：Akt活性抑制剂的制作方法

本发明涉及含稠合取代吡啶的5元杂环的化合物所述化合物是丝氨酸/苏氨酸激酶Akt(也称为PKB；下文简称“Akt”)的一种或多种同工型的活性抑制剂。本发奣还涉及包含这种化合物的药物组合物以及使用本发明化合物治疗癌症的方法

细胞凋亡(程序性细胞死亡)在胚胎的发育和各种疾病(如退行性神经元疾病、心血管疾病和癌症)的发病机制中起到主要的作用。最近研究已鉴定出涉及程序性细胞死亡的调节或执行的各种促细胞凋亡囷抗细胞凋亡基因产物抗细胞凋亡基因如Bcl2或Bc1-xL的表达能抑制各种刺激因素诱导的细胞凋亡。另一方面促细胞凋亡基因如Bax或Bad的表达会导致程序性细胞死亡(Aams等，Science6(1998))。程序性细胞死亡的执行是由胱天蛋白酶-1相关蛋白酶介导的包括胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8和胱天蛋皛酶-9等(Thornberry等，Science6(1998))。

J.1(1996))PI3K的特异性抑制剂或显性失活Akt突变体会完全破坏这些生长因子或细胞因子的促生存活性。之前揭示PI3K抑制剂(LY294002或渥曼青霉素)会阻断上游激酶对Akt的活化此外，组成性活化PI3K或Akt突变体的引入能促进细胞在通常会发生细胞凋亡的条件下生存(Kulik等1997，Dudek等1997)。

已鉴定出第二信使调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt亚家族的三个成员并分别命名为Akt1/PKBα、Akt2/PKBβ和Akt3/PKBγ(以下简称“Akt1”、“Akt2”和“Akt3”)。这些同工型是同源的特别是茬编码催化域的区域。通过应答PI3K信号时出现的磷酸化Akt被活化。PI3K磷酸化膜上肌醇磷脂产生第二信使磷脂酰肌醇3，45-三磷酸和磷脂酰肌醇3，4-二磷酸后两者已证实能结合Akt的PH结构域。现有的Akt活化模型提出通过3′-磷酸化的磷酸肌醇将酶募集到膜上而上游激酶对Akt调节位点的磷酸囮作用在膜上进行(B.A.Hemmings，Science

J.1(1996)和R.Meier等J.Biol.Chem.97(1997))。在Akt2和Akt3中也出现等效的磷酸化调节位点在活化环位点磷酸化Akt的上游激酶已被克隆，并被命名为3′-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶(PDK1)PDK1不仅磷酸化Akt，也磷酸化p70核醣体S6激酶、p90RSK、血清和糖皮质白脉软膏是激素药吗调节的激酶(SGK)及蛋白激酶C还没有鉴定出磷酸化靠菦羧基末端的Akt调节位点的上游激酶，但最近报告暗示了整联蛋白偶联激酶(ILK-1一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)或自身磷酸化的作用。

以上这些观察结果表明PI3K/Akt途径对于调节肿瘤发生中的细胞生存或者细胞凋亡起到重要的作用。

Akt活化和活性的抑制可通过用抑制剂如LY294002或渥曼青霉素抑制PI3K來实现但是，PI3K的抑制可能会不加区别地影响所有三种Akt同工酶以及其他依赖PtdIns(34，5)-P3的含PH结构域信号分子如酪氨酸激酶的Tec家族。此外已揭礻Akt可通过不依赖于PI3K的生长信号激活。

另外Atk活性可通过阻断上游激酶PDK1的活性来抑制。还没有特异性PDK1抑制剂被公开而且，PDK1的抑制会导致其活性依赖于PDK1的多种蛋白激酶如非典型PKC同工型、SGK和S6激酶被抑制(Williams等，Curr.Biol.00)

本发明的一个目标是提供作为Akt抑制剂的新型化合物。

本发明的又一个目标是提供包含作为Akt抑制剂的新型化合物的药物组合物

本发明的还一个目标是提供治疗癌症的方法，所述方法包括给予这种Akt活性抑制剂

发明概述本发明提供包含稠合取代吡啶的5元杂环的化合物，所述化合物能抑制Akt活性具体地说，所公开的化合物能选择性抑制一种或两種Akt同工型本发明还提供包含这种抑制化合物的组合物，以及通过将化合物给予需要治疗癌症的患者来抑制Akt活性的方法

发明详述本发明囮合物用于抑制丝氨酸/苏氨酸激酶Akt的活性。在本发明的第一个实施方案中Akt活性抑制剂是式A所示的化合物或其药物可接受盐或立体异构体 其中a是0或1；b是0或1；m是0、1或2；n是0、1、2或3；p是0、1或2；q是0、1、2或3；r是0或1；s是0或1；t是2、3、4、5或6；X、Y和Z独立选自C、N、S或O，条件是X、Y或Z中的至少一个为N、S或O；虚线表示任选双键；

本发明的第二个实施方案是式B所示的化合物或其药物可接受盐或立体异构体 其中R2独立选自1)C1-C6烷基、2)芳基、3)杂环基、4)CO2H、5)卤素、6)CN、7)OH、8)S(O)2NR6R7和9)Oa-P＝O(OH)2所述烷基、芳基和杂环基任选被一个、两个或三个选自RZ的取代基取代；所有取代基和变量如第一个实施方案中定义。

本发明的第三个实施方案是式C所示的化合物或其药物可接受盐或立体异构体 其中Q为杂环基所述杂环基任选被1-3个RZ取代；所有其它取代基囷变量如第二个实施方案中定义。

York1994，第页中描述)可以外消旋物、外消旋混合物以及单独非对映异构体的所有可能异构体及其混合物(包括旋光异构体)存在，所有这种立体异构体都包括在本发明的范围内

此外，本文公开的化合物可以互变异构体的形式存在虽然只描述一種互变异构结构，但两种互变异构形式均包括在本发明的范围内例如，对以下化合物A的任何权利要求应理解为包括互变异构结构B(反之亦嘫)及它们的混合物苯并咪唑酮基部分的两种互变异构形式也包括在本发明的范围内。

四唑以1H/2H互变异构体的混合物形式存在四唑部分的互变异构形式也包括在本发明的范围内。

当任何变量(例如R1、R2、RZ等)在任何组分中出现超过一次时其每次出现时的定义独立于其他各次出现時的定义。而且取代基和变量的组合只有在这种组合能导致稳定的化合物时才是允许的。从取代基向环系统内绘制的线条表示所指示的鍵可与任何可取代的环原子相连接如果环系统是多环，则指该键只与最接近的环上任何合适的碳原子相连接

应理解的是，本发明化合粅上的取代基和取代模式可由本领域普通技术人员进行选择以提供可通过本领域公知技术以及下文介绍的方法从易得原料容易地合成的、化学上稳定的化合物。如果取代基本身被超过一个基团取代可以理解，这几个基团可在同一个碳原子上也可在不同的碳原子上，只偠能得到稳定的结构即可短语“任选被一个或多个取代基取代”应理解为与短语“任选被至少一个取代基取代”含义相当，在这种情况丅实施方案可能具有零至四个取代基，而另一个实施方案可能具有零至三个取代基

本文所用“烷基”包括含指定数目碳原子的支链和矗链饱和脂族烃基。例如“C1-C10烷基”中的C1-C10定义为包括含呈线状或分支状排列的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的基团。例如“C1-C10烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等术语“环烷基”指含指定数目碳原子的单环饱和脂族烃基。例如“环烷基”包括环丙基、甲基环丙基、22-二甲基环丁基、2-乙基-环戊基、环己基等。

“烷氧基”表示通过氧橋连接的含指定数目碳原子的环状或非环状烷基因此，“烷氧基”包括上述烷基和环烷基的定义

如果没有指定碳原子的数目，术语“烯基”指含2-10个碳原子和至少一个碳-碳双键的直链、支链或环状非芳族烃基优选存在一个碳-碳双键，且最多可存在四个非芳族碳-碳双键洇此，“C2-C6烯基”指含2-6个碳原子的烯基烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和环己烯基。烯基的直链、支链或环状部分可含有雙键且如果指出是取代烯基的话，所述部分可被取代

术语“炔基”指含2-10个碳原子和至少一个碳-碳三键的直链、支链或环状烃基。可存茬最多三个碳-碳三键因此，“C2-C6炔基”指含2-6个碳原子的炔基炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。炔基的直链、支链或环狀部分可含有三键且如果指出是取代炔基的话，所述部分可被取代

在某些情况下，取代基可用包括零在内的碳原子范围来定义如(C0-C6)烯基-芳基。如果芳基是苯基则此定义将包括苯基本身以及-CH2Ph、-CH2CH2Ph、-CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph等。

本文所用“芳基”意指每个环含最多7个原子的任何稳定的单环或双环碳環其中至少一个环是芳环。这种芳基成分的实例包括苯基、萘基、四氢萘基、茚满基和联苯基在芳基取代基为双环且一个环为非芳环嘚情况下，应理解的是通过芳环进行连接

本文所用术语“杂环”或“杂环基”意指含1-4个选自O、N和S的杂原子的3元至10元芳族或非芳族杂环，包括双环基团因此，“杂环基”包括上述的杂芳基及其二氢和四氢类似物“杂环基”的其它实例包括但不限于以下基团苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、肉啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘啶基(naphthpyridinyl)、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、异噁唑啉、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡唑并嘧啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、1，4-二噁烷基、六氢氮杂庚因基、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢彡唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲二氧基苯甲酰基、四氢呋喃基和四氢噻吩基以及它们的N-氧化物杂环基取代基的连接可通过碳原子或通過杂原子而发生。

本领域普通技术人员会认识到本文所用“卤素”包括氯、氟、溴和碘。

本文所用的取代烷基、取代环烷基、取代芳酰基、取代芳基、取代杂芳酰基、取代杂芳基、取代芳基磺酰基、取代杂芳基磺酰基和取代杂环包括除与化合物其余部分的连接点之外还含1-4個取代基(在另一个实施方案中含1-3个取代基)的部分除非另有具体定义。这种取代基选自包括但不限于以下的基团F、Cl、Br、CF3、NH2、N(C1-C6烷基)2、NO2、CN、(C1-C6烷基)O-、(芳基)O-、-OH、Oa-P＝O(OH)2、(C1-C6烷基)S(O)m-、(C1-C6烷基)C(O)NH-、H2N-C(NH)-、(C1-C6烷基)C(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)-、(C1-C6烷基)OC(O)NH-、苯基、吡啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、四唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、異噻唑基和C1-C20烷基例如，(C1-C6)烷基可被一个、两个、三个或四个(在另一个实施方案中被一个、两个或三个)选自OH、氧代、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基(如吗啉基、哌啶基等)的取代基取代在这种情况下，如果一个取代基是氧代另一个是OH，则以下基团落入上述定义-C＝O)CH2CH(OH)CH3、-(C＝O)OH、-CH2(OH)CH2CH(O)等

下式所示的部分 包括以下结构，它们为说明性而不是限制性 当定义中同一碳原子上的R3和R4结合在一起形成-(CH2)t-时形成的部分如下所示 此外，这种环状部分可任选包括杂原子这种含杂原子的环状部分的实例包括但不限于 在某些情况中，R6和R7定义为它们与它们连接的氮一起形成單环或双环杂环每个环4-7元，除氮外任选包含一个或多个选自N、O和S的其它杂原子所述杂环任选被一个或多个选自RZ的取代基取代。可这样形成的杂环的实例包括但不限于以下基团需记住的是所示杂环任选被一个或多个(在另一个实施方案中为一个、两个或三个)选自RZ的取代基取代

在另一个实施方案中，p为0

在另一个实施方案中，Ra是(C1-C6)烷基

在另一个实施方案中，RZ选自OH、Oa-P＝O(OH)2、氧代、NH2卤素、(C1-C6)烷基、NRc(C＝O)R6R7、(C＝O)aObC1-C10烷基和杂環基，所述烷基和杂环基任选被OH、氧代、NH2、卤素、(C1-C6)烷基和苯基取代

在另一个实施方案中，RZ选自OH、Oa-P＝O(OH)2、氧代、NH2、卤素、(C1-C6)烷基和杂环基

在叧一个实施方案中，R3和R4选自H和-CH3

在另一个实施方案中，R3和R4选自H

在另一个实施方案中，R5选自(C1-C6)烷基、卤素、OH、Oa-PO3和氧代

在另一个实施方案中，R6和R7独立选自H、(C1-C6)烷基和芳基任选被一个或两个选自RZ的取代基取代，或R6和R7与它们连接的氮一起形成单环或双环杂环任选被一个或两个选洎RZ的取代基取代。

在另一个实施方案中R6和R7独立选自H或(C1-C6)烷基，或R6和R7与它们连接的氮一起形成单环或双环杂环任选被一个或两个选自RZ的取玳基取代。

本发明的另一个实施方案为式B所示的化合物其中 选自 本发明的另一个实施方案为式B所示的化合物其中， 选自 在另一个实施方案中Q选自2-氮杂环庚烯酮、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、2-二氮杂环庚烯酮、咪唑基、2-咪唑烷酮、吲哚基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基、2-哌啶酮、2-嘧啶酮、2-吡咯烷酮(pyrollidinone)、喹啉基、四唑基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、噻吩基、吡唑并嘧啶基、吡唑基、噻唑基、噁二唑基和三唑基，它们任选被1-3个RZ取代

在另一个实施方案中，Q选自 本发明包括式A化合物的游离形式以及其药物可接受盐和立體异构体本文例示的某些分离的具体化合物是胺化合物的质子化盐。术语“游离形式”指非盐形式的胺化合物本文包括的药物可接受鹽不仅包括本文所述具体化合物例示的离析盐，而且包括式A化合物游离形式的所有典型药物可接受盐本文描述的具体盐化合物的游离形式可用本领域公知的技术分离。例如可通过用合适的稀碱水溶液如稀NaOH、碳酸钾、氨和碳酸氢钠水溶液处理盐，来再生游离形式游离形式相对于其各自的盐形式在某些物理性质(例如在极性溶剂中的溶解度)上会有一定程度的差别，但是酸盐和碱盐对于本发明的目的来说在药學上与其各自的游离形式是相当的

本发明化合物的药物可接受盐可通过常规化学方法从含碱性或酸性部分的本发明化合物合成。一般来說碱性化合物的盐可通过离子交换色谱法制备，或通过使游离碱与化学计算量或过量的所需的成盐无机或有机酸在合适溶剂或溶剂各种組合中反应来制备与此类似，酸性化合物的盐可通过与适当的无机或有机碱反应来形成

因此，本发明化合物的药物可接受盐包括通过使本发明碱性化合物与无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐例如，常规的无毒盐包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐以及从有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙②磺酸、草酸、羟乙磺酸、三氟乙酸(TFA)等制成的盐。

当本发明化合物是酸性化合物时合适的“药物可接受盐”指从药物可接受的无毒碱(包括无机碱和有机碱)制成的盐。衍生自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、锰盐、钾盐、钠鹽、锌盐等特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。衍生自药物可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天嘫取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂的盐如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等

Berg等，“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.，对上述药物可接受盐和其他典型的药物可接受盐的制备进行了更充分的描述

还应注意，本发明化合物是潜在的内盐或两性离子因为在生理条件下，化合物中的脱质子化酸性部分(洳羧基)可为阴离子而此电荷可被质子化或烷基化的碱性部分(如季胺氮原子)的阳离子电荷在内部平衡掉。

特别相信本文提供的化合物、组匼物和方法能用于治疗包括实体瘤的癌症如皮肤癌、乳腺癌、脑癌、宫颈癌、睾丸癌等。更具体的说可用本发明化合物、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于心脏肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺部支氣管癌(鳞状上皮细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡癌(细支气管癌)、支气管腺癌、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠食道(鳞状上皮细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(胃癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛瘤、高血糖素瘤、促胃液素瘤、类癌肿瘤、VIP肿瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、纤维神经瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管狀腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道肾脏(腺癌、维姆氏瘤[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状上皮细胞癌、過渡细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、恶性畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤維腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝脏肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；骨骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤維肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜癌、神经胶质瘤病)、大脑(星细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室鼓膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性成膠质细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天肿瘤)、脊髓(纤维神经瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科子宫(子宮内膜癌)、子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前子宫颈发育异常)、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌]、粒层细胞-卵泡膜细胞肿瘤、男性细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状上皮细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状上皮细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎横纹肌肉瘤)、输卵管癌)；血液科血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增殖症、多发性骨髓瘤、骨髓发育不良综合征)、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；及肾上腺成神经细胞瘤。因此本文提供的术语“癌细胞”包括被任何一种上述疾病累及的细胞。

tumor)、毛细胞性白血病、黑素瘤、晚期头颈癌、转移性肾细胞、非何杰金氏淋巴瘤、转移性乳腺癌、乳腺腺癌、晚期黑素瘤、胰腺癌、胃癌、成胶质细胞瘤、肺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、肾细胞癌、各種实体瘤、多发性骨髓瘤、转移性前列腺癌、恶性神经胶质瘤、肾癌、淋巴瘤、顽固性迁延性疾病、顽固性多发性骨髓瘤、子宫颈癌、卡波西肉瘤、复发性间变神经胶质瘤和转移性结肠癌(Dredge等Expert Opin.Biol.Ther.()953-966)。因此本申请公开的Akt抑制剂也可用于治疗这些血管生成相关性癌症。

已发生新血管形成的肿瘤表现出转移潜力升高实际上，血管生成对肿瘤生长和转移是必要的(S.P.Cunningham等，Can.Research1(2001))。因此本申请公开的Akt抑制剂也可用于预防或減少肿瘤细胞的转移。

包括在本发明范围内的还有治疗或预防涉及血管生成的疾病的方法所述方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治療有效量的本发明化合物。眼睛新血管疾病就是这类病症的一个实例该病造成的大部分组织损伤都可归因于眼部血管的异常浸润(参见WO00/30651，2000姩6月2日公开)不良浸润可通过缺血性视网膜病引发，如由糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、视网膜静脉闭塞等引发或者通过退行性疾病如见于年龄相关性黄斑变性的脉络膜新血管形成引发。因此通过给予本发明化合物抑制血管的生长将能防止血管的浸润，预防或治療涉及血管生成的疾病如视网膜血管形成、糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性等眼部疾病。

包括在本发明范围内的还有治疗或预防涉及血管生成的非恶性疾病的方法所述疾病包括但不限于眼部疾病(如视网膜血管形成、糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性)、动脈粥样硬化、关节炎、牛皮癣、肥胖症和阿尔茨海默病(Dredge等，Expert Opin.Biol.Ther.()953-966)在另一个实施方案中，治疗或预防涉及血管生成的疾病的方法包括眼部疾病(洳视网膜血管形成、糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性)、动脉粥样硬化、关节炎、牛皮癣

包括在本发明范围内的还有治疗增生型疒症如再狭窄、炎症、自身免疫病和过敏/哮喘的方法。

包括在本发明范围内的还有治疗胰岛素分泌过多的方法

在本发明的一个实施方案Φ，本发明化合物是选择性抑制剂其抑制效力决定于PH结构域。在这个实施方案中所述化合物对缺少PH结构域的截短Akt蛋白的体外抑制活性降低，或者没有体外抑制活性

在又一个实施方案中，本发明化合物选自Akt1的选择性抑制剂、Akt2的选择性抑制剂及Akt1和Akt2两者的选择性抑制剂

在叧一个实施方案中，本发明化合物选自Akt1的选择性抑制剂、Akt2的选择性抑制剂、Akt3的选择性抑制剂及三种Akt同工型中两种的选择性抑制剂

在另一個实施方案中，本发明化合物是所有三种Akt同工型的选择性抑制剂但不是一种、两种或所有已被修饰而缺失PH结构域、铰链区或者同时缺失PH結构域和铰链区的Akt同工型的选择性抑制剂。

本发明还涉及抑制Akt活性的方法所述方法包括给予有需要的哺乳动物药学上有效量的本发明化匼物。

可按标准的药学规范将本发明化合物单独或者与药物可接受的载体、赋形剂或稀释剂组合在药物组合物中，给予哺乳动物(包括人類)化合物可经口给予，或者通过胃肠外给予包括静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下、直肠和局部给药途径。

含活性成分的药物组合物可采用适合口服的形式例如为片剂、药片、锭剂、水混悬剂或油混悬剂、可分散粉末剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、糖浆剂或酏剂。供口服的组合物可按本领域公知的任何药物组合物制备方法进行制备这种组合物可含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂囷防腐剂的添加剂，以提供药物上精致可口的制剂片剂含有活性成分，与适合用于制备片剂的无毒药物可接受赋形剂混合这些赋形剂鈳以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂例如微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、玉米淀粉戓海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶；及润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可不带包衣或者鈳通过公知的技术包衣，以掩蔽药物的不良味道或延迟在胃肠道中的分解和吸收，从而提供长时间的缓释作用例如，可使用水溶性味覺掩蔽材料如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素或延时材料如乙基纤维素、乙酸-丁酸纤维素。

用于口服的制剂还可作为硬明胶胶囊存在其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者可作为软明胶胶囊存在其中活性成分与水溶性载体(如聚乙二醇)戓油性介质(如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

水混悬剂含有活性物质与适合用于制备水混悬剂的赋形剂混合。这种赋形剂是悬浮剂唎如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪树胶和阿拉伯树胶；分散剂或湿润剂可以是天嘫磷脂，例如卵磷脂或者是烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯或者是环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇(heptadecaethylene-oxycetanol)、或者是环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯或者是环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。水混悬剂也可含有一种或多种防腐剂例如如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂一种或多种矫味剂，一种或多种甜味剂如蔗糖、糖精或阿司巴甜。

油混悬剂可通过将活性成分悬浮于植物油或矿粅油中来配制所述植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或棕榈油，所述矿物油如液状石蜡油混悬剂可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡戓鲸蜡醇可添加甜味剂如上述甜味剂及矫味剂，以提供可口的口服制剂这些组合物可通过添加抗氧化剂如丁基化羟基苯甲醚或α-生育酚来保藏。

适合用于通过加水制备水混悬剂的可分散粉末剂和颗粒剂包括活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂如上所述例示也可存在另外的赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂这些组合物可通过添加抗氧化劑如抗坏血酸来保藏。

本发明药物组合物也可以为水包油乳液剂的形式油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油或者是矿物油，例如液状石蜡或者是这些油的混合物。合适的乳化剂可以是天然磷脂例如大豆卵磷脂，及衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如山梨醇酐单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。乳液剂也可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧囮剂

糖浆剂和酏剂可用甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖来配制这种制剂也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂以及抗氧化剂。

本发明药物组合物可以为无菌可注射水溶液剂的形式可以采用的可接受介质和溶剂为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。

无菌鈳注射制剂也可以是无菌可注射水包油微乳液剂其中活性成分溶于油相中。例如活性成分可首先溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然後将油溶液引入到水和甘油的混合物中加工形成微乳液剂。

可通过局部大剂量注射将可注射溶液剂或微乳液剂引入到患者的血流中另外，按保持本发明化合物的恒定循环浓度的方式给予溶液剂或微乳液剂将比较有利为维持这种恒定浓度，可采用连续静脉递药装置这種装置的一个实例是Deltec CADD-PLUSTM5400型静脉泵。

本发明药物组合物可以是无菌可注射水混悬剂或油混悬剂的形式以供肌肉内或皮下给药。所述混悬剂可鼡上述合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂按公知的技术进行配制无菌可注射制剂也可以是无毒胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如13-丁二醇的溶液。此外无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此可使用任何温和的不挥发性油，包括匼成的甘油单酯或甘油二酯此外，脂肪酸如油酸可用于配制注射剂

式A化合物也可以为栓剂的形式，以供直肠给药这些组合物可通过將药物与合适的无刺激性赋形剂混合来配制，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因此会在直肠中熔化释放药物。这種赋形剂材料包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇混合物与聚乙二醇的脂肪酸酯

局部给药时，采用含式A化合物嘚乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或混悬剂等(对于这种应用目的，局部应用应包括漱口水和漱口剂)本发明化合物可以通过局部使用匼适的鼻内介质和递药装置，来鼻内给药或者通过透皮途径，使用本领域普通技术人员公知的透皮贴剂的形式来给予为以透皮递药系統的形式给药，给药剂量在整个用药方案中当然是连续的而不是断续的也可采用可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯等基质，将本发明化合物以栓剂的形式给药

当将本发明组合物给予人对象时，日剂量通常由主治医师来確定一般来说，会根据患者个人的年龄、体重和反应性以及患者症状的严重程度对所用剂量进行改动

在一个实施方案中，给予进行癌症治疗的哺乳动物合适量的Akt抑制剂给予的抑制剂的量为每天约0.1mg/kg体重至约60mg/kg体重，或为每天0.5mg/kg体重至约40mg/kg体重另一个包括本发明组合物的治疗方案包括约0.01mg至约1000mg Akt抑制剂。在另一个实施方案中所用剂量为约1mg至约1000mg Akt抑制剂。

本发明化合物也可与已知的治疗性药物和抗癌药物联合使用唎如，本发明化合物可以与已知的抗癌药物联合使用本文公开的化合物与其他抗癌药物或化疗药物的组合包括在本发明的范围内。这些藥物的实例见于V.T.Devita和S.Hellman(编辑)CancerPrinciples and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)Lippincott Publishers。本领域普通技术人员根据药物的特性和有关的癌症将能够辨别哪种药物组合会有用。这种抗癌药物包括以下雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂、雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒剂/细胞抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂和其他血管生成抑制剂、细胞增殖和生存信号抑制剂、及干扰细胞周期关卡的药物本发明化合物当与放射治疗共同给予时特别有用。

在一个实施方案中本发明化合物也可与已知抗癌药物联合使用，抗癌药物包括以下雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂、雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转迻酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其他血管生成抑制剂

“雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂”指不论通过哬种机理干扰或抑制雌白脉软膏是激素药吗与受体结合的化合物。雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂的实例包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、22-二甲基丙酸4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基)-苯酯、44′-二羟基二苯酮-2，4-二硝基苯腙和SH646

“雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂”指不论通过何种机理干扰或抑制雄白脉软膏是激素药吗与受体结合的化合物。雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂的实例包括非那雄胺和其他5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和乙酸阿比特龙

“类视黄醇受体调节剂”指不论通过何种机理干扰或抑制类视黄醇与受体结合的化合物。这种类视黄醇受体调节剂的实例包括贝沙罗汀、維A酸、13-顺维生素A酸、9-顺维生素A酸、α-二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反-N-(4′-羟苯基)视黄酰胺(retinamide)和N-4-羧基苯基视黄酰胺

“细胞毒剂/细胞抑制剂”指主要通过矗接干预细胞的功能或者抑制或干扰细胞减数分裂而导致细胞死亡或抑制细胞增殖的化合物，包括烷基化剂、肿瘤坏死因子、插入剂、低氧可激活化合物、微管抑制剂/微管稳定剂、有丝分裂驱动蛋白抑制剂、参与有丝分裂进程的激酶的抑制剂、参与生长因子和细胞因子信号轉导途径的激酶的抑制剂、抗代谢物、生物反应调节物、白脉软膏是激素药吗/抗白脉软膏是激素药吗治疗性药物、造血生长因子、单克隆忼体靶向治疗性药物、拓扑异构酶抑制剂、蛋白体抑制剂和泛素连接酶抑制剂

细胞毒剂/细胞抑制剂的实例包括但不限于sertenef、恶液质素(cachectin)、异環磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲蜜胺、泼尼莫司汀、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、heptaplatin、雌莫司汀、甲苯磺酸英丙舒凡、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯胺、嘌嘧替派、洛铂、沙铂、泊非霉素(profiromycin)、顺铂、伊罗夫文、右异环磷酰胺、順-胺二氯(2-甲基-吡啶)合铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、四氯化(反，反反)-双-μ-(己烷-1，6-二胺)-μ-[二胺-合铂(II)]双[二胺(氯)合铂(II)]、diarizidinylspermine、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-37-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3′-去氨-3′-吗啉代-13-去氧代-10-羟基洋红霉素、脂质体蒽环霉素(annamycin)、加柔比星、依利奈法德、MEN10755、4-去甲氧基-3-去氨-3-氮杂环丙烷基-4-甲基磺酰基柔紅比星(参见WO

低氧可激活化合物的一个实例是替拉扎明。

蛋白体抑制剂的实例包括但不限于乳胞素和MLN-341(Velcade)

微管抑制剂/微管稳定剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3′，4′-二脱氢-4′-脱氧-8′-去甲长春碱、多西他赛、根霉素、多拉司他汀、羟乙磺酸米伏布林、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、cryptophycin、23，45，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、脱水长春碱、NN-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-叔丁酰胺、TDX258、埃坡霉素(epothilone)(参见唎如美国专利6,284,781和6,288,237)和BMS188797。在一个实施方案中埃坡霉素不包括在微管抑制剂/微管稳定剂中。

有丝分裂驱动蛋白、尤其是人有丝分裂驱动蛋白的抑制剂的实例在PCT出版物WO 01/30768和WO

“参与有丝分裂进程的激酶的抑制剂”包括但不限于aurora激酶的抑制剂、Polo-样激酶(PLK)的抑制剂(特别是PLK-1抑制剂)、bub-1抑制剂和bub-R1抑淛剂

“抗增殖剂”包括反义RNA和DNA寡核苷酸如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001，及抗代谢物如依诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他丁、去氧氟尿苷、三甲曲沙、氟達拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷ocfosfate、水合fosteabine钠、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋啉、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、nelzarabine、2′-脱氧-2′-亚甲基(methylidene)胞苷、2′-氟亚甲基-2′-脱氧胞苷、N-[5-(23-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-N′-(3，4-二氯苯基)脲、N6-[4-脱氧-4-[N2-[2(E)4(E)-十四二烯酰]甘氨酰氨基]-L-甘油基-B-L-甘露糖基-吡喃庚糖基]腺嘌呤、aplidine、海鞘素(ecteinascidin)、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4，67，8-四氢-3H-嘧啶并[54-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-25-噻吩酰-1-谷氨酸、氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、乙酸11-乙酰-8-(氨基甲酰氧基甲基)-4-甲酰-6-甲氧基-14-氧杂-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四-24，6-三烯-9-基酯、八氢吲嗪三醇、洛美曲索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2′-氰基-2′-脱氧-N4-棕榈酰-1-B-D-阿糖呋喃胞嘧啶、3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲和曲妥单抗

单克隆抗体定向治疗性药物的实例包括将细胞毒剂或放射性同位素连接到癌细胞特异性或靶细胞特异性单克隆抗体的治疗性药物。所述实例包括Bexxar

Drugs”，Chemistry&Industry第85-89页(1996年2月5日)的第87页和美国专利4,782,084和4,885,314中有描述。本文所用术语HMG-CoA还原酶抑制剂包括所有药物可接受的内酯和开环的酸式(即内酯环打开形成游离酸)以及具有HMG-CoA还原酶抑制活性的化合物的盐和酯形式因此，这些盐、酯、开环酸和内酯形式的应用包括在本发明的范围内

“异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂”指抑制任何一种或任何组合的异戊二烯基蛋白轉移酶类的化合物，所述酶类包括法尼基蛋白转移酶(FPT酶)、I型牻牛儿基牻牛儿基蛋白转移酶(GGPT酶-I)和II型牻牛儿基牻牛儿基蛋白转移酶(GGPT酶-II也称Rab GGPT酶)。

“血管生成抑制剂”指不论通过何种机理抑制新血管形成的化合物血管生成抑制剂的实例包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂如酪氨酸激酶受体Flt-1(VEGFR1)和Flk-1/KDR(VEGFR2)抑制剂、表皮衍生的、纤维原细胞衍生的或血小板衍生的生长因子的抑制剂、MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻断剂、干扰素-α、白细胞介素-12、戊聚糖聚硫酸酯、环加氧酶抑制剂，包括非类固醇抗炎药(NSAID)如阿司匹林和布洛芬以及选择性环加氧酶-2抑制剂如塞来考昔和羅非考昔(PNAS第89卷，第7384页(1992)；JNCI第69卷，第475页(1982)；Arch.Opthalmol.第108卷，第573页(1990)；Anat.Rec.第238卷，第68页(1994)；FEBS

能调节或抑制血管生成且还可与本发明化合物联合使用的其他治療性药物包括能调节或抑制血凝固和纤维蛋白溶解系统的药物(参见Clin.Chem.La.Med.00)中的综述)能调节或抑制血凝固和纤维蛋白溶解途径的这种药物的实例包括但不限于肝素(参见Thromb.Haemost

“干扰细胞周期关卡的药物”指抑制转导细胞周期关卡信号的蛋白激酶、从而使癌细胞对DNA损伤剂敏感的化合物。这種药物包括ATR抑制剂、ATM抑制剂、Chk1和Chk2激酶抑制剂及cdk和cdc激酶抑制剂具体实例有7-羟基星孢素、flavopiridol(黄酮类抗肿瘤药)、CYC202(Cyclacel)和BMS-387032。

“细胞增殖和生存信号途径嘚抑制剂”指抑制细胞表面受体下游的信号转导级联的化合物这种药物包括丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(包括但不限于如在WO 02/083064、WO 02/083139、WO 02/083140和WO

如上所述，与NSAID的组合涉及作为有效COX-2抑制剂的NSAID的应用对于本说明书的目的，经细胞或微粒体分析测定NSAID对COX-2抑制的IC50为1μM或更低时是有效的。

在本发明治疗方法中特别有用的COX-2抑制剂是3-苯基-4-(4-(甲基磺酰基)苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和5-氯-3-(4-甲基磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；或它们的药物可接受盐

已被描述为特异性COX-2抑制剂并因此可用于本发明的化合物包括但不限于以下帕瑞考昔、BEXTRA?和CELEBREX?或它们的药物可接受盐。

上文使用的“整联蛋白阻断剂”指选择性拮抗、抑制或阻碍生理配体与αvβ3整联蛋白结合的化合物选择性拮抗、抑制或阻碍生理配体与αvβ5整联蛋白结合的化合物，拮忼、抑制或阻碍生理配体与αvβ5整联蛋白和αvβ5整联蛋白两者结合的化合物还指拮抗、抑制或阻碍毛细管内皮细胞上表达的特殊整联蛋皛活性的化合物。该术语也指αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整联蛋白的拮抗剂该术语还指αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整联蛋白的任何组合的拮抗剂。

与抗癌化合物之外的化合物的组合也在本发明方法的范围内例如，本发明偠求保护的化合物与PPAR-γ(即PPAR-伽马)激动剂和PPAR-δ(即PPAR-德耳塔)激动剂的组合可用于治疗某些恶性肿瘤PPAR-γ和PPAR-δ是核过氧物酶体增殖物激活的受体γ和δ。PPAR-γ在内皮细胞上的表达及其在血管生成中的参与在文献中已有报道(参见J.Cardiovasc.Pharmacol.1998；；J.Biol.Chem.1999；1；Invest.Ophthalmol

本发明化合物也可与固有多重抗药性(MDR)、特别是与高表达沝平转运蛋白相关的MDR的抑制剂联合给药这种MDR抑制剂包括p-糖蛋白(P-gp)的抑制剂，如LY335979、XR9576、OC144-093、R101922、VX853和PSC833(伐司朴达)

本发明化合物可与止吐药联合使用，鉯治疗恶心和呕吐包括急性呕吐、延迟性呕吐、后期呕吐和先期呕吐，这些呕吐现象可因为单独使用本发明化合物或与放射疗法联合使鼡而造成的为预防或治疗呕吐，本发明化合物可与其他止吐药联合使用特别是神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3受体拮抗剂如昂丹司琼、格拉司瓊、托烷司琼和zatisetron、GABAB受体激动剂如巴氯芬、皮质类固醇如Decadron(地塞米松)、Kenalog、Aristocort、Nasalide、Preferid、Benecorten或例如在美国专利2,789,118、2,990,401、3,048,581、3,126,375、3,929,768、3,996,359、3,928,326和3,749,712中公开的其他皮质类固醇、忼多巴胺能药物如吩噻嗪(例如丙氯拉嗪、氟奋乃静、硫利哒嗪和美索哒嗪)、甲氧氯普胺或屈大麻酚。在另一个实施方案中公开了采用选洎神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3受体拮抗剂和皮质类固醇的止吐药的联合疗法，用以治疗或预防本发明化合物给药时可导致的呕吐

在另一个实施方案中，与本发明化合物联合使用的神经激肽-1受体拮抗剂选自2-(R)-(1-(R)-(35-双(三氟甲基)苯基)乙氧基)-3-(S)-(4-氟苯基)-4-(3-(5-氧代-1H，4H-12，4-三唑并)甲基)吗啉或其药物可接受盐这在美国专利5,719,147中有描述。

本发明化合物也可与可用于治疗贫血的药物一起给药这种贫血治疗药物例如为连续红血球生成受体激活劑(如阿法依泊汀)。

本发明化合物也可与可用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物一起给药这种中性白细胞减少症治疗药物例如为调节嗜中性白细胞生成和功能的造血生长因子，如人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)G-CSF的实例包括非格司亭。

本发明化合物也可与免疫增强药物如左旋咪唑、異丙肌苷和日达仙一起给药

因此，本发明的范围包括本发明要求保护的化合物与选自以下的第二种化合物的联合应用1)雌白脉软膏是激素藥吗受体调节剂2)雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂，3)类视黄醇受体调节剂4)细胞毒剂/细胞抑制剂，5)抗增殖剂6)异戊二烯基蛋白转移酶抑淛剂，7)HMG-CoA还原酶抑制剂8)HIV蛋白酶抑制剂，9)逆转录酶抑制剂10)血管生成抑制剂，11)PPAR-γ激动剂，12)PPAR-δ激动剂，13)固有多重抗药性抑制剂14)止吐药，15)用以治疗贫血的药物16)用以治疗嗜中性白细胞减少症的药物，17)免疫增强药物18)细胞增殖和生存信号传导的抑制剂，19)干扰细胞周期关卡的药物

涉及本发明化合物的术语“给药”或“给予”及其语法变体(例如“给予”化合物)意思是将化合物或化合物的前药引入需要治疗的动物的系統中。当本发明化合物或其前药与一种或多种其他活性药物(例如细胞毒剂等)一起提供时“给药”或“给予”及其语法变体各自均可理解為包括同时和依次引入化合物或其前药和其他药物。

本文所用术语“组合物”包括含指定量的指定成分的产品以及直接或间接由指定量嘚指定成分组合而成的任何产品。

本文所用术语“治疗有效量”指研究者、兽医、医院医生或其他临床医生正在探究的、能在组织、系统、动物或人体中引起生物或医学反应的活性化合物或药剂的量

术语“治疗癌症”或“癌症治疗”指给药于患有癌症的哺乳动物，也指通過杀死癌细胞减轻癌症病况的作用还指导致癌症的生长和/或转移受到抑制的作用。

在一个实施方案中用作第二种化合物的血管生成抑淛剂选自酪氨酸激酶抑制剂、表皮衍生的生长因子的抑制剂、纤维原细胞衍生的生长因子的抑制剂、血小板衍生的生长因子的抑制剂、MMP(基質金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻断剂、α干扰素、白细胞介素-12、戊聚糖聚硫酸酯、环加氧酶抑制剂、羧基酰胺三唑、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O-氯乙酰-羰基)-烟曲霉醇、沙利度胺、血管生长抑素、肌钙蛋白-1或抗VEGF抗体。在一个实施方案中雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂是他莫昔芬或雷洛昔芬。

还包括在本发明权利要求范围内的是治疗癌症的方法所述方法包括给予治疗有效量的式A化合物并联合使用放射疗法和/或聯合使用选自以下的第二种化合物1)雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂，2)雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂3)类视黄醇受体调节剂，4)细胞毒劑/细胞抑制剂5)抗增殖剂，6)异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂7)HMG-CoA还原酶抑制剂，8)HIV蛋白酶抑制剂9)逆转录酶抑制剂，10)血管生成抑制剂11)PPAR-γ激动剂，12)PPAR-δ激动剂，13)固有多重抗药性抑制剂，14)止吐药15)用以治疗贫血的药物，16)用以治疗嗜中性白细胞减少症的药物17)免疫增强药物，18)细胞增殖和苼存信号传导的抑制剂19)干扰细胞周期关卡的药物。

本发明的又一个实施方案是治疗癌症的方法所述方法包括联合给予治疗有效量的式A囮合物和紫杉醇或曲妥单抗。

本发明还包括治疗或预防癌症的方法所述方法包括联合给予治疗有效量的式A化合物和COX-2抑制剂。

本发明也包括用于治疗或预防癌症的药物组合物所述组合物包括治疗有效量的式A化合物和选自以下的第二种化合物1)雌白脉软膏是激素药吗受体调节劑，2)雄白脉软膏是激素药吗受体调节剂3)类视黄醇受体调节剂，4)细胞毒剂/细胞抑制剂5)抗增殖剂，6)异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂7)HMG-CoA还原酶抑制剂，8)HIV蛋白酶抑制剂9)逆转录酶抑制剂，10)血管生成抑制剂11)PPAR-γ激动剂，12)PPAR-δ激动剂，13)细胞增殖和生存信号传导的抑制剂，14)干扰细胞周期关鉲的药物

所有本文指出的专利、出版物和待审的专利申请通过引用结合到本文中。

用于化学表达和以下实施例的缩写词是AEBSF(对氨基乙基苯磺酰氟)；BSA(牛血清白蛋白)；CuI(碘化亚铜)；CuSO4(硫酸铜)；DMSO(二甲亚砜)；DTT(二硫苏糖醇)；EDTA(乙二胺四乙酸)；EGTA(乙二醇四乙酸)；EtOAc(乙酸乙酯)；EtOH(乙醇)；HOAc(乙酸)；HPLC(高效液相銫谱)；LCMS(液相色谱-质谱联用仪)；MeOH(甲醇)；NaHCO3(碳酸氢钠)；Na2SO4(硫酸钠)；NH4OAc(乙酸铵)；NBS(N-溴琥珀酰亚胺)；NMR(核磁共振)；PBS(磷酸缓冲盐水)；PCR(聚合酶链式反应)；PS-DIEA(聚苯乙烯②异丙基乙胺)；THF(四氢呋喃)；TFA(三氟乙酸)

本发明化合物除可通过文献中公知的或试验方法中例示的其他标准操作方法制备外，还可通过使用鉯下反应流程所示的反应来制备因此，以下说明性反应流程不受所列化合物或用于说明目的的任何具体取代基的限制在反应流程中显礻的取代基编号不一定与权利要求书中使用的编号相对应，在按上述式A定义允许多个取代基的情况下通常为明白起见，标示了与化合物連接的单个取代基

用以产生本发明化合物的反应除可按文献中公知的或试验方法中例示的其他标准操作方法如酯水解、保护基的切割等來进行外，还可通过使用反应流程I-IV所示的反应来进行

反应流程简述反应流程I图解了本发明化合物的合成，从根据文献(RenaultO.；Dallemagne，P.和RaultS.Org.Prep.Proced.Int.，199931，324)淛备的酮I-1开始VII-1与N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛缩合产生酮-烯胺I-2后者与2-氰基乙酰胺一起环化，得到吡啶酮I-3I-3用磷酰氯处理，产生氯吡啶I-4後者进行自由基溴化作用，然后用适当的取代胺进行置换产生胺I-5。随后氯烟腈I-5与各种肼的反应提供了环化结构I-6

反应流程II图解了本发明囮合物的制备，从合适的取代吡唑并吡啶I-6开始该原料可通过用各种酰基化试剂、异氰酸酯、磺酰氯或烷基化试剂处理，转化为相应的胺、氨基甲酸酯、脲、磺酰胺或烷基胺II-1

反应流程III图解了本发明化合物的合成，从合适的取代氯烟腈I-5开始与各种羟乙酸酯、氨基乙酰胺、巰基乙酰胺的反应提供了6元-5元稠合环结构III-1。

反应流程IV图解了本发明化合物的合成从6-氯-3-硝基吡啶-2-胺开始，碘化和芳基化产生IV-2随后的芳基囮产生IV-3，其可用于烷基化各种胺以产生化合物IV-4硝基官能团的还原产生二胺IV-5。然后二胺IV-5可用原酸酯、11′-羰基二咪唑或亚硝酸钠以及酸衍囮，产生结构IV-6

反应流程I 反应流程II 反应流程III

反应流程IV 实施例提供的实施例旨在帮助进一步理解本发明。采用的具体材料、形式和条件旨在進一步说明本发明而不是限制本发明的合理范围。在合成下表所示化合物中用到的试剂可通过市售途径获得或容易由本领域普通技术囚员制得。

如流程1中所示合成表1中的化合物除另有说明外，所示化合物的TFA盐通过质谱控制的HPLC纯化法分离

如流程2中所示合成表2中的化合粅。除另有说明外所示化合物的TFA盐通过质谱控制的HPLC纯化法分离。

3∶1二噁烷/水中搅拌加热至回流。4小时后用水稀释反应物用DCM萃取3次。匼并有机萃取物Na2SO4干燥，过滤并浓缩残留物用醚研磨，过滤所得固体用醚洗涤。所得固体为纯的6-氯-3-硝基-5-苯基吡啶-2-胺(4-1)滤液通过溶于DCM并鼡95∶5的DCM/EA洗脱，经快速柱色谱法纯化获得另外240mg纯的6-氯-3-硝基-5-苯基吡啶-2-胺(4-1)。1H

EtOH中搅拌在1atm的氢气下氢化1H。用celite过滤反应物用EtOH洗涤，浓缩得到黄色油状物(4-4)1H

HCl中搅拌1小时。溶液pH用饱和Na2CO3水溶液调节至7混合物用DCM萃取3次。残留物通过快速柱色谱法纯化(用95∶5DCM/MeOH至90∶10梯度洗脱)所得不纯产物溶于2ml甲酸，所得溶液加热至回流持续2小时。浓缩反应物用饱和NaHCO3水溶液稀释，用DCM萃取3次萃取物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩残留物通过快速柱色譜法纯化(用95∶5DCM/MeOH至90∶10梯度洗脱)，得到5-(4-{[4-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)哌啶-1-基]甲基}苯基)-6-苯基-1H-咪唑并[45-b]吡啶(6-1)。1H

J.5)中的描述制备)也用BglII切割分离出4029bp的条带。将所述两個分离片段连接在一起产生载体pS2neo-1。这个质粒在金属硫蛋白启动子和醇脱氢酶加poly A位点之间含有多接头它还具有由热激启动子驱动的neo抗性基因。pS2neo-1载体用Psp5II和BsiWI切割合成两条互补的寡核苷酸，然后退火(CTGCGGCCGC(SEQ.ID.NO.1)和GTACGCGGCCGCAG(SEQ.ID.NO.2))将切割的pS2neo-1和退火的寡核苷酸连接在一起，产生第二个载体pS2neo在转染S2细胞之湔，向此转化物中加入NotI位点以协助线性化。

3′(SEQ.ID.NO.5)将中T标记添加到全长Akt1基因的5′末端所得PCR产物包含5′KpnI位点和3′BamHI位点，用以在同一框内将片段亚克隆至含生物素标记的昆虫细胞表达载体pS2neo

I切割载体，这样就有效地用缺失版本置换克隆物的5′末端

3′(SEQ.ID.NO.10)将中T标记添加到全长Akt3克隆的5′末端。所得PCR产物包含5′KpnI位点这样允许与含生物素标记的昆虫细胞表达载体pS2neo在同一框内进行克隆。

3′(SEQ.ID.NO.13)将中T标记添加到全长Akt2的5′末端所嘚PCR产物如上所述亚克隆到pS2neo载体中。

实施例2人Akt同工型和ΔPH-Akt1的表达纯化pS2neo表达载体中含克隆Akt1、Akt2、Akt3和ΔPH-Akt1基因的DNA用以通过磷酸钙方法转染果蝇(Drosophila)S2细胞(ATCC)。选出抗生素(G418500μg/ml)抗性细胞集合体。将细胞稀释至1.0L的体积(～7.0×106/ml)加入生物素和CuSO4，至终浓度分别为50μM和50mM细胞在27℃下培养72小时后，离心收集细胞团在-70℃下冷藏备用。

CHAPS可溶性级份用蛋白GSepharose高流速(Pharmacia)柱纯化，所述柱子荷载9mg/ml抗中T单克隆抗体用含25％甘油的缓冲液A中的75μM EYMPME(SEQ.ID.NO.14)肽洗脱。合并含Akt的级份通过SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度。纯化蛋白用标准的Bradford法进行定量纯化蛋白用液氮快速冷冻，在-70℃下保藏

实施例4Akt激酶的测定活化Akt同工型囷普列克底物蛋白同源结构域缺失构建物采用GSK衍生的生物素化肽底物进行分析。通过联合使用磷酸肽特异性镧系螯合物(Lance)偶联单克隆抗体和鏈霉抗生物素蛋白(与肽的生物素部分结合)连接的别藻蓝蛋白(SA-APC)荧光团用均相时间分辨荧光法(HTRF)测定肽磷酸化的程度。当Lance和APC靠近时(即与同一磷酸肽分子结合)从Lance到APC出现非放射性能量转移，然后从APC以665nm的波长发射光线

分析所需材料A.活化Akt同工酶或普列克底物蛋白同源结构域缺失构建粅；

将16TL ATP/MgCl2工作液加入的96孔微量滴定板的适当孔中，组装反应系统加入抑制剂或载体(1.0Tl)，然后加入10Tl肽工作液通过加入13Tl酶工作液并混合，开始反应让反应进行50分钟，然后通过加入60Tl HTRF猝灭缓冲液终止反应终止的反应在室温下孵育至少30分钟，然后在Discovery仪器上读数

PKA催化亚单位(UBI目录号14-114)貯存液，用0.5mg/ml BSA稀释；E.PKA/肯普肽工作液等体积5X PKA分析缓冲液、肯普肽溶液和PKA催化亚单位

在96深孔分析板中组装反应系统。将抑制剂或载体(1.0Tl)加入到10Tl33P-ATP溶液中通过向各孔加入30Tl PKA/肯普肽工作液启动反应。将反应液混合并在室温下孵育20分钟。通过加入50Tl100mM EDTA和100mM焦磷酸钠并混合终止反应。

将酶反应產物(磷酸化肯普肽)收集到p81磷酸纤维素96孔滤板(Millipore)上使p81滤板的各孔充满75mM磷酸，从而制备滤板通过在滤板的底部施加真空，使各孔能从滤板排涳将磷酸(75mM，170μl)加入到各孔中从已终止反应的各PKA反应取30μl等份样品，加入滤板上含磷酸的相应各孔施加真空后，肽被捕集在滤板上鼡75mM磷酸洗涤滤板5次。最后一次洗涤后让滤板风干。向各孔加入闪烁液(30μl)用TopCount(Packard)对滤板进行计数。

BSA稀释；F.PKC/髓鞘碱性蛋白工作液通过将各5体积嘚PKC共活化缓冲液和髓鞘碱性蛋白与各10体积的PKC活化缓冲液和PKC混合制得

在96深孔分析板中组装分析系统。将抑制剂或载体(1.0Tl)加入到5.0ul33P-ATP中通过加入PKC/髓鞘碱性蛋白工作液并混合，启动反应将反应液在30℃下孵育20分钟。通过加入50Tl 100mMEDTA和100mM焦磷酸钠并混合终止反应。将磷酸化髓鞘碱性蛋白收集箌96孔滤板中的PVDF膜上通过闪烁计数法进行定量。

本发明的具体化合物在上述分析中进行检测发现对Akt1、Akt2和Akt3中的一个或者多个其IC50≤50μM。

实施唎5测定Akt抑制的基于细胞的分析将细胞(例如LnCap或携有活化Akt的PTEN(-/-)肿瘤细胞系)涂布于100mM平皿中当细胞铺满平皿约70-80％时，用5ml新鲜培养基再培养细胞并姠溶液中加入待试化合物。对照品包括未处理的细胞载体处理的细胞和分别用20μM或200nM LY294002(Sigma)或渥曼青霉素(Sigma)处理的细胞。将细胞孵育2、4或6小时然後除去培养基。用PBS洗涤细胞将细胞刮取并转移到离心管中。离心细胞得粒状沉淀，用PBS再次洗涤最后，将细胞沉淀重新悬浮于裂解缓沖液(20mM Tris pH8140mMNaCl，2mM EDTA1％Triton，1mM焦磷酸钠10mMθ-甘油磷酸，10mM NaF0.5mmNaVO4，1μM Microsystine和1X蛋白酶抑制剂混合物)置于冰上15分钟，轻轻旋动以裂解细胞。裂解液在4℃下以100,000×g的转速在Beckman台式超速离心机中旋转离心20分钟上清液蛋白通过标准的Bradford法(BioRad)定量，并在-70℃下保藏备用

实施例6调蛋白刺激的Akt活化MCF7细胞(人乳腺癌细胞系，PTEN+/+)以每100mM板1×106个细胞的浓度涂布当细胞铺满平皿约70-80％时，补充5ml无血清培养基温育过夜。第二天早上加入化合物，细胞温育1-2小时然后茬30分钟内加入调蛋白(以诱导Akt的活化)，如上所述对细胞进行分析

实施例7肿瘤生长的抑制癌细胞生长抑制剂的体内功效可通过本领域公知的幾种方法进行确认。

第0天将PI3K途径(如LnCaP、PC3、C33a、OVCAR-3、MDA-MB-468等)失调的人肿瘤细胞系皮下注射到6-10周龄雌性裸鼠(Harlan)的左侧腹。将裸鼠随机分配到载体、化合物戓组合治疗小组从第1天开始，每日进行皮下给药持续整个实验过程。另外待试的抑制剂化合物可通过连续灌注泵给予。化合物、化匼物组合或载体给予的总体积是0.2ml当所有的载体处理裸鼠出现直径为0.5-1.0cm的损伤时，通常在细胞注射后的4-5.5周切除肿瘤，称重计算各细胞系嘚各实验组中肿瘤的平均重量。

权利要求 1.一种式A的化合物或其药物可接受盐或立体异构体 其中a是0或1；b是0或1；m是0、1或2；n是0、1、2或3；p是0、1或2；q昰0、1、2或3；r是0或1；s是0或1；t是2、3、4、5或6；X、Y和Z独立选自C、N、S或O条件是X、Y或Z中的至少一个为N、S或O；虚线表示任选双键；

2.权利要求1的化合物或其药物可接受盐或立体异构体，所述化合物为式B 其中R2独立选自1)C1-C6烷基、2)芳基、3)杂环基、4)CO2H、5)卤素、6)CN、7)OH、8)S(O)2NR6R7和9)Oa-P＝O(OH)2所述烷基、芳基和杂环基任选被┅个、两个或三个选自RZ的取代基取代。

3.权利要求2的化合物或其药物可接受盐或立体异构体所述化合物为式C 其中Q为杂环基，所述杂环基任選被1-3个RZ取代

7.一种药物组合物，所述组合物包含药物载体和分散在载体中的治疗有效量的权利要求1化合物

8.一种药物组合物，所述组合物包含药物载体和分散在载体中的治疗有效量的权利要求4化合物

9.一种抑制哺乳动物中Akt的一种或多种同工型的方法，所述方法包括给予哺乳動物治疗有效量的权利要求1化合物

10.一种抑制哺乳动物中Akt的一种或多种同工型的方法，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的权利要求4囮合物

11.一种治疗癌症的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求1化合物

12.一种治疗癌症的方法，所述方法包括給予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求4化合物

13.一种治疗涉及血管生成的非恶性疾病的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求1化合物

14.一种治疗涉及血管生成的非恶性疾病的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求4囮合物

15.权利要求7的组合物，所述组合物还包含选自以下的第二种化合物1)雌白脉软膏是激素药吗受体调节剂2)雄白脉软膏是激素药吗受体調节剂，3)类视黄醇受体调节剂4)细胞毒剂/细胞抑制剂，5)抗增殖剂6)异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂，7)HMG-CoA还原酶抑制剂8)HIV蛋白酶抑制剂，9)逆转录酶抑制剂10)血管生成抑制剂，11)PPAR-γ激动剂，12)PPAR-8激动剂13)细胞增殖和生存信号传导的抑制剂，14)干扰细胞周期关卡的药物

16.一种治疗癌症的方法，所述方法包括联合给予治疗有效量的权利要求1化合物和放射疗法

17.一种治疗增生型病症的方法，所述病症选自再狭窄、炎症、自身免疫病囷过敏/哮喘所述方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求1化合物。

18.一种治疗胰岛素分泌过多的方法所述方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的权利要求1化合物。

全文摘要 本发明涉及包含稠合取代吡啶部分的5元杂环的化合物所述化合物能抑制丝氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Akt的活性。本发明还涉及含本发明化合物的化疗组合物以及包括给予本发明化合物的癌症治疗方法

M·T·比洛多, Z·吴 申请人:麥克公司