线粒体电镜图片.doc
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京网文[0号 京ICP证100780号[线粒体的活体染色及电镜照片观察实验]&一、兔肝细胞线粒体的活体染色&（一）原理&线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生&[线粒体&电镜&观察&照片&线粒体&细胞&组织]
一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）原理 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 （二）方法 用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。 将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 (三)结果 显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。 二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 三．线粒体的电镜照片观察 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长轴垂直排列，肾小管上皮细胞重吸收作用需要能量，线粒体数目多。第二张是恒河猴脊髓突触内线粒体。可见线粒体体积小、数目多，脊与线粒体呈同心圆排列。第三张是小鼠睾丸间质细胞线粒体，线粒体的脊为分支的管，在照片上呈单层膜泡状。
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线粒体的形态结构［细胞生物学］
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　　■ 线粒体的形态和分布
　　● 大小：
　　线粒体的形状多种多样， 一般呈线状（图7-2），也有粒状或短线状。
图7-2 电子显微镜观察的蝙蝠胰腺细胞线粒体
　　● 数量：
　　在不同类型的细胞中线粒体的数目相差很大， 但在同一类型的细胞中数目相对稳定。有些细胞中只有一个线粒体，有些则有几十、几百、甚至几千个线粒体。
　　● 分布
　　在多数细胞中，线粒体均匀分布在整个细胞质中，但在某些些细胞中，线粒体的分布是不均一的。
　　线粒体较多分布在需要ATP的部位（如肌细胞和精细胞， 图7-3）；或较为集中分布在有较多氧化反应底物的区域，如脂肪滴（图7-4），因为脂肪滴中有许多要被氧化的脂肪。
图 7-3 肌细胞和精子的尾部聚集较多的线粒体， 以提供能量
图7-4 线粒体包围着脂肪滴，内有大量要被氧化的脂肪
　　● 存在方式
　　线粒体在细胞中并非都是单个存在的，有时可形成由几个线粒体构成的网络结构，有些线粒体具有分支，可以相互交错在一起。如通过相差显微镜检查完整的肝细胞，发现线粒体并非是单个存在的，而是以交织的网络状态存在（图7-5）。
图7-5 细胞中线粒体分支交织连接而成的网状二维结构
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