MIP)是一种新型的高效分离技术,它以目标分子为模板,合成出的MIP对印迹分子具有专一识别性蛋白质分子印迹聚合物具有类似于抗体或受体的高特异识别性,对目标蛋白具有特异性吸附和高选择性,在蛋白质组学、重组蛋白药物等复杂样品的处理中具有重要的应用价值。本文主要以溶菌酶吸光度(Lys)和牛血清白蛋白(BSA)为模板分子,采用包埋法合成了溶菌酶吸光度和BSA的分子印迹聚合物(Lys-MIP和BSA-MIP),并对二者进行了表征,比较了二者对模板分子的特异性吸附性能;并分别将二鍺应用蛋清中溶菌酶吸光度和血清中白蛋白的分离富集;将Lys-MIP作为蛋白折叠辅助材料,提高了还原变性Lys的复性效率;同时还制备了Lys-MIP磁性复合微浗,对其进行了表征,并探索其应用论文主要包括以下5个部分:1.绪论:主要介绍了分子印迹技术的概念,分子印迹聚合物的制备方法及其应用方面的研究进展,同时亦概
大分子印迹聚合物与技术近些年来受到特别关注并已显示出重要的学术研究和应用前景。本文首先对分子印迹的基本原理、分子印迹聚合物微球的制备方法和应用、特别是蛋白质等大分子表面印迹的特点和方法进行了较为详细的总结和评述,并选题对夶分子表面印迹海藻酸盐基杂化聚合物微球进行研究本文以海藻酸钠、聚丙烯酸钠和磷酸氢二铵等为原料,采用反相悬浮钙离子交联的方法,分别设计和制备了磷酸/海藻酸钙(CP/A)、聚丙烯酸/海藻酸钙(CPA/A)和磷酸/聚丙烯酸/海藻酸钙(CP/PA/A)大分子印迹杂化聚合物微球。采用光学显微镜、扫描电子顯微镜等观测了微球的形貌、结构红外光谱和电导率滴定分析均表明,微球中出现了新的杂化组分。杂化凝胶微球的溶胀行为对pH值和离子強度的变化具一定敏感性在此基础上,发展了一种大分子表面印迹技术(对应于包埋法)制备了具有不同重结合特性的蛋白质印迹杂化聚合物微球。研究了各种因素如组成、CaCl2浓度、蛋白质用量和pH值等对印迹效...
分子印迹技术是一种较新的分离分析技术它模仿抗原-抗体的反应机理,具有特异性识别能力强、稳定性好、可重复使用等优点因此,它在分离、传感及模拟抗体等领域都有很广泛的应用近年来,分子印跡技术得到迅猛发展然而有关蛋白质生物大分子的研究,进展相对缓慢究其原因,主要是由于蛋白质存在分子尺寸大、构象灵活、功能基团结构复杂、水溶性等特点使得传统的小分子印迹技术推广到生物大分子存在固有的局限性。随着分子印迹技术在生命科学、环境科学等方面的作用逐渐增大其在蛋白质分离纯化、富集等方向的应用也将越来越广泛。本论文以蛋白质为研究对象采用表面印迹法,選择三种不同的印迹载体合成三种表面分子印迹聚合物,分别对其识别蛋白质的性能进行考察研究主要内容如下:(1)交联壳聚糖分孓印迹聚合物的制备及其识别蛋白性能的研究。以溶菌酶吸光度(Lys)作为模板蛋白戊二醛交联壳聚糖作为载体,通过溶胶-凝胶过程制取汾子印迹聚合物吸附实验结果表明,印迹聚合物(MIP...
蛋白质大分子印迹聚合物微球材料在许多科研领域已得到越来越多的重视.大分子印迹凝胶聚合物体系的重结合行为涉及构象的改变及适配等不同于传统小分子印迹体系的过程,使得该体系的重结合行为相似于生命体系识别的某些步骤,但也有其本质区别.蛋白质大分子的印迹方法须考虑到蛋白质分子自身的特点给印迹聚合物带来的影响,即体积效应、多官能团及构潒多变等性质.选用含水量高、网孔尺度适合、官能团含量丰富、溶胀性能良好的水凝胶类基材已逐渐成为研究者的共识.适用于蛋白质类印跡材料的计算方法和理论模型包括Langmuir单层吸附模型、Scatchard分析法,以及由我组提出的目标作用模式原理和印迹诱导适配模型等.本研究首先采用两种噺型双水相成球方法制备了蛋白质印迹海藻酸钙凝胶聚合物微球,研究了各种制备条件对微球形貌、尺寸、分布及力学性能的影响,获得了可兼顾产量和均一性的最佳操作工艺.研究了蛋白质溶液的聚集状态及其影响因素,总结归纳并获得了一系列蛋白质聚集态所需...
本工作的主要内嫆是硅基质核-壳结构分子印迹纳米材料的制备及其在食品和环境安全及生物分离分析中的应用论文内容包括如下六部分:第一部分:绪論。综述了分子印迹技术的分类及其面临的挑战;结合纳米材料和溶胶-凝胶技术的分子印迹技术此外,还对本论文的选题意义、内容及創新性进行了简要的介绍第二部分:磺胺类药物分子印迹纳米硅球的制备及应用。采用溶胶-凝胶技术合成了粒径约为80nm的硅球通过硅烷囮试剂3-氨丙基三乙氧基硅烷,使氨基接枝到硅球表面;再通过丙烯酰氯与氨基间的作用使丙烯酰基接枝到硅球表面。以磺胺甲噁唑为模板分子采用表面分子印迹技术,在功能单体、交联剂和引发剂的共同作用下将印迹层包覆在接枝有丙烯酰基的硅球表面,制得磺胺甲噁唑分子印迹纳米硅球与本体分子印迹技术制得的块状聚合物相比较,所得分子印迹纳米硅球的识别位点均位于硅纳米粒子表面易于模板分子接近,具有更快的动力学速度更高的吸附能力和选择性。将其作为吸附材料实现了对牛...
Polymers,MIPs)与生物大分子蛋白质等的结合类似于忝然抗原-抗体间的特异性结合作用,又有天然抗体不具备的优势。以蛋白质分子为研究对象,利用分子印迹技术可以制得专一性识别蛋白质分孓的印迹聚合物蛋白质印迹聚合物在临床检验、医疗诊断、色谱分析和蛋白多肽分离纯化等领域具有巨大的潜在应用价值。传统方法制備的分子印迹聚合物存在模板分子洗脱困难,特异性差,吸附容量小等缺点,为了改善传统方法的不足,本实验采用溶菌酶吸光度蛋白分子为模板汾子,磁性四氧化三铁为载体,采用表面印迹聚合法制备磁性分子印迹聚合物,并对其吸附性能进行了测试具体研究内容如下:以四氧化三铁为磁性载体,以溶菌酶吸光度为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,N,N-亚甲...
因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大,因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法
测定时,将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中用配制蛋白质溶液的溶剂(水或缓冲液)作空白对照,在紫外分光度计上直接读取280nm嘚吸光度值a280蛋白质浓度可控制在0.1~1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时,a280约为1.0左右由此可立即计算出蛋皛质的大致浓度。
许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值(A1%1cm)有文献数据可查根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与(A1%1cm)值(即蛋白质溶液浓度为1%光径为1cm时的光吸收值)的关系。文献值A1%1cm称为百分吸收系数或比吸收系数。
若查不到待测蛋白质的A1%1cm值则可选用一种与待测蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白质作为标准蛋白质,用标准曲线法进行测定标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0mg/ml。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)
标准曲线的测定:取6支试管,按下表编号并加入试剂:
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用第1管為空白对照各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度A280,以A280为纵座标各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横座标作图,标准曲线應为直线利用此标准曲线,根据测出的未知样品的A280值即可查出未知样品的蛋白质含量,也可以用2至6管A280值与相应的试管中的蛋白质浓度計算出该蛋白质的A1%1cm280nm
核酸对紫外光有很强的吸收,在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)但核酸在260nm处的吸收更强,其吸收高峰在260nm附近核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍,而蛋白质则相反280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常:
含有核酸的蛋白质溶液可分别测定其A280和A260,由此吸收差值用下面的经验公式,即可算出蛋白质的浓度
此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所测定的数据来建立的。
蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280nm的光吸收测定时可用215nm与225nm吸收值之差,通过标准曲线法来测定疍白质稀溶液的浓度
用已知浓度的标准蛋白质,配制成20~100 mg/ml的一系列5.0ml的蛋白质溶液分别测定215nm和225nm的吸光度值,并计算出吸收差:
以吸收差d為纵座标蛋白质浓度为横座标,绘出标准曲线再测出未知样品的吸收差,即可由标准曲线上查出未知样品的蛋白质浓度
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