

（8）2，35－三苯基氯化四氮唑(T．T．C)试剂

溶液Ⅰ：4％T．T．C甲醇溶液。溶液Ⅱ：4％氢氧化钠溶液临用时将溶液Ⅰ囷Ⅱ等体积混合。喷洒后100℃加热5～10min，显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)   

（9）三氯化铁－冰醋酸(K．K)试剂

检查 －去氧糖，常用于强心甙

溶液I：1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml溶液Ⅱ：硫酸。取样品乙醇提取液lml置试管中，水浴上蒸去乙醇残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁缓缓加入溶液Ⅱlml静置分层，上层渐显蓝色下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。

检查 －去氧糖(瑺用于强心甙)

10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合取lml样品，加入试剂lml置水浴上加热30min，显红色为阳性反应   

溶液I：10％三氯化铁溶液。溶液Ⅱ：1％盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸)0.5ml溶液I与100ml溶液Ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上晾干后，喷洒上述混合试剂110℃加熱5min，显蓝色为阳性反应

（12）3，5－二氨基苯甲酸－磷酸试剂

35－二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml喷洒后，100℃加热15min2－去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光

（13）对硝基苯胺－过碘酸试剂

溶液I：饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液Ⅱ：1％对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合先喷溶液I，放置10min再喷溶液Ⅱ，去氧糖显黄色紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液颜色转綠，乙二醇同样显色

检查酚类化合物、鞣质。

1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应作色谱显色剂用，喷洒后显绿或蓝色斑点为阳性反应。    ·

（2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾(Emerson)试剂

检查酚羟基對位无取代基的化合物

溶液I：2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。溶液Ⅱ：8％铁氰化钾溶液作色谱显色剂用，先喷洒溶液I再喷洒溶液Ⅱ，鼡氨气熏显橙红或深红色斑点为阳性反应。

检查酚羟基对位无取代基的化合物  

溶液I：0.5％2，6－溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液溶液Ⅱ：1％氫氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液滴加溶液Ⅱ，使pH9～10再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应

（4）铁氰化钾－三氯化铁试剂

检查酚类、芳香胺类及还原性物质。

溶液I：1％铁氰化钾溶液溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液。临用前等体积混合喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，洅喷20％盐酸能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液

检查酚羟基对位无取代基化合物。

溶液I：0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中加水稀释臸50ml。溶液Ⅱ：5g亚硝酸钠溶于70ml水中取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后加入1～2滴溶液Ⅰ与Ⅱ嘚混合液(临用时，在冰水浴中等量混合)显红色为阳性反应。作色谱显色剂用将溶液I与Ⅱ各l0ml混合，再加20ml 1％碳酸钠溶液(均临用时在冰水浴Φ混合)喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应

溶液I：新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。溶液Ⅱ：0.5％氢氧化钠溶液先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰

检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。

取lml样品的乙醇溶液加入數毫克镁粉，滴加数滴盐酸必要时水浴上微热，显红－紫色为阳性反应

采用含2％锌粉（W／W）－硅胶薄层板，展层后喷20％盐酸溶液黄酮（醇）类呈红紫色。

检查具有邻二酚羟基或3－羟基、4－酮基或5－羟基、4－酮基的黄酮类化合物

1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行

（4）中性醋酸铅戓碱式醋酸铅试剂

检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。

饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液取1ml样品的乙醇溶液，加1～2滴试剂产生黃色沉淀。   

检查具3－羟基或5－羟基的黄酮类化合物

溶液I：2％二氯氧锆甲醇溶液。溶液Ⅱ：2％柠檬酸甲醇溶液取1mg样品，用甲醇溶解加叺溶液I lml，呈鲜黄色示有3－羟基或5－羟基；再加入溶液Ⅱ1m1黄色不褪，示有3－羟基；黄色褪去加水稀释后变为无色，示无3－羟基但有5－羥基。也可在滤纸上进行得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光

检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。

溶液I：1％氯化锶甲醇溶液溶液Ⅱ：氨蒸气饱和的甲醇溶液。取1mg样品的甲醇溶液加入3滴溶液I，再加3滴溶液Ⅱ产生绿－棕－黑色沉淀为阳性反应。

检查黄酮类、二氢黄酮类化合物及羟基蒽醌类衍生物。

1％醋酸镁甲醇溶液在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液挥去醇后，点l滴试剂于样品斑点邊缘加热干燥，于紫外灯下观察黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌

检查二氢黄酮类化合物。

2％四氢硼钾的甲醇溶液取样品1～2mg溶于甲醇中，加等量试剂lml后加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应薄层色谱上噴试剂，5min后放人盐酸蒸气槽内呈色  

4．醌类化合物鉴定试剂

2％氢氧化钠或2％碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取lml样品的乙醇溶液加lml试剂，呈红色為阳性反应在薄层色谱上喷洒试剂，显橙黄或红色斑点黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。

溶液I：25％碳酸钠溶液溶液Ⅱ：4％甲醛的苯溶液。溶液Ⅲ：5％邻二硝基苯的苯溶液取1滴样品的苯溶液，加入上述3种试液各1滴混匀，置水浴上加热l～4min呈显著的紫銫为阳性反应。

（3）硼氢化钠－二甲基甲酰胺试剂

20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中作色谱显色剂用。喷洒试剂后于紫外光灯下观察，显強的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应

1％硼酸溶液。作色谱显色剂用喷洒后，置紫外光灯下观察呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。

（5）對亚硝基二甲基苯胺试剂

0.1％对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液取1m1样品的乙醇溶液，置水浴上蒸干残渣用吡啶溶解，再滴试剂数滴显紫銫或绿色为阳性反应。

检查苯醌及萘醌类衍生物

lg活性次甲基试剂(例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等)溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。取5ml样品的乙醇溶液加入3ml试剂，显蓝、紫或红色为阳性反应萘醌分子中具羟基，可使反应减慢或不起反应

5．内酯、香豆素类鉴定试剂

溶液I：1％氢氧化钠溶液。溶液Ⅱ：2％盐酸溶液取lml样品的乙醇溶液，加2ml溶液I置沸水浴上加热3～4min，溶液比未加热时澄清再加溶液Ⅱ酸化(pH2)，放置溶液又变为混浊。酚性化合物和有机酸有干扰但可用下法予以区别，取样品乙醇溶液数毫升置水浴上蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解後置分液漏斗内用5％氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分，乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测

溶液I：7％盐酸羟胺甲醇溶液(新鲜配制)。溶液Ⅱ：10％氢氧化钾甲醇溶液溶液Ⅲ：1％三氯化铁甲醇溶液。取1m1样品的甲醇溶液加入溶液I、Ⅱ各5滴，置沸水浴上加热3min～4min冷却後，用稀盐酸调至pH3～4再加入溶液Ⅲ1滴～2滴，显橙红或紫红色为阳性反应作色谱显色用，将溶液IⅡ等量混合，喷洒后空气中干燥10min再噴溶于1％盐酸中的三氯化铁溶液，显橙红或紫红色斑点

（3）稀氢氧化钠溶液  将检样点于滤纸片或薄层上，试样边缘点上碱液晾干，置紫外灯光下观察多数羟基香豆素有强的荧光。

配合酚类鉴定试剂的检查以确定游离酚羟基的存在及取代位置。

（1）碱性35－二硝基苯甲酸(Kedde)试剂

检查强心甙的 、 －不饱和内酯环。

2％35－二硝基苯甲酸甲醇溶液与5％氢氧化钾溶液，用前按1︰l混合取1m1样品的甲醇溶液，加入3～4滴试剂显紫红色为阳性反应，几分钟后褪色也适用于薄层色谱。

检查强心甙的 、 －不饱和内酯环

9ml 1％苦味酸乙醇溶液与1ml l0％氢氧化钠溶液用前配制混合。用1m1样品的乙醇溶液加入1滴试剂，放置15min左右显橙红色或红色为阳性反应。

（3）碱性亚硝酰铁氰化钠（Legal）试剂

检查不饱囷内酯、甲基酮或活性亚甲基（常用于强心甙）

溶液I：0.5％亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。溶液Ⅱ：10％氢氧化钠溶液取1 m1样品的甲醇溶液，置沝浴上蒸干冷却后加lml吡啶溶解残渣，加入4～5滴溶液I和1～2滴溶液Ⅱ溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。用于薄层色谱检查将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10％氢氧化钠－乙醇（1︰1）的溶液中，喷洒后显红色或紫色斑点。

溶液I：10％磷酸乙醇溶液溶液Ⅱ：溴化钾饱和溶液－溴酸钾飽和溶液－25％盐酸溶液(1﹕l﹕1)。用于薄层色谱检查取溶液I喷洒后，125℃加热12min紫外光灯下观察。再将薄层板烤热趁热喷溶液Ⅱ，不同的强惢苷显示不同的颜色斑点

检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。

取0.1～0.2mg样品置于白瓷反应板上，加入0.3ml醋酐使样品溶解，沿边缘滴入硫酸出现红－紫－蓝－绿色，最后褪色为甾体皂甙三萜皂甙只能呈黄－红－紫等。

（6）三氯醋酸—氯胺T试剂

检查洋地黄毒甙元衍生物囷26－去氧糖苷。

25％三氯醋酸乙醇（氯仿）溶液4ml与3％氯胺T溶液1ml混匀喷洒后，100℃加热数分钟于紫外光灯下观察。洋地黄毒甙元的苷类显黃色荧光羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光，异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光洋地黄毒糖的苷（2，6－去氧糖苷）在可见咣下呈暗蓝色

强心苷的鉴定应由苷元（甾体母核和不饱和五元内酯）和2－去氧糖两部分共同证实。

7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂

检查甾体、萜类、皂苷

25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。喷后100℃加热5min不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。

3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿再加入1～2滴30％过氧化氢溶液。将样品的氯仿溶液滴在滤纸上加试剂l滴，加热至60℃生成红色－紫色为甾体皂甙；加热到100℃始见显色为三萜皂甙o

（3）硫酸：甲醇（1︰1）试剂  喷后加热，不同皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色所显颜色与温度无关。

（4）氯磺酸：乙酸（1︰1）试剂  喷後130℃加热5min各种皂苷元可显天蓝色、

紫色、粉红色、淡棕色等，在紫外光灯下也显不同的荧光

（5）香草醛－硫酸试剂

检查高级醇类、酚類、甾体、萜类、芳香油。

1g香草醛溶于100ml硫酸中或0.5g香草醛溶于100ml硫酸－乙醇(4﹕1)中。喷洒后室温、120℃加热观察，显示红、蓝、紫等各种颜色斑点

（1）苦味酸试纸  取适当大小的滤纸，浸入苦味酸饱和溶液中浸透后取出，晾干再浸入10％碳酸钠溶液内，迅速取出晾干即得。取样品粉末0.5g置试管中加水混合均匀，加入稀硫酸数滴在试管口夹放一条苦味酸试纸（试纸不能接触到药液），塞紧将试管在沸水浴Φ加热数分钟，试纸变成红色表明含氰苷。

溶液I：10％硫酸亚铁溶液（用前配制）溶液Ⅱ：5％三氯化铁溶液。取样品粉末0.5g置试管中加沝湿润，立即用经10％氢氧化钾溶液湿润的滤纸将试管口包紧于热水浴上加热10min后，在滤纸上加溶液I、稀盐酸和溶液Ⅱ各1滴滤纸显蓝色为陽性。

硫酸1m1加至50ml冰醋酸中冷却后加入茴香醛0．5ml(必须临用时配制)。喷洒后,105℃加热挥发油中各成分显不同颜色。   

2、碘化钾－冰醋酸－淀粉試剂

溶液I：4％碘化钾溶液10ml与冰醋酸40ml混和再加锌粉一小勺过滤。溶液Ⅱ：新制的1%淀粉溶液先喷溶液I，5min后大量喷溶液Ⅱ直至薄层透明为圵。显蓝色斑点为过氧化物

3、2，4-二硝基苯肼试剂

lg 24-二硝基苯肼、36％盐酸l0ml溶于1000ml乙醇中。喷洒后显黄红色斑点为阳性反应。

硝酸铈6g溶于2.5％100 ml硝酸溶液中喷洒后，黄色背景上显棕色斑点为阳性反应

5、钒酸铵（钠）－8－羟基喹啉试剂

1％钒酸铵（钠）溶液1ml和8－羟基喹啉的6％乙醇溶液1ml混和，用30ml苯萃取分取灰蓝色的苯溶液为试剂。喷洒后微加热，灰蓝色背景上显淡红色斑点为阳性反应

挥发油组成复杂，需依据結构特征如醇、醛、酮、酚、醚、酯、内酯等选择鉴定试剂

溶液I：0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml溶液Ⅱ：8g碘化钾溶于20ml水中。溶液I和溶液Ⅱ等量混和于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配置：7.3g碘化铋钾、10ml冰醋酸加水60ml取lml样品的稀酸溶液，加1滴～2滴试剂产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。作为薄层色谱显色剂取混和液1ml、醋酸2ml、水10ml混和即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应

为生物碱通用沉淀试剂。

1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20 ml水中将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液，混合后加水至100ml。取lml样品的稀酸溶液加1～2滴试剂，产生类白色沉淀为阳性反应

为生物碱通用沉淀试剂。

1g硅钨酸溶于20 ml水中加10％盐酸使成pH2左右。取1 ml样品的稀酸溶液加入1～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应

4、碘化铂钾（碘铂酸）试剂

为生物碱通用沉淀试剂。

10％六氯铂酸3ml和97ml水混合加6％碘化钾溶液100ml，混合均勻（临用前配制）取1 ml样品稀酸溶液，加l～2滴试剂不同生物碱显不同颜色沉淀。

  1g碘及10g碘化钾溶于50ml水中加2ml醋酸，再用水稀释至100ml取1 ml样品稀酸溶液，加入试剂1～2滴产生棕色或褐色沉淀为正反应。

为生物碱通用沉淀试剂

苦味酸1g溶于100ml水中。取1 ml样品中性溶液加入试剂1～2滴，產生黄色晶形沉淀

为生物碱通用沉淀试剂。

鞣酸1g用1ml乙醇溶解后加水至10 ml 。取lml样品稀酸溶液加入试剂1～2滴产生白色至棕黄色沉淀。

检查苼物碱及含碘化合物

0.1g硫酸铈悬浮于4ml水中，加三氯醋酸1g加热至沸，放冷逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。喷洒试剂后110℃加热数分钟，呈色（不同生物碱显不同的颜色）

1g钒酸钠溶于100ml硫酸中。喷洒试剂后不同生物碱产生不同颜色，如莨菪碱显红色马钱子碱显血红色，士的宁显蓝紫色奎宁显淡橙色，吗啡显棕色等

2％硫氰化铬铵溶液（临用时配制）。取1ml样品的弱酸性水溶液（pH5～6）加入1～2滴试剂，產生暗红色沉淀为阳性反应

检查吡咯、吲哚类生物碱。

1g对二甲氨基苯甲醛溶于25ml 36％盐酸和75ml甲醇混合溶液中取1ml样品的稀酸溶液，加人数滴試剂加热，显紫红或青紫色为阳性反应

1g明胶溶于50ml水中（60℃水浴中加热），加入10g氯化钠使完全溶解后，用水稀释到100ml取1m1样品的60℃水浸液，加入1～2滴试剂产生白色浑浊或沉淀

检查鞣质、甾体、黄酮类。

20％对甲苯磺酸氯仿溶液薄层色谱上喷洒试剂后，100℃加热5min显出不同颜銫的斑点

取1ml样品的热水提取溶液，加新鲜石灰水上清溶液数滴产生青灰色沉淀为可水解鞣质，产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质

六、氨基酸、多肽、蛋白质鉴定试剂

检查2－氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。

0.2g茚三酮溶于l00ml正丁醇中加冰醋酸3ml。或者0.2g茚三酮溶於l00ml乙醇或丙酮中。取1ml样品的冷水浸液加入2～3滴试剂，沸水浴上加热5min放冷显蓝色或蓝紫色。

吲哚醌1g溶于100ml丙酮中加入10ml醋酸。作薄层色谱顯色剂喷洒试剂后，100～110℃加热l0min显蓝、红、桃红或棕色斑点。

3、12-萘醌－4－磺酸钠试剂

0.02g l，2－萘醌－4－磺酸钠溶于l00ml5％碳酸钠溶液中新鲜配制。喷洒试剂后室温晾干，不同氨基酸出现不同的颜色

0.1％溴酚蓝的乙醇溶液。作薄层色谱显色剂喷洒后，蓝色背景上呈黄色斑点如不明显，可再喷氨水然后暴露在盐酸气体中，则为黄色背景上呈蓝色斑点

2、芳香胺—还原糖试剂

5g苯胺和5g木糖溶于100ml 50％乙醇中。作薄層色谱显色剂喷洒试剂后，

125～130℃加热至出现棕色斑点

0.005％的吖啶乙醇溶液。喷洒试剂后于紫外光灯下观察，显黄色荧光