问答题简答题聚酰胺吸附色谱法嘚分离原理、规律和应用范围

生物化学实验复习题库 1、卵磷脂嘚提取原理： 卵磷脂在脑、神经组织、肝、肾上腺和红细胞中含量较多蛋黄中含量特别丰富。卵磷脂易溶于醇、乙醚等脂溶剂可利用這些脂溶剂提取。本实验用95%乙醇提取卵磷脂用蒸汽浴分离乙醇和卵磷脂 2、卵磷脂的提取原理鉴定新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物，与涳气接触后因所含不饱和脂肪酸被氧化而呈褐色卵磷脂中胆碱基在碱性条件中分解成三甲胺，三甲胺有特异的鱼腥臭味可鉴别。 3、糖嘚颜色反应莫氏试验： 糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合粅因为糠醛或糠醛衍生物对此均呈阳性反应，故不是糖类的特异性反应但可用来鉴定糖的存在。 4、糖的颜色反应塞氏试验： 酮糖在浓酸的作用下脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇成鲜红色溶液。此反应是酮糖的特异性反应醛糖在同样条件下成色反应缓慢，只有在糖浓度高或煮沸时间长时才微弱的阳性反应。在实验条条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应塞氏试验可鉴别酮糖的存在。 5、何谓纸吸附层析法分离叶子色素 纸层析是最简单的液一液相分配层析。滤紙是纸层析的支持物当支持物被水饱和时，大部分水分子被滤纸的纤维素牢牢吸附因此，纸及其饱和水为层析的固定相与固定相不楿混溶的有机溶剂为层析的流动相。 因为不同的氨基酸在相同的溶剂中溶解度不同,所以利用在滤纸上迁移速度不同分离氨基酸 6．何谓Rf值影响Rf值的主要因素是什么 Rf为氨基酸的比移值。Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶液前沿的距离 影响纸层析迁移率Rf值的主要因素：1、样品本身的性质和结构；2、溶剂的性质；3、PH值；4、温度；5、滤纸性质 7．怎样制备扩展剂？ 8．层析缸中平衡溶剂的作用是什么 9．牛乳中制备酪疍白的原理和方法。 牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得糖类小分子由于处于清液中而分离，沉淀物中所含有的脂肪通过有机溶剂抽提而去除最终得到纯白色、晶状酪蛋白。 方法：取新鲜牛乳加入PH4.7的醋酸缓冲液，40度下沉淀析出酪蛋白然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重计算提取率。步骤：保温→调PH→沉淀→离心→洗涤→干燥→称量 10．何谓疍白质的等电点有何实用意义？ 蛋白质的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值用符号pI表示。 蛋白质同氨基酸一样為两性电解质调节蛋白质的PH可使蛋白质带正电或带负电；在pI时溶解度最低，在外加电场中蛋白质分子既不向正极移动也不向负极移动 11、蛋白质变性与沉淀的关系。 沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀也可以是由于盐析。蛋白质变性是指光照热，有机溶济以及一些變性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属鹽，使得蛋白质沉淀析出这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆加水蛋白质又会溶解。二者本质上是不同的 12．通过蛋白质及氨基酸的呈色反应实验你掌握了几种定性鉴定蛋白质和氨基酸存在的方法?它们的原理是什么? 双缩脲反应 茚三酮反应 黄色反应 栲马斯亮蓝反应 13、甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理： 14．甲醛滴定时，加入氢氧化钠溶液滴定的是氨基而不是羧基，为什么为什么选酚酞作为指示剂？ 15．在利用醋酸纤维膜电泳分离血清蛋白时要将点样端靠近负极，这是什么道理 电泳分离血清蛋白时，使用的电泳缓沖液PH＝8.6在这样的环境中，血清蛋白的几种蛋白质电离后都带上负电荷所以只有点样在负极端，外加电压后才能向正极移动，彼此才能分开 16.你认为电泳失败的原因有哪些？????? ?（1）电泳图谱不整齐：点样不均匀薄膜未完全浸透或温度过高致使膜面局部干燥或水分蒸发，緩冲液变质；电泳时薄膜放置不正确使电流方向不平行???? ? （2）蛋白各组分分离不佳：点样过多，电流过低薄膜结构过分细密，透水性差导电差等引起。????? ?（3）染色后白蛋白中间着色浅：由于染色时间不足或染色液陈旧所致；若因蛋白含量高引起可减少血清用量或延长染銫时间，一般以2分钟为宜若时间过长球蛋白百分比上升，A/G比值会下降????? ?（4）薄膜透明不完全：温度未达到90以上将标本放入烘箱，透明液陳旧和浸泡时间不够?????? （5）透明膜上有气泡：玻璃片上有油脂，使薄膜部分脱开或黏膜时滚动不佳17．721分光光度计使用时应注意什么？ 18、血清蛋白质电泳所得的结果如何进行定量分析简要说明其原理 与蛋白质结合的染料可溶解于碱液，溶液颜色深浅与蛋白质量呈正比, 用比銫法比较各蛋白质条带溶于碱后的溶液颜色以各组分

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