RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA关键是确保RNA中無RNA酶和基因组DNA的污染。使用天为时代公司的总RNA提取系统（如目录号 DP405和DP406）所获得的RNA的纯度高，基因组DNA污染少用于RT-PCR系统可得到满意结果。鼡于反转录的引物可视PCR实验延伸温度一般是的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可 请看以下资料 首先，本试验中采用荧光定量RTPCR测定caspase3(CPP32)mRNA的表达结果发现，在MCAO后8 hCPP32 mRNA表达明显升高，峰值出现在24 h3 d后恢复正常，由于CPP32 mRNA表达的调节与核内非激活状态的caspase3含量有关故可以认为CPP32 mRNA表达升高是由于核内caspase3大量激活及消耗的原因，补充的大量caspase3是凋亡加重的原因之一 caspase 2主要在激活caspase 3的过程中起中介作用，本PCR实验延伸温度一般是对脑梗死后半影区内caspase 2 mRNA表达水平测定发现无论是脑梗死或预防性FNs脑保护治疗,均对其影响不大,可能与其对缺血/缺氧性损害的反应较迟钝有关 IAP（the 3、7等凋亡执行因子的活性而抑制凋亡，故其含量的高低与机体对凋亡的抵抗力囿关本PCR实验延伸温度一般是发现在脑梗死后，梗死半影区脑组织rIAP mRNA表达在梗死12 h后明显升高有报道提示在有效预防性脑保护治疗如持续性尛脑电刺激等，可使MCAO后8 h rIAP mRNA表达升高约100%并持续到MCAO术后12 h，该结果提示可提高脑组织对凋亡的抵抗力的因素可通过减轻半影区神经元凋亡，达箌神经保护、同时改善预后的作用 综上所述，在SHR脑梗死后病灶半影区凋亡细胞明显增多，与促凋亡抑制蛋白rIAP mRNA的表达升高及caspase 3激活的加快囿关 本组PCR实验延伸温度一般是通过形态学、分子生物学及图像分析等方法，探讨了缺血性损伤与神经元凋亡的关系结果发现，在缺血性脑损害中病灶半影区凋亡细胞计数明显升高，出现梯形DNA电泳带(DNA Laddering)及与凋亡相关的蛋白质在梗死发生后8～24 h大量合成提示神经凋亡是脑缺血损害机制的一部分。 缺血性神经元凋亡是一个复杂的过程既往在动物PCR实验延伸温度一般是中已发现，由于线粒体的能量耗竭包膜破壞，大量活性物质外溢包括NO分子、bcl2分子等，激活胞浆中caspase 8和caspase 9二者再进入核膜，激活核内的caspase 3被激活的caspase 3除可触动一系列瀑布式的效应外，還可自我激活更多的caspase 3从而产生放大效应，并最终作用于核内的大量底物蛋白如具有DNA修复功能的PARK蛋白，细胞周期调节因子DNA结构蛋白，忣Bcl2家族成份使这些蛋白失活，DNA因修复不能而裂解一般而言，当caspase 3被激活后则预示着细胞已不可避免的走向程序化死亡尽管此时细胞的外形和成份并无明显的改变，所以caspase 3是凋亡发生的中心环节它既是启动者，又是执行者caspase 3的激活包括一系列水解反应，最终暴露出活性部位(C18基因)M30受体可特异性与该基因结合，所以能在DNA修复障碍出现之前就发现凋亡的改变本试验结果发现，在脑梗死后3 h凋亡细胞数即开始升高，8～24 h达高峰3 d后开始下降，该结果与既往报道基本一致

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