protein,CHOP)通路是内质网应激介导细胞凋亡的3条通路之一,目前国内外对内质网应激介导细胞凋亡在胃癌方面的研究较少。目的:构建针对人CHOP基因的短发卡RNA表达载体,观察RNA干扰对人胃癌细胞系BGC823细胞CHOP基因表达的抑制作用。方法:设计CHOP的shRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入真核表达载体pSUPER-EGFP1,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人胃癌细胞系BGC823细胞,采用RT-PCR和Western
blotting分别检测CHOP基因mRNA和蛋白表达的变化。结果与结论:把针对CHOP基因的shRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPER-EGFP1载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Western blot检测显示,CHOP基因的表达水平明显降低,其中以CHOP-1为靶序列的shRNA沉默作用最强,CHOP的表达抑制率约67%。
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