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动植物蛋白源对牙鲆摄食、生长和蛋白质及脂肪代谢的影响.pdf 192页
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博士学位论文
动植物蛋白源对牙鲆摄食、生长和蛋白质
及脂肪代谢的影响
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Effectsofanimal
plantprotein
Iip试metabolismofJapanese
growthprotein
flounder,Paralichthys
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答辩委员会成员签宁
动植物蛋白源对牙鲆摄食、生长和蛋白质及脂肪代谢的影响
本文比较研究了牙鲆对动物蛋白源(鱼粉，FM；浓缩鱼蛋白，FPC)、植物蛋白源(大
豆浓缩蛋白，SPC：大豆分离蛋白，sP0中蛋白质组分(鱼粉蛋白与大豆蛋白)和非蛋白
组分(如大豆低聚糖，SBOS：非淀粉多糖，NSP；胆固醇)对牙鲆摄食、消化、吸收、
合成、分解和排泄等相关环节的异同，阐明水生动物不能有效利用植物性蛋白源的原
因，通过前处理和营养配伍技术对植物蛋白源进行修饰和改造，来提高水生动物对植
物蛋白源的利用。研究内容包括：(1)SPC替代FM对牙鲆摄食、生长和蛋白质代谢的
影响；(2)不同氨基酸包被方法对牙鲆生长性能和血浆生理生化指标的影响；(3)不同动
植物蛋白源对牙鲆摄食、生长和蛋白质及脂肪代谢的影响；(4)饲料中添加SBOS对牙
鲆摄食、生长和蛋白质及脂肪代谢的影响；(5)不同动植物蛋白源基础饲料中添加胆固
醇对牙鲆摄食、生长和蛋白质及脂肪代谢的影响；(6)大豆蛋白源降牙鲆血清胆固醇机
理的初步研究。主要研究结果如下：
维酯包被氨基酸(CAP—AA)形式添加。试验表明，随着SPC替代水平的提高，牙鲆摄食
率(r=一O．901，P<0．01)、特定生长率(SGR)(r=一O
P<0．01)、粗蛋白(v-一0
著提高了牙鲆摄食率、SGR和饲料表观消化率，但其FER、PER、蛋白质沉积率仍显
著低于sO组；饲料中添加CAP。AA显著提高了牙鲆SGR和饲料表观消化率，且其蛋
白质和氨基酸沉积率与完整蛋白质相当，但其SGR和PER仍低于SO组。
一蛋白源，未添加氨基酸，作为对照组。饲料SPCF在饲料SPC的基础上添加了2．3％
玉米醇溶蛋白、卡拉胶和甘油三棕榈酸酯包被氨基酸(ECAA)。试验表明，饲料中添加
浆UN浓度。饲料中添加CAA显著提高了摄食3h后牙鲆血浆中FAA浓度；而CAA
包被处理后，血浆FAA浓度明显降低，尤其是醋酸纤维酯和甘油三棕榈酸酯包被处理
组效果最为明显。由此可知，牙鲆不能有效利用CAA用于蛋白质合成，而CAA包被
处理可促进CAA与饲料中结合氨基酸的同步吸收，提高了蛋白质合成率。
植物性蛋白源组牙鲆消化道中蛋白酶和淀粉酶活性显著低于动物性蛋白源组，其中SPC
组牙鲆消化道中蛋白酶活性显著低于SPl组；③与动物性蛋白源组相比，植物性蛋白源
活性显著降低，而血浆UN浓度显著提高；④FPC和SPC组牙鲆血浆总胆固醇(Tc)浓度
显著低于FM和SPI组。植物性蛋白源组牙鲆血浆高密度脂蛋白胆固醇／f氐密度脂蛋白胆
固醇(LDL-C／HDL-C)比值显著高于动物性蛋白源组；⑤植物性蛋白源组牙鲆肝脏中脂
肪含量显著高于动物性蛋白源组，饲喂植物性蛋白源组牙鲆肝脏组织结构损害严重，
肝脏组织空泡化现象严重，即“脂肪
正在加载中，请稍后...油脂储存品质变化及影响因素解析
一、油脂在储存过程中的劣变
油脂中的不饱和脂肪酸被氧化后的产物或水解产生的产物都极易分解为挥发性的低分子醛、酮、酸，进而引起油脂品质发生劣变。这种劣变，不仅会使油脂产生各种异、臭味，使油脂的色泽加深，而且还可产生毒性，降低其营养价值。油脂劣变的特性主要表现如下。
（一）气味的劣变
油脂在储存过程中所产生的气味通常称为“回臭”和“酸败味”等。回臭是指油脂劣变初期阶段因氧化分解产生的气味，当氧化分解到相当深度，有较多的氧化产物分解成低分子的醛、酮和酸等挥发性强的物质时，他们所具有的刺激性气味成为“酸败臭”。回味与酸败都是油脂劣变时所产生的现象，在某些方面非常相似，但由于油脂的氧化反应非常复杂，故有时候是回味与酸败并存，无明显的界限之分。
植物油脂含有大量的不饱和脂肪酸时，在储存的过程中容易氧化分解，使过氧化值升高，游离脂肪酸增加，酸价升高，并同步产生醛和酮等物质，从而使油脂失去原来的新鲜气味与滋味，产生一种有刺激性的气味和不顺口的滋味，这种现象称为油脂酸败。
（二）回色
油脂精炼后一般呈现淡黄色或接近无色，但在以后的储存过程中会逐渐向精炼前的原来的油色转变，产生这种现象我们叫回色。回色油的色泽稳定性降低，受到外界的影响，稍被氧化即色泽加深，故在储存中油脂的回色程度反映了油脂色泽的稳定性。
一般油脂储存后均会出现回色现象，主要原因是由于生育酚氧化生成5,6-醌类色素所致，其次色素的异构体或色素的低分子聚合物可能也与回色有关。
回色条件因储存条件不同，时间上也因条件不同而异，回色较快的达到最高着色程度时，最快的可以是几个小时，较慢的也要半年。相同条件下，不同油品的回色程度不同，大豆油因由特殊的色素组成，回色现象较少。棉籽油回色现象突出，经研究可能与存储前的油中的棉酚含量有关。
（三）毒素的产生
酸败的油脂不仅气味难闻，而且酸败程度深的油脂还会产生毒素，甚至导致食用中毒，该毒素的本质已有定论，主要是油脂与空气中的氧气作用产生的过氧化物。
二、影响油脂安全储存的因素
油脂能否安全储存，与环境条件密切相关。环境条件适宜，油脂可以较长期的安全储存，环境条件不适宜，油脂就容易氧化分解，酸败变质，不能安全储存，通常影响油脂安全储存的因素有以下几种。
（一）脂肪酸组成及其分布
油脂的氧化不仅与脂肪酸组成、碳链的长短、不饱和程度有关，而且与脂肪酸在甘油基上的位置分布有关。脂肪酸的碳链越短，不饱和程度越高越容易氧化；不饱和脂肪酸位于甘油基a位置时，活度越高，越容易氧化，稳定性越差。
（二）天然抗氧化剂
所有的天然植物油都含有特有的抗氧化剂，即天然抗氧化剂，其在油脂中的含量高，油脂的氧化诱导期长，稳定性好。一般来说，植物油脂的不饱和程度比动物油脂高，但其稳定性反而比动物油脂高，就是因为植物油脂中普遍存在的微量的天然抗氧化剂。在高度精炼的油脂成品中必须加入抗氧化剂和增效剂，并且安全储存保证油脂成品的安全性。
（三）温度
温度升高，可以加速油脂氧化反应，增强脂肪酸的活性，促进微生物的生长发育，并且分泌蛋白质、解脂酶，使油脂中的不饱和脂肪酸加速氧化分解，酸败变质，在60-100度的范围内，一般每升高10度，油脂的酸败速度约增加一倍。相反的，降低温度则能终止或延缓油脂的酸败程度，提高储存的稳定性。
（四）水分
水分不仅会使油脂水解作用加强，游离脂肪酸增加，还会增加酶的活性，有利于微生物生长发育。因此，油脂中水分含量多，就容易促使油脂水解酸败。一般认为，油脂中含水超过0.2%，水解作用就会加强，含水量越高，水解速度就会越快，油脂就会迅速酸败变质，失去使用价值。由此可见，油脂中的含水量是引起油脂酸败的重要因素。
（五）光和射线
光线能激发油脂中的光敏物质，引起油脂的氧化反应，特别是日光中的紫外光，具有较高的能量，有利于氧的活化，能促使油脂氧化变质，光线对油脂的促氧化作用随光波特征有所差异，波长短能量高的光线促氧化能力尤甚。与此同时，在日光的照射下，油脂中的维生素E受到破坏，抗氧化能力减弱，因此也会加快油脂氧化酸败的速度。为延缓油脂氧化，必须降低阳光的照射。
（六）氧气
空气中的氧气是引起油脂氧化变质（自动氧化）的主要因素。油脂氧化变质的速度与氧的浓度，接触空气表面积的大小，时间的长短和油脂的组分有关；反之，装入密闭容器或储存于惰性气体中的油脂，则能有效的提高其储存稳定性。因此，油脂应该密闭储存，有条件的应充填惰性气体，或者油罐应尽量装满，减少油脂与氧气的接触机会。
（七）催化剂
微量金属能促使油脂氧化。由于他们的存在，大大缩短了油脂氧化的诱导期，加快了氧化反应的速度。油脂中的铜和铁的含量分别达到0.01mg/kg 和0.1mg/kg时，即可引起油脂的劣变。应注意在精炼过程中除去金属离子。另外，在氢化过程中的使用的金属催化剂（尤其是铜和镍）也会进入油脂，要引起我们的高度重视。
某些金属有机化学物也能促进油脂的自动氧化，例如叶绿素。动植物细胞中的脂肪氧化酶，也是油脂生物化学氧化的催化剂，大豆中这种酶含量高。
（八）包装材料
包装材料对食用油脂的影响，一点也不亚于光和热等多种因素。如包装材料的遮光性、透气性和耐油性都与油脂的稳定性有密切的关系。包装材料的透气性尤其是透氧气的性能，是影响油脂安全储存的主要因素之一。包装材料的透光性直接影响油脂的接收光线的强度和频率，从而影响油脂的储存的稳定性。包装油脂材料与油脂接触，其本身不得含有促进氧化的成分。
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三磷酸甘油脱氢酶基因和甘油代谢对拟南芥种子含油量与根系发育的影响
【摘要】：种子含油量是油料作物研究的主要性状之一。三酰甘油是油料作物种子中贮藏性油脂的主要形式。三酰甘油由三磷酸甘油作为骨架逐步与三个脂肪酸分子结合而成。前人对含油量的调控研究主要集中在参与脂肪酸合成与利用途径中的有关基因,而很少有三磷酸甘油对种子油份积累的报道。三磷酸甘油在植物细胞中主要由两条路径产生,其一,甘油激酶磷酸化甘油产生三磷酸甘油；其二,三磷酸甘油脱氢酶将磷酸二羟丙酮加氢还原生成三磷酸甘油。近期研究表明,在种子中过表达酵母三磷酸甘油脱氢酶基因能提高油菜种子含油量。甘油广泛存在于微生物,动物和植物中。甘油代谢有关机制相对保守,其在微生物和藻类等已有较多报道,但在高等植物中有关甘油代谢对植物生长发育影响的报道较少。根系是高等植物的重要器官,也是植物发育生物学研究的模式器官之一。利用拟南芥研究甘油对植物根系生长发育将有助于甘油代谢机理的全面认识。
本研究包括两方面的内容：第一部分是过表达甘蓝型油菜三磷酸甘油脱氢酶基因对种子油份积累等性状的影响；第二部分是利用甘油代谢相关突变体与三磷酸甘油脱氢酶过表达材料比较外源甘油对拟南芥根系发育的影响,主要结果如下：
1、利用同源基因克隆法获得了甘蓝型油菜两个GPDH基因。Southern Blot分析油菜BnGPDHp1克隆片段在甘蓝、白菜和甘蓝型油菜中的基因拷贝数分别为2个、2个和4个。氨基酸序列对比发现,BnGPDHs含有三磷酸甘油脱氢酶两个典型的结构域,且与甘蓝、白菜及拟南芥GPDHs基因氨基酸序列有高度同源性。生物信息软件预测克隆片段BnGPDHp1与BnGPDHc1分别定位于质体与胞质中。
2、基因表达分析显示BnGPDHs在花、蕾中表达量较高,在根和茎中表达量较低,在发育的种子中均有表达。过表达BnGPDHp1转化大肠杆菌甘油营养缺陷型菌株后重组菌系能在缺甘油的基础培养基上生长。
3、构建BnGPDHs过表达载体并转化拟南芥,对转化家系进行插入拷贝数分析与目的基因表达分析,选取其中5个家系进行表型分析。发现多数过表达家系在种子重量、种子含油量同野生型比较时增加差异并不明显。构建Dsred-BnGPDHp1种子特异性过表达建构转化拟南芥,选取转基因后代阳性和非阳性种子进行比较,发现过表达家系在种子重量、种子含油量同非阳性对照比较无明显差异。对过表达家系与对照在不同胁迫条件下处理后的鲜重和种子萌发率进行比较,显示过表达BnGPDHp1增强了植物抗盐胁迫能力。
4、鉴定了两个甘油代谢有关纯合突变体gpdhp1,gpdhc1,并利用这些突变体获得了双突变体gpdhc1gpdhp。 RNA表达分析显示目的基因在相应材料中均被敲除。种子重量比较发现,突变体gpdhc1比野生型要高,gpdhp1与野生型差异不显著,双突变体gpdhc1gpdhp1显著下降。种子含油量比较发现,突变体gpdhp1比野生型要高,gpdhc1与野生型差异不显著,双突变体gpdhc1gpdhp1与无明显差异。单粒种子油份比较发现,两个单突变体比野生型显著增加,但是双突变体无明显差异。
5、在梯度甘油条件下处理拟南芥幼苗,发现随着甘油浓度增加拟南芥根长生长逐渐受抑制。1mM甘油浓度以上根长抑制明显,且侧根数目显著增加。在1mM甘油处理下甘油激酶突变体∥i1根系变化不明显,三磷酸甘油脱氢酶突变体gpdhc1和fad-gpdh的根长减少程度比野生型更明显。过表达FAD-GPDH家系在甘油处理下根长不变或略有减少。
6、上述根系生长变化的表型同时伴随着体内三磷酸甘油含量上升与无机磷含量下降。甘油处理下突变体∥i1三磷酸甘油与无机磷含量没有变化。三磷酸含量升高引发野生型、gpdhc1和fad-gpdh突变体幼苗中的过氧化氢含量增加。过表达FAD-GPDH消除了处理下三磷酸甘油、无机磷含量和过氧化氢含量的变化,导致过表达植物对外源甘油耐受能力增强。这些结果说明甘油造成的根系生长变化与三磷酸甘油、磷和过氧化氢含量的改变有关,也说明FAD-GPDH基因在调控甘油代谢中发挥着重要作用。
7、甘油处理下游离IAA含量增加46%, DR5pro::GUS在根分生区的中柱细胞着色增强,PLN1和PLN7基因表达降低,PIN7::GUS染色和PIN7pro::PIN7-GFP荧光在处理下减弱,显示甘油处理下根中极性生长素转运下调。对生长素相关突变体分析显示TIRl和ARF7调节甘油处理下根的生长。
8、甘油条件下拟南芥根分生区长度和细胞数目减少,CYCB1;1pro::GUS着色的细胞数目减少。而且处理下幼根中CDKA和CYCB1基因表达显著降低,暗示甘油处理下细胞周期进程发生变化。
【学位授予单位】：华中农业大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2013【分类号】：Q946
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