进行了分子克隆成功地实现了PDSH株ORF2基因在BHK一21细胞中的表达，并对表达的重组蛋白 迸行了初步鉴定 参照GenBank发表的PCV-2基因序列，设计合成一对引物对PCV一2PDSH株、LY株ORF2基因 进行PCR扩增，產物经琼脂糖凝胶电泳分析呈现一条约719bp的特异条带，将其回收后克隆到 pMDl8-Teasy载体进行测序将所测序列与已公布的PCV一2ORF2序列进行同源性比较，並绘制系 统发育进化树通过扩增可以获得702bp的PCV-2ORF2全基因，编码233个氨基酸分子量为 。 27995．93D 株同源性最高达99．3％；和国外毒株相比，LY株与国外嘚Denmark株的核苷酸同源性最高达99．6％ 根据基因分析，设计一对带有酶切位点的引物利用此引物从克隆的pMDl8一T—ORF2重组质粒 扩增出含ORF2主要抗原位點的566bp区段，经肋棚I和HindIll双酶切将回收的ORF2基因定向 插入真核表达载体pcDNA3．0，经Baa'BI和肼力dIII酶切、测序鉴定得到阳性重组表达质粒 检测到了PCV一2 ORF2基因嘚mRNA；经间接免疫荧光检测表明，表达的重组蛋白能够被PCV一2阳性 血清所识别具有良好的抗原性。 ORF2基因的mRNA 质粒在BHK一21细胞中进行了瞬时表达，在转染的BHK-21细胞中检测到PCV一2 表达的Cap蛋白可与PCV一2抗血清发生特异性反应 及其单克隆抗体的研究奠定了基础。 ’ 关键词：猪2型圆环病毒河喃株，ORF2克隆，序列分析基因表达

内容提示：Fad2和Fae1基因RNA双干扰载体的構建与转化甘蓝型油菜的研究

文档格式：PDF| 浏览次数：2| 上传日期： 10:32:04| 文档星级：?????