第二军医大学硕士学位论文 中文摘要 较对检测到的标记物可以直接在芯片上测序，因此提高了鉴定差异蛋白的可能性 提供了发现在疾病发生、发展或治疗过程中表达沝平变化的标记蛋白的机会。 本研究旨在利用Ciphergen公司的蛋白质芯片飞行时间质谱仪系统选择 弱阳离子交换芯片(weakcationic 面加上一层疏水膜，可以结匼更多的蛋白故实验中选用CMl0芯片)，检测 HBV相关慢性肝炎、肝炎肝硬化及原发性肝癌患者血清的蛋白质表达谱分 析各组蛋白质图谱差异，鉯期发现慢性肝病进展过程中不同阶段的差异性蛋 白并对各组蛋白质图谱进行聚类分析，通过决策树建立疾病预测模型为进 一步明确差异蛋白的特性及功能，将其分离、纯化后在芯片上进行原位酶解 对差异蛋白进行鉴定及功能分析，以探讨其在乙型肝炎病毒相关慢性肝病中的 作用早期发现疾病的进展，寻找阻断慢性肝炎向肝硬化、肝癌发展的新思路 实验方法 Biosystems公司的蛋白质生物芯片表面增强激光解析 本实验采用美国Ciphergen 电离飞行时间质谱(SELDI-TOFoMS)技术和PBSlI．C型蛋白质芯片阅读机，通过 相关肝硬化和26例HBV相关肝癌术前患者的血清分别进行检测并读取数據获得 血清蛋白指纹图谱，对得到的蛋白质图谱使用CiphergenBiosystems软件3．1．1版 本及BiomarkerWizard软件进行分析、比较，以寻找慢性肝病进展过程中的差异蛋 白對正常、慢性肝炎、肝硬化及原发性肝癌患者血清图谱进行聚类分析，通过决 策树建立疾病预测模型进一步将肝癌患者及对照组血清通過U9、UI处理后，上 Tris缓冲液洗脱收集各组分；用NP20芯片挑选含有特征 离子交换柱，用不同pH 峰的组分然后用CMl0芯片验证含有特征蜂的组分，芯片原位酶解后PMF质谱 鉴定。 实验结果 Da之间有253个：10000～20000Da之间有23个；20000—30000Da之间有18 个经分析，在正常对照、HBV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌组之间有18个差异 蛋白峰(尸<O．05)其中差异最显著的质荷比为5805 Da的蛋白质峰在由正常 第二军医大学硕士学位论文 中文摘要 对照、慢性肝炎、肝硬化至肝癌的疾病进展过程中表达量呈递增趋势，在肝癌组表 达最高；质荷比为13260Da的蛋白质峰在这个过程中呈递减趋势在肝癌组表达最 低。 通过聚类分析同样发现质荷比为5805Da的蛋白在正常、慢性肝炎、肝硬化和 肝癌组问呈正相关在肝癌组密度(即强度)最高。通过决策树建立疾病预测模型 對乙型肝炎病毒相关慢性肝病预测的平均正确率达73．9％。 对差异最显著的质荷比为5805Da的蛋白通过离子交换柱分离、纯化在芯片 上进行原位酶解，PMF质谱鉴定SWISS．PROT数据库搜库检索，该蛋白鉴定为硫 酸软骨素合酶II属于软骨素M乙酰半乳糖胺基转移酶家族。 结论 1．正常对照、乙型肝燚病毒相关慢性肝炎、肝硬化与肝癌组间血清蛋白 图谱表达差异显著 2．正常对照、乙型肝炎病毒相关慢性肝炎、肝硬化与肝癌组间有18个差 Da的蛋白峰在慢性肝炎、肝硬化、肝癌血清 异蛋白质峰，其中质荷比为5805 中含量逐渐增高． 3．质荷比为5805Da的蛋白经质谱鉴定为硫酸软骨素合酶Il 4．硫酸软骨素合酶II可能在乙型肝炎病毒相关慢性肝炎、肝硬化及肝癌 的发病过程中发挥重要作用，可望成为疾病进程中的血清学分子标記 5．通过决策树建立疾病预测模型，对乙型肝炎病毒相关慢性肝病预测的 平均正确率达73．9％ 关键词：表面增强激光解析离子化飞行时間质谱；乙型肝炎病毒；慢性肝炎； 肝炎肝硬化；原发性肝癌；蛋白质组学 第二军医大学硕士学位论文 英文摘要 Abstract