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应用荧光原位杂交技术诊断羊水细胞染色体异常
中华妇产科杂志 1999年第3期第0卷 论　著
作者：黄艳仪　孙筱放　黎青　麦卫阳　郑育红　陈元本
单位：510150 广州市第二人民医院妇产科
关键词：原位杂交；荧光；染色体异常；产前诊断；羊水
　　【摘要】　目的　探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)于产前诊断羊水细胞染色体异常的实验方法及应用价值。方法　对34例孕16～23周有产前诊断指征者经腹部抽取羊水，用Chang培养液传代培养，常规制备羊水细胞分裂中期染色体，应用生物素及地高辛标记的人类全着丝粒探针和X、Y、13、21、18号染色体α-着丝粒探针及染色体全涂染探针，与培养的羊水细胞分裂中期染色体DNA进行原位杂交，杂交后用荧光显微镜观察玻片并摄像。结果　34例产前诊断者其羊水细胞分裂中期染色体的核型种类有正常核型46，XX 15例，46，XY 16例，异常核型有47，XY+21、47，XY+18、45，X/46，X，r(X)各1例。3例异常核型治疗性流产后取脐血，25例正常核型追踪至足月分娩时取脐血采用FISH及G带染色体检查证实，与产前羊水细胞染色体检查相符。　结论FISH用于羊水细胞染色体产前诊断具有快速、准确等优点，特别对染色体结构异常与来源不明的标记染色体诊断，具有更高的敏感性和可靠性。
　　Application of Fluorescence Insitu Hybridization Technique for Prenatal Diagnosis of Chromosome Abnormality in Amniotic Cells　HUANG Yanyi, SUN Xiaofang, LI Qing, et al. Second Municipal People's Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510150
　　【Abstract】　Objective　To study the technique and diagnostic value of fluorescence insitu hybridization (FISH) in chromosome abnormality for prenatal diagnosis.Methods　Amniocenteses were performed in 34 pregnant women of 16～23 gestational weeks with indications for prenatal diagnosis. The amniotic fluid samples were cultured in Chang's medium. The metaphase chromosomes were hybridized insitu with the human centromere probes, α-satellites DNA probes of X, Y,13, 21, 18 chromosomes and all primer chromosome probes. These probes were conjugated by Biotin and Dioxin then. The treated slides were examined and taken photos under the fluoromicroscope.Results　By FISH technique, normal karyotypes were shown in 31 cases: 16 cases of 46, XY, 15 cases of 46, XX. Abnormalities were found in 3 patients which were 47, XY+21; 47, XY+18 and 45, X/46, X,r (X)respectively.Conclusion　Using FISH technique to detect chromosome abnormalities in amniotic fluid for prenatal diagnosis is a reliable method which is rapid and accurate. It has higher sensitivity and specificity in finding chromosome structure abnormalities and marking chromosome DNA sequences.
　　【Key words】　In situ hybridization, fluorescence 　　Chromosome abnormalities 　　Prenatal diagnosis　　Amniotic fluid
　　荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是分子杂交与组织化学相结合的一项新技术，近年来用于人类染色体分析，它能快速、准确地确定在传统方法中无法判别的染色体异常，特别对来源不明的标记染色体(marker chromosome)能作出正确诊断［1，2］。有作者应用FISH方法分析绒毛间期细胞染色体，虽具有快速的优点，但其只能分析染色体数目异常，不能分析结构异常，不能准确诊断胎儿染色体核型，且受杂交率限制，有一定的局限性。我们通过提高羊水细胞培养和制片技术，采用Chang培养基，通过传代培养，获得数量较多的羊水细胞分裂中期相，成功地将FISH技术用于羊水细胞分裂中期染色体诊断。现报道如下。
　　资料与方法
　　一、资料来源
　　1.研究对象：选择1996年1月至1998年1月，在我院优生门诊需进行产前诊断者34例。年龄25～43岁，孕周16～23周。产前诊断指征包括孕妇年龄≥35岁16例；不良分娩史11例；围产期感染2例；B超发现胎儿畸型2例；孕妇或其丈夫为染色体平衡易位2例；接受X线照射1例。
　　2.羊水采集：在B超腹部穿刺探头引导下，用20G腹部穿刺针抽取羊水20 ml，置无菌试管中待检。
　　二、实验方法
　　1.羊水细胞培养及收获：取20 ml羊水离心，取沉淀物0.5 ml加入4.5 ml张氏培养液，在培养瓶内混匀，放入37℃， 5% CO2培养箱内培养，5天后隔天观察换液，10～12天传代培养，用EDTA胰酶洗脱细胞后再加入培养液培养过夜，按常规收获细胞。羊水细胞G带染色体制备按常规进行。
　　2.羊水细胞FISH检测：常规滴片，放入2倍氯化钠，柠檬酸钠溶液(SSC)中37℃30分钟，再分别放入70%、90%、100%冰乙醇中各2分钟。70%甲酰胺(pH 7.0)(72±2)℃ 2分钟。然后再分别放入70%、90%、100%冰乙醇中各2分钟。将变性的探针涂到玻片上，加盖玻片，周围封胶，37℃过夜。然后在50%甲酰胺/2倍SSC液中(37℃)浸泡2次，各5分钟；2倍SSC液中2次，各5分钟，磷酸缓冲液(PBS)中1次5分钟，放入地高辛标记的荧光素50 μl，37℃，5分钟，PBD 5分钟2次。兔抗血清50 μl， 37℃ 15分钟，PBD 5分钟2次。荧光标记的抗兔血清50 μl， 15分钟，37℃ PBD 5分钟2次。加碘化丙啶15 μl于玻片上，加盖玻片，于BX 60荧光显微镜下观察并摄片。
　　3.探针选择：每例分别用人类全着丝粒探针及X、Y、13、21、18号染色体着丝粒探针进行FISH，1例18，三体选用18号染色体全涂染探针，1例拟诊X染色体异常者选用X染色体全涂染探针杂交。
　　结　果
　　一、羊水细胞染色体检测结果
　　34例产前诊断者羊水细胞染色体检测，正常核型31例，其中46，XX 15例、46，XY 16例；异常核型3例，其中有47，XY+21、47，XY+18各1例；1例羊水细胞染色体G带分析为45，X/46，X，mar标记染色体，来源不明，经FISH证实为45，X/46，X,r(X)，mar为X环形染色体。见表1。羊水细胞染色体FISH正确杂交率在96%以上。
表1　3例孕妇羊水细胞染色体异常标本的FISH结果
　临床诊断
45，X/46，X,r(X)
45，X/46，X，r(X)嵌合体
　　1例孕20周，将分裂中期羊水细胞染色体用人类全染色体着丝粒探针杂交，见染色体总数47条，用21、13、18、X、Y着丝粒探针杂交，见21、13号染色体各有2点发黄光。18号染色体有3点发黄光。X、Y染色体各有1点发黄光。证实为47，XY+18。再用18号染色体全涂染探针杂交，见3条18号染色体全部发黄光，证实为18，三体。
　　1例常规羊水细胞染色体G带分析见45，X/46，X，mar标记染色体，未能明确辨认。应用FISH在染色体分裂中期，用21、13、18、X、Y着丝粒探针杂交，见mar染色体是X环形染色体，发黄光，证实是46，X，r(X)，此标记染色体是X环形染色体。患者是45，X/46，X，r(X)嵌合体。
　　二、临床追踪结果
　　对产前羊水细胞染色体异常的3例行治疗性流产，胎儿娩出后取脐血染色体G带行FISH检测，与产前诊断相符。产前羊水细胞染色体正常者追踪其新生儿25例，取脐血行染色体G带及FISH检测，其核型与产前诊断全部相符，临床符合率为100%。
　　讨　论
　　FISH是利用已知碱基序列的非同位素标记的核酸探针，依据碱基互补配对原理，通过荧光亲和素免疫组化检测体系，在组织切片、细胞间期核及染色体等标本上，对待测核酸进行定性、定位及相对定量分析的一种方法。是分子杂交与组织化学相结合的一项新技术。近年来，用于人类染色体分析，是细胞遗传学与分子生物学相结合的一大进展，能够快速、准确地确定在传统细胞学中无法判别的染色体异常病例，是目前国内外细胞遗传学研究的热点［1，2］。本研究分析了34例应用羊水细胞染色体FISH技术行染色体异常的产前诊断结果。因新生儿最常见的染色体异常是21、13、18号染色体的三体和X染色体单体和其他性染色体的非整倍体［2］，我们选用人类全染色体着丝粒探针和特异性较强的21、13、18、X、Y染色体着丝粒探针与染色体全涂染探针对34例产前诊断者孕中期羊水细胞染色体行FISH，发现3例异常的染色体病例，包括47，XY+18、47，XY+21、45，X/46，X，r(X)。羊水细胞分裂中期染色体FISH比常规G带分析更准确，可确定在传统细胞学中无法判读的染色体异常病例。本研究对1例常规G带分析为45，X/46，X，mar的病例，用生物素标记的X着丝粒探针与羊水细胞分裂中期染色体DNA FISH杂交，确定了标记染色体mar的来源是X环形染色体。应用羊水细胞分裂中期染色体FISH技术进行产前诊断，提高了羊水细胞产前诊断的准确率。尤其对微小标记染色体、染色体的微小相互易位具有高度敏感性和可靠性［2］。
　　参考文献
　　1　向阳，Thue B, John P, 等.荧光原位杂交法快速诊断早孕期常见染色体数目畸变.中国医学科学院学报，0-124.
　　2　Schubert R,Raff R, Schwanitz G. Molecular-cytogenetic investigations of ten term placentae in cases of prenatally diagnosed mosaicism. Prenat Diagn, -913.
(收稿：　　修回：)
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47XY22和46XX21ter rea2121两例染色体异常
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47XY22和46XX21ter rea2121两例染色体异常
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47xy+mar属于染色体异常疾病吗
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这个帖子发布于3年零9天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是儿童康复的医生，现在有一病人，9月大的男孩，运动、智力较同龄儿童落后，予康复治疗2个月左右，没有多大进步。近期其家属提供院外染色体检查结果：47xy,+mar,不知是否与此染色体异常有关。
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致病可能性很大，具体得看mar是什么，做个arrayCGH，此外父母的核型也要分析。
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需要确定marker的来源以对症治疗芯片+FISH是最好的检测及确认方式
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jiraiye 致病可能性很大，具体得看mar是什么，做个arrayCGH，此外父母的核型也要分析。请问 arrayCGH是什么检查？因为没遇见过，不懂是什么检查，也不知道我们这里的第三方检验机构有没有这个检查。所得的结果应该怎么分析，还有父母的核型分析对目前的结果有什么意义，是不是如果这个mar是父母遗传的就没问题，不是遗传的话就有问题？
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Davidzjy 需要确定marker的来源以对症治疗芯片+FISH是最好的检测及确认方式芯片+FISH的检查是二楼所提到的检查吗？如果不是的话二者有什么区别？这个检查就能明确这个mar是不是致病基因了吗？
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二楼提到的"arrayCGH"就是我所说的芯片具体的原理应该好找 我就不细说了芯片报告出来后 根据其结果进行对应的FISH验证这样基本就可以明确marker的来源了
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建议芯片检查。
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1. 标记染色体是否致病取决于其是否含常染色质。2. 如果是遗传性，则此标记染色体不是致病的染色体。3. 如果是新发，则可能致病，具体是何片段做个芯片就知道了。
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补充一下，如果是遗传Marker，则此 marker与表型不相关，仍然建议做芯片寻找病因。
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关于丁香园染色体报告单
所分析细胞均为：46,XY,N[20]
结论：正....
染色体报告单
所分析细胞均为：46,X...
病情描述（发病时间、主要症状、症状变化等）：染色体报告单
所分析细胞均为：46,XY,N[20]
结论：正常核型想得到怎样的帮助：这是什么意思啊？
医院出诊医生
擅长：小儿内科
擅长：外科
共1条医生回复
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指导意见：你上传一下我们才能看到啊，请您上传您的报告单，及要解决等问题，以便我们能及时帮到您哦。
请问我这报告正常吗？？
图片只有提问者本人和回复医生可以看到
回复：结论：正常核型。没事啊！
问染色体报告单怎么看
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指导意见：妇女正常怀孕后,由于生理上的需要,宜吃一些高蛋白、多维生素、多纤维素和低盐食品,忌吃高脂肪和过咸食品；宜吃易消化的丰富多汁食品,忌吃生冷、性寒食物；宜吃新鲜瓜果蔬菜,忌吃辛辣刺激的tgy 、或腥膻异味、或油腻黏糯、或炒爆性热、助火伤阴的食品,忌吃烟酒,尤其是烈性白酒。
问染色体核型分析，谢谢求解
职称：医师
专长：小儿哮喘、儿童血液、免疫性疾病
&&已帮助用户：207012
病情分析：这个胎儿虽然染色体存在异常，但有可能是表型正常的。就是说外表智力都有可能正常。意见建议：平时注意保持心情舒畅，辛辣刺激食物少吃，多吃蔬菜水果，适当锻炼，早日康复。
问染色体核型分析是什么意思？
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专长：颈椎腰腿痛疾病、中风、面瘫、失眠、偏头痛、顽固性呃逆、痛经、胃痛、便秘、耳鸣耳聋、牙痛等
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病情分析： 你好，看你说的这个情况的情况，那这时看是患了白血病方面的病情的，而染色体核型分析主要看身体内基因方面的，那目前在治疗白血病时，还是应该要进行化疗为主的意见建议：只是因为化疗的副作用较大，对身体上有一定的伤害，那最好是能在化疗期间结合上中医来同时治疗效果会非常好的
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指导意见：你好一般的染色体的异常和遗传有关系 是和你的上一代有关系 同时也有可能是经常的在怀胎的时候后较强的辐射等造成的
问染色体核型45，X[6]/47,XXX[4]/46，XX[70]
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问骨髓染色体核型检测报告46，XX[7]是什么意思
职称：医生会员
专长：荨麻疹,脂溢性皮炎,脂溢性脱发
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问题分析：你好分析细胞30个，核型为46，XX，这个检查结果考虑染色体是正常的，不能说明问题，可以正常受孕的意见建议：具体请就诊后谨遵医嘱进行治疗，不要擅自服药 ，祝健康.
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