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SLC3A2慢病毒载体的构建及其转染精子细胞的研究
【摘要】：背景及其目的：精子载体法自运用于制备转基因动物以来，它具有操作简单和费用较少的特点；精子自发吸收外源DNA的天然特点，能使外源基因保持较好的完整性。慢病毒载体利用病毒能将基因整合进宿主细胞基因组，并能稳定遗传的特点，使之成为制备转基因动物的主要工具之一。将精子与慢病毒载体共同孵育，探讨外源基因带入精子细胞的效率，优化筛选出最佳条件，为制备转基因小型猪动物模型奠定基础，为相关研究参考依据。
方法:1）利用基因工程技术将目的基因SLC3A2序列片段连接到LV5载体上，构建其基因重组载体，然后进行病毒包装，最后用荧光定量PCR进行病毒滴度的测定。2）将含基因SLC3A2慢病毒载体与精子细胞在不同条件下进行孵育。1、不同浓度的（104IU/ml，105IU/ml，106IU/ml）慢病毒载体与精子细胞孵育；2、慢病毒载体与精子分别孵育不同时间（1h，2h，3h，4h）；3、慢病毒载体与精子分别在不同温度（17℃，25℃，37℃）下孵育；4、不同浓度（0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，15μg/mL）的Polybrene与慢病毒载体和精子孵育。3）利用免疫荧光法和半定量PCR法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的转入外源基因的效率；4）用镜检法检测在不同条件下，慢病毒载体与精子孵育的精子细胞活力。
结果：1)构建了LV5-SLC3A2重组载体，通过酶切鉴定和测序报告判定载体构建成功。2）测定的慢病毒载体的平均滴度为2.03×108IU/ml。3）经过PCR和免疫荧光法检测后发现：SLC3A2在105IU/ml，106IU/ml条件下的水平较高；在孵育2小时后SLC3A2均有表达；SLC3A2在不同温度下均有表达；慢病毒载体和精子细胞与10μg/mL和15μg/mL的Polybrene孵育后，SLC3A2的水平最高。4）3h，4h组精子细胞活力显著低于1h组；17℃组的精子活力较高；15μg/mL的Polybrene和106IU/ml组的精子活力较低。
结论：1）成功构建了SLC3A2慢病毒载体。2）精子细胞和105IU/ml慢病毒载体在17℃条件下，与10μg/mL的Polybrene共孵育2h时，外源基因SLC3A2转导效率最佳。
【学位授予单位】：南华大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R392
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张丽梅;冯龙;张艳敏;马晶;赵国强;安玉会;鲍玉洲;;[J];郑州大学学报(医学版);2010年04期
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教育史与教育改革：近十年的英国史学研宽
张振华1编译
(南京师范大学教育科学学院教育史专业)
起初在评论美国和德国教育史时，KonradJaraush遗憾地认为“教育新史学”的“最初的兴奋”
已经减退；教育也不再处于社会史或文化史讨论的最前沿了。他的这种看法是建立在对其描述的各种趋
势的一种假定的一致性上吗?Jarausch认为。“新史学”的特征为：首先，彻底地批判盛行的辉格党的传
统；其次，研究重点由教育思想转移到社会环境；第三，采纳社会科学的研究技术和量化的分析方法，
尽管要求一场统一的运动有点不自然，但所有这三个特征都为英国教育史研究的发展做出了重大贡献。
然而，在英国教育史中，反映公共机构之基础结构的各种趋势已经出现倪端。教育史研究的重点和研究
方法的变革要考虑教育史研究与公共机构研究环境的关系，以及当代教育政治广阔的背景。
研究特征及基础结构
与美国及其250，000，000人口相比，英国仅是它的五分之一，从数量上讲，美国应该有更多的历
史来供研究，有更多的历史学家去研究它，如此陈腐的论调一定与两国的教育史研究成果的比较有一定
相关性。另外，历史有其深度和广度；现存的关于英国早期教育的资料很全面，并正处于(不仅仅是英
国历史学家的)研究之列。尽管中世纪与近代初期已经展开了激烈的史学争论，例如在关于爱德华时代
的文法学校或关于慈善学校运动的程度及贡献方面，然而(自工业革命以来)在研究的著作数量成为有
史以来最丰富的那些领域中，方法论和阐释的重大改变是最为明显的。那就是工业革命以来，在各个国
家中，影响研究成果的因素包括经济及政治环境，高等教育结构，尤其是师范教育结构。下面的论述反
映了在近年教育史研究成果中的差异性因素的整体状况。
教育史的日程是如何显现的?是进步史学家与修正主义史学家之间的首要分歧(或许已到僵持的局
面)，为美国教育史提供参照体系。这样的情况在英国并不普遍。在这里争论双方并非严格意义上不分
胜负，许多英国教育史学家已从那场特殊的争论中走出来。Jarausch承认，新教育史学的胜利从来没有
如某些人所希望的那么彻底。在谈到那些在他们喜爱的领域内，使用仅仅稍微改变的术语继续写作的“老
学究们”他简单地认为，与在史学中一样普遍，变化通常是循序渐进的而非一蹴而就的，正如人类行为的
其他方面一样，连续性是学术研究的特征，教育史在面对新挑战时，采纳了20世纪60年代后期泛滥于
艺术、文学界及社会科学界的新视角，从此角度来讲，教育史是更广阔的社会文化史的一部分，然而，
也不能完全不考虑70、80年代教育史方面的突出贡献，或许继续讨论传统话题，或采用以前的方法论。
Jar跏sch所描绘的德国史学使由Marc
Dipa印e所勾画出的德国教育史学家关于illco吼仃y
scien6fictllewreticalof
势方面的例子，很明显这有许多的焦点和观点，却很少有致力于纯理论的争论。这并不否认诸如
Hobsbawm和Edward
nompason这样社会政治史学家的巨大影响力，在美国社会史界也不否认，接踵
而来的经验论者与理论家之间激烈的对抗；而是为了准确地理解这些争论在教育史内的影响如何，需要
一些对基础结构的了解，尤其教育史学家和社会史学家迥然不同的社会背景。社会史学家越来越关心
教育作为文化再生产机构或社会控制机构的作用，但是许多教育史学家却负责师范教育和师资培训，扎
根于教师智力和机构事务的研究。这里两个平行的研究部分在许多观点上是重叠的。投有出现精确的模
式，但是要承认理论成见的差异，在教师的专业结构中，在教育供给和教育实践中的当务之急经常影响
到教育日程。英国近十年的教育史学，不能通过各种不同的方法论来理论，更要理解为对一种日程的反
映。这种日程植根于教育社会政治背景。教育史是一幅多样性的蓝图，而非是一种“新”、“旧”解释。
以下内容将证实任何一种关于社会史学家与教育史学家之间的明显界限都是虚假的。
教育者与教育史
教育史与教育理论从19世纪后期以来，已成为教师培训的一个必不可少的组成部分。20世纪60
1张振华，女1981年出生，河南省安阳人。本科就读于吉林大学，南京师范大学在
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人KMT3a复合物的纯化和功能分析Purification and Functional Analysis of Human KMT3a Complex.pdf 49页
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人KMT3a复合物的纯化和功能分析Purification and Functional Analysis of Human KMT3a Complex
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北京协和医学院
硕士学位论文
人KMT3a复合物的纯化和功能分析
姓名：谢精卫
申请学位级别：硕士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：朱冰
真核生物中，DNA的转录发生在染色质模板上。染色质的基本单位是由DNA缠
绕组蛋白八聚体组成的核小体。核小体及其共价修饰能影响所在DNA的转录。组蛋
L)的鉴定。有趣的是，KMT3a在体外单独具有组蛋白甲基化酶的能
ribonucleoprotein
力，但是HnRNP．L在体内有重要作用。而且，虽然KMT3a在体外可以产生单、二和
化水平的整体下降，而不影响其它的修饰水平。
关键词：KMT3a复合物，HnRNP．L，三甲基化H3K36
ofDNAtakes inchromatin
eukaryotes，transcriptionplace
mostbasicstructuralunitof
ofhistoneoctamerswithDNA
chromatin，consisting
around．Nucleosomesseandmodificationsonaffect
initiation
transcription
ofhistoneH3
elongation．Thepresence
transcribed
H3K36memediated
genes．Inyeast，histone
byKMT3(also
Set2)recruits
deacetylasecomplex，Rpd3
initiation．Wethe
knownasHYPB
transcription reportpurificationKMT3a(also
andtheidentificationofa
hSet2)complex
novel，highereukaryoticspecific
heterogeneousribonucleoprotein
intrinsicin
vitro，HnRNP-L vivo．Moreover,KMT3mono一，
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