704；微生物学通报Microbiol.China201；(Amp++Kan+)，30°C培养，利用鉴定引；粒pULM中引入如下功能单元：(1)Lox66/；以质粒pULM为模板对pgi基因(6-磷酸果糖异；1.8卡那霉素抗性基因的去除；将质粒pSCre转化以上获得的卡那霉素抗性的；菌种，涂布LB平板(Str+)，30°C培养过夜；2结果与分析；2.1Cre
微生物学通报 Microbiol. China 2015, Vol.42, No.4
(Amp++Kan+)，30 °C培养，利用鉴定引物PCR扩增方法鉴定是否整合，挑选阳性克隆。将阳性菌种置于LB液体培养基(Kan+) 42 °C培养，以去除质粒pKD46，然后划线LB平板(Kan+)，对所得的单菌落进行氨苄青霉素敏感型检测，对氨苄青霉素敏感的菌种即为去除了质粒pKD46的菌种。
粒pULM中引入如下功能单元：(1) Lox66/Lox71序列作为抗性标记基因的消除位点。Lox66和Lox71在Cre重组酶的作用下发生重组并消除抗性基因。形成的Lox72序列很难被Cre酶进一步作用，从而能够在后续的多基因连续敲除或整合时保持染色体的稳定[20]。(2) 在Lox66及Lox71两个位点的外侧分别引入两个多克隆位点MCS1和MCS2，从而可以通过限制酶连接或其他方法方便地实现基因拼接(图2)。
以质粒pULM为模板对pgi基因(6-磷酸果糖异构酶)进行敲除。打靶片段采用琼脂糖凝胶电泳纯化和PCR产物纯化两种纯化方式，并经DpnⅠ酶处理。结果显示，经琼脂糖凝胶电泳与PCR产物纯化的DNA片段均有约103/50 μL感受态细胞的克隆，分别随机挑选20个克隆，用鉴定引物pgi-A2与K1对pgi基因敲除菌种进行鉴定。结果表明：经PCR产物纯化的DNA片段全部为假阳性(阳性率为0， 图3A)，而经琼脂糖凝胶电泳回收的DNA片段，有2个克隆的基因扩增条带大小为600 bp，与实际大小一致，为成功敲除的阳性克隆(图3B)。经提取
卡那霉素抗性基因的去除
将质粒pSCre转化以上获得的卡那霉素抗性的
菌种，涂布LB平板(Str+)，30 °C培养过夜，表达的Cre酶识别LoxP位点将卡那霉素抗性去除。从平板挑选克隆于LB液体培养基(Str+) 30 °C培养，利用0.2% L-阿拉伯糖进行诱导Cre酶表达，通过鉴定引物进行PCR扩增鉴定抗性基因是否去除，将阳性菌种置于42 °C培养，以去除质粒pSCre，然后划线无抗LB平板，对所得的单菌落进行卡那霉素敏感型检测及PCR性状验证。
结果与分析
Cre-LoxP-MCS (CLM)系统的构建和检测
为了构建一种有利于基因整合操作，并能够实
现多基因的连续敲除或整合的模板质粒，在模板质
模板质粒pULM及多克隆位点示意图
Map of template plasmid pULM and cloning regions
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王瑶等: 在大肠杆菌中利用SCLM系统进行高效率λ-Red基因敲除/整合的新策略
菌落PCR对pgi基因敲除菌种的鉴定
PCR identification of recombinants of pgi gene knock-out
注：A：打靶片段通过PCR产物纯化试剂盒纯化；B：打靶片段通过琼脂糖凝胶电泳纯化. M：DNA marker；1：阳性对照；2C11：随机挑选的重组子.
Note: A: DNA fragment used for knocking out the pgi gene was purified by cycle- B: DNA fragment used for knocking out the pgi gene was purified by gel extraction kit. M: DNA 1: P 2C11: Recombinants.
质粒鉴定，假阳性均为模板质粒转入引起。而通过延长DpnⅠ的处理时间，能够一定程度上消除假阳性(琼脂糖凝胶电泳纯化后处理超过16 h，16阳
性/20克隆，阳性率为80%)。
将pSCre质粒转入pKD46消除的敲除菌株用于消除抗性基因，利用引物pgi-A1与pgi-A2对抗性基因消除菌种进行验证。由于含有卡那霉素抗性基因，因此扩增条带大小为2 024 bp (图4，泳道1)，消除卡那霉素抗性基因后，条带大小为600 bp (图4，泳道2C11)，条带大小与实际一致，表明卡那霉素抗性基因已被Cre酶的作用去除。
同时构建了多克隆位点也便于基因整合的分子操作。但操作过程中存在较多的假阳性，还无法实现高效率的敲除/整合。为了解决模板质粒造成的假阳性问题，构建了质粒pCLM。将1 ng的pCLM质粒分别电转化BW25113和BW25113 (pKD46)，取1/10体积的复苏细胞涂布具有相应抗性的平板。结果表明，pULM质粒转化BW25113 (pKD46)的转化子数(Kan++Amp+平板)约为104/ng DNA (图5A)，pCLM质粒转化BW25113的转化子数量约为5×103/ng DNA (Kan+平板)(图5B)，而转化BW25113 (pKD46)菌株时无转化子(Kan++Amp+平板)(图5C)。以上结果证明由于质粒的不相容性，采用同样pSC101衍生的复制起始位点的策略能够有效消除模板质粒转入BW25113 (pKD46)。
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SC101-Cre-LoxP-MCS (SCLM)系统的构建
基于质粒pULM和pSCre的Cre-LoxP-MCS系统能够成功实现大肠杆菌基因的敲除和抗性消除，
微生物学通报 Microbiol. China
2015, Vol.42, No.4
菌落PCR对pgi基因敲除菌种的卡那霉素抗性基因去除后的鉴定
注：M：DNA marker；1：阴性对照；2C11：去除卡那抗性的重组子.
PCR identification of recombinants of pgi gene knock-out without kanamycin resistance
Note: M: DNA 1: Recombinant with
2C11: Recombinants without kanamycin resistance.
质粒pCLM所采用的pSC101复制起始位点为低拷贝(5 copies/cell)，在采用常规酶切连接操作时，往往需要制备较多的质粒，造成操作的繁琐，点突变改造的质粒pSLM提高了拷贝数便于分子生物学操作。突变后获得质粒pSLM并通过测序验证(图6)。采用相同菌体量分别提取相关质粒pULM、pCLM和pSLM，凝胶电泳结果表明pSLM的浓度与pULM基因一致(图7，泳道1与泳道3)，证明pSLM质粒具有高拷贝特性从而有利于基因操作。此外将pSLM质粒电转化BW25113 (pKD46)时，转化能力与pCLM质粒相似，0.1 ng的DNA仍然无转化子，证明pSLM仍然保持与pKD46不相容特性。
pCLM质粒与pULM质粒转化比较
Comparison of transformants of plasmid pCLM
注：A：pULM转化BW25113 (pKD46)；B：pCLM转化BW25113；C：pCLM转化BW25113 (pKD46).
Note: A: Colonies for BW25113 (pKD46) transformed by pULM; B: Colonies for BW25113 transformed by pCLM; C: Colonies for BW25113 (pKD46) transformed by pCLM.
利用SCLM系统对大肠杆菌进行基因敲除
以pSLM为模板，敲除pgi基因，经PCR产
物纯化与琼脂糖凝胶电泳的DNA片段均长有约5×102个克隆，分别随机挑选20个克隆，用鉴定引物对pgi基因敲除菌种进行鉴定。结果表明，分别有18个和20个阳性克隆，阳性率分别为90%和100% (图8)。对PCR产物纯化中2个假阳性克隆进行鉴定时，未发现pSLM特征序列，推测为痕量DNA污染造成。琼脂糖凝胶电泳回收具有DNA
纯化作用，因此后续实验均采用该方法进行DNA
Map of template plasmid pSLM
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模板质粒pSLM示意图
王瑶等: 在大肠杆菌中利用SCLM系统进行高效率λ-Red基因敲除/整合的新策略
进一步，选择丙酮酸氧化酶poxB (1 719 bp)、乳糖代谢调控因子galR (1 032 bp)、磷酸化调控因子yliE (2 349 bp)进行基因敲除操作。采用pSLM模板质粒，分别对poxB、galR、yliE基因进行扩增，然后对其进行敲除，采用验证引物进行验证，poxB (图9A)、galR (图9B)、yliE (图9C)敲除后大小与阳性对照大小一致。与敲除pgi基因的结果类似，在约5×102个克隆中分别挑取20个克隆进行验证，3个基因均被成功敲除，阳性率均为100%。以上结果表明，以pSLM模板质粒为基础，能够实现高效
率的基因敲除。
模板质粒pULM、pCLM和pSLM浓度的分析
Agarose gel electrophoresis identification of
template plasmid pULM, pCLM and pSLM
注：M：DNA marker：1：模板质粒pULM；2：模板质粒pCLM；3：模板质粒pSLM.
Note: M: DNA 1: Template plasmid pULM; 2: Template plasmid pCLM; 3: Template plasmid pSLM.
利用SCLM系统对大肠杆菌进行外源基因整合
以pSLM质粒为基础构建连接有大肠杆菌葡萄糖激酶glk基因的模板质粒，并将glk基因整合到大肠杆菌染色体的ptsG位点上。获得50个左右的克隆，随机挑选8个克隆，采用引物K1与ptsG-A2
菌落PCR对pgi基因敲除菌种的鉴定
PCR identification of recombinants of pgi gene knock-out
注：A：打靶片段通过PCR产物纯化试剂盒纯化；B：打靶片段通过琼脂糖凝胶电泳纯化. M：DNA marker；1：阳性对照；2C11：
随机挑选的重组子.
Note: A: DNA fragment used for knocking out the pgi gene was purified by cycle- B: DNA fragment used for knocking out the pgi gene was purified by gel extraction kit. M: DNA 1: P 2C11: Recombinants.
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微生物学通报 Microbiol. China 2015, Vol.42, No.4
菌落PCR对poxB、galR、yliE基因敲除菌种的鉴定
PCR identification of recombinants of poxB, galR and yliE gene knock-out
注：A：poxB基因敲除；B：galR基因敲除；C：yliE基因敲除. M：DNA marker；1：阳性对照；2：随机挑选的重组子.
Note: A: poxB B: galR C: yliE gene knocking out. M: DNA 1: P
2: Recombinants.
进行鉴定，扩增条带大小为600 bp (图10，泳道1-8)，证明glk基因成功整合至ptsG基因位置，阳性率为100%，并进一步采用pSCre成功消除了卡那霉素抗性基因(图11，泳道2-9)。
为了进一步验证系统在整合操作时适应的片段种类和大小范围，选择大肠杆菌乙酰辅酶A合成
酶acs基因与农杆菌萜类合成代谢ispDF基因进行基因整合操作。acs转录子与卡那抗性基因大小为
4 113 bp，ispDF基因与卡那抗性基因大小为3 548 bp。与glk基因整合结果类似，获得50个左右的克隆，随机挑选8个克隆，采用引物poxB-A2与K1进行鉴定，扩增条带大小为600 bp (图12，泳道2)，证
菌落PCR对glk基因整合菌种的鉴定
PCR identification of recombinants of glk gene knock-out
注：M：DNA marker；1C8：随机挑选的重组子. Note: M: DNA 1C8: Recombinants.
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产品详细描述
载体名称pCold IV大肠杆菌冷激表达载体
大肠杆菌冷激表达载体
多克隆位点，限制性内切酶
5 测序引物及序列:
pCold-F: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3
3 测序引物及序列:
pCold-R: 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3
Ampicillin (氨苄青霉素)
温度诱导，冷休克蛋白表达载体
AAGGAATGGTGTGGCCGATTAATCATAAATATGAAAAATAATTGTTGCATCACCCGCCAATGCGTGGCTT
AATGCACATCAAATTGTGAGCGGATAACAATTTGATGTGCTAGCGCATATCCAGTGTAGTAAGGCAAGTC
CCTTCAAGAGTTATCGTTGATACCCCTCGTAGTGCACATTCCTTTAACGCTTCAAAATCTGTAAAGCACG
CCATATCGCCGAAAGGCACACTTAATTATTAAGAGGTAATACCATATGGAGCTCGGTACCCTCGAGGGAT
CCGAATTCAAGCTTGTCGACCTGCAGTCTAGATAGGTAATCTCTGCTTAAAAGCACAGAATCTAAGATCC
CTGCCATTTGGCGGGGATTTTTTTATTTGTTTTCAGGAAATAAATAATCGATCGCGTAATAAAATCTATT
ATTATTTTTGTGAAGAATAAATTTGGGTGCAATGAGAATGCGCAGGCCCTTTCGTCTCGCGCGTTTCGGT
GATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTCCCGGAGACGGTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCG
GGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAACTATGCGGC
ATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATAAAATTGTAAACGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTA
AATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAG
AATAGCCCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTC
CAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCAAATCAAGT
TTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGAC
GGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGC
AAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTAC
TATGGTTGCTTTGACGTATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCG
TCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATA
TGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTAT
TCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAA
ACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCA
ACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCT
GCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCT
CAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAAT
TATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACC
GAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAG
CTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCA
AACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAA
AGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGT
GAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCT
ACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGAT
TAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAA
TTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGT
TCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAAT
CTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACT
CTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGT
TAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGC
TGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAG
CGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGAT
ACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAG
CGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCT
GTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGA
AAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATAGTCATGCC
CCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAA
TGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCC
AGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTC
TTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCG
GTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAG
CTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGG
CGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAG
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GGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAG
GCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCG
CGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCT
GGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTG
GAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAAT
TCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCAC
GCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTC
ACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGG
TGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGC
CGTTGAGCACCGCCGCCGC
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为&冷休克蛋白&被专门诱导表达。 冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5非翻译区（5UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
BioVector NTCC Inc.产品分类目录简介
&&&&&& &&Biovector中国质粒载体菌株细胞株基因库-NTCC国家典型培养物保藏中心，可提供数万种质粒载体、菌株、基因和细胞株,并可提供实验技术外包服务,如基因克隆、质粒构建、蛋白原核、真核表达及纯化、病毒包装、基因沉默RNAi等服务。作为美国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心中国分库及唯一办事处，Biovector NTCC Inc.可为您提供便捷一站式的产品进***务，到货快捷，步骤简便。&
BioVector中国质粒载体菌株细胞基因保藏中心
NTCC国家典型培养物保藏中心
电话：010-,
技术支持及订购服务：&
Biovector NTCC中心主页&
资源分类列表网址
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禁止未经允许的拷贝和修改，侵权必究！
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资源涵盖克隆载体、真核表达载体、原核表达载体、病毒载体、信号通路报告载体、亚细胞定位载体、荧光蛋白载体、昆虫细胞表达载体、启动子载体、诱导调控载体等十多种类型上万个品种。&
我们拥有目前中国最大的cDNA克隆库、覆盖30,000个人全长基因的TrueClone cDNA克隆和超过25,000个TrueORF cDNA克隆。利用TrueORF cDNA克隆，我们开发了大量的全长人重组蛋白产品（哺乳动物细胞表达），可以进行蛋白功能的研究。另外，Biovector,Inc提供独特的基因表达产品，如TissueScan cancer qPCR array用于生物标记物的发现及鉴定。&
33,000 种人TrueClones & & & 全长人cDNA克隆（无标签）&
5,000种 小鼠 TrueClones & 全长小鼠cDNA克隆（无标签）&
25,000 种人 TrueORF & & & &人ORF cDNA克隆（带标签）&
12,000种 小鼠 TrueORF & &小鼠ORF cDNA克隆（带标签）&
5,000种 人重组蛋白 & &全长的人重组蛋白（HEK293T细胞表达）&
5,000 种 一抗 & & &经鉴定的特异性识别人源蛋白的一抗产品&
25,000 种人 HuSH-29 shRNA & &预设计的shRNA 表达载体（人基因），用于基因沉默&
20,000 种小鼠 HuSH-29 shRNA 预设计的shRNA 表达载体（小鼠基因），用于基因沉默&
10,000种 VERIFY Tagged Antigen & & & 过表达细胞裂解物（可作为抗原和检测分析标准品）&
240 Luminex Multiplex Assays & & SNP、转录因子和microRNA分析&&
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酿酒酵母表达载体
毕赤酵母表达载体
毕赤酵母宿主菌
原核表达载体)
植物表达/RNAi载体农杆菌
枯草芽孢杆菌表达载体
RNAi基因沉默干扰敲除载体
基因cDNA文库ORF表达克隆质粒，
哺乳动物表达载体，
悬浮细胞表达系统、DHFR、GS加压筛选表达系统、疫苗/抗体蛋白表达系统、工业级大规模抗体药物蛋白表达：
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现货当日可发送
广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体，
腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，
基因重组载体敲除载体**质粒RED重组系统载体4
荧光蛋白表达载体荧光定位质粒报告基因载体pEGFP,pEYFP,pECFP,pDsRED, pmCherry,pAcGFP,hrGFP,ZsGreen，pDsRed1-C1, pDsRed1-N1, pDsRED-Monomer-N1, pEYFP-C1, pEYFP-N1, pEGFP-1，pEGFP-C1, pEGFP-N1, pEGFP-N3, pcDNA-EGFP1,pECFP-N1,pECFP-C1, pAcGFP1-1 pDsRED2-ER, pDsRED2-Mito, pDsRED2-Nuc，pDsRED2-Peroxi , pEYFP-Golgi, pEYFP-Mem, pEYFP-ER , pEGFP-Actin, pECFP-ER, pIRES2-EGFP, pLEGFP-C1，pLEGFP-N1，pDsRED-Express-N1,pIRES2-DsRed,pIRES-AcGFP1,pmCherry-C1,N1
带有Luc，mCherry(RFP)萤火虫酶+红色荧光报告基因双荧光的慢病毒载体：
pLenti-PGK-Luciferase-mCherry
pLenti-RFP-Luc （有CMV，EF1alpha，MSCV，UbC多种启动子可选择）
带有Luc-GFP萤火虫酶+绿色荧光双荧光载体：
pTRE-neo-GFP-Luc （双荧光，可直接表达，也可慢病毒包装；）
pEF1-GFP-Luc （双荧光，可直接表达）
pCMV-Luc-EGFP (双荧光，CMV启动子-Luc-SV40启动子-EGFP，可直接表达)
启动子增强子报告载体（Promega，带有Luc荧光报告基因）： pGL3-basic，pGL3-control，pGL3-enhancer，pGL3-promoter，pRL-TK，pRL-CMV，pRL-SV40,
信号通路报告载体（Clontech）： pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pI&B-EGFP， pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1(PMA)-Luc 信号通路报告载体（Promega）： pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro]，pGL4.75 信号通路报告载体（Stratagene）： p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-&B-Luc，pSRE-Luc， pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc
昆虫表达载体杆状病毒表达载体系统
Taq,Pfu高表达载体菌株KOD,
肠激酶毕赤酵母表达质粒pPIC9k-His-EK, 肠激酶温控表达质粒pBV220-EK , 等质粒载体及高表达工程菌株，现货当日可发送。
BiFC双分子荧光表达载体FRET系统载体
，-bjun-VN173，,
真菌表达载体黑曲霉米曲霉黄曲霉表达质粒
酵母单杂交三杂交载体，酵母r
噬菌体展示系统载体
原核表达系统载体菌株：
pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列(含GST标签)，pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，分泌型原核表达载体pLLP-OmpA, pLLP-STII, pMBP-P，pIN-III-ompA1,2,3, pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,
大肠杆菌表面展示载体pINP，pOprF,冷激质粒pCold I,II,III,pCold TF；
原核共表达质粒载体pETDuet-1,pCDFDuet-1,pACYCDuet-1,pRSFDuet-1等；
原核荧光表达质粒
pQBI63(绿色荧光), pMP2444(绿色荧光)，pBAD-RFP-GFP（红色和绿色双荧光），pBADHis-iRFP(近红外荧光),
&pDark（黑暗中表达荧光，光下抑制表达）,pLight（可见光下荧光表达，黑暗中抑制表达），
&广宿主荧光表达质粒
pMP2444(绿色荧光)
pRT102&带有lux荧光素报告基因&&&&
pRL1063a&带有lux荧光素报告基因&
工具酶工程酶高表达质粒菌株
植物表达载体、农杆菌菌株及农杆菌感受态细胞（电转、化转）：
噬菌体展示表达系统载体菌株：
A 噬菌体展示抗体scFv
质粒：pCANTAB5E
宿主菌：TG1
辅助噬菌体：M13K07
可溶表达菌：HB2151
B 噬菌体展示抗体Fab
质粒：pcomb3
宿主菌：XL1-Blue
辅助噬菌体：VCSM13
假单胞杆菌表达载体/多宿主表达载体
&pVLT33&&& Ptac启动子下，表达型。&&&
&pME6032&Ptac强启动子下的表达型质粒&&&
&pRK2013& 接合转移辅助质粒&&&
&pMP2444& 带GFP报告基因&&&
&pRT102&带有lux荧光素报告基因&&&
&pRL1063a&带有lux荧光素报告基因&&
&pBBR1MCS-2
&pBBR1MCS-3
&pBBR1MCS-4
&pBBR1MCS-5
&pBBR1MCS-6&
&Tn5载体&&&&&
&pUT-miniTn5&&&&
&pRL1063a&带有lux荧光素报告基因&&&
&pRT102&带有lux荧光素报告基因&
分支杆菌表达系统pMV261，pMV361，pMV361-Gateway载体，M. smegmatis MC2 155分枝杆菌菌株；
广宿主质粒(包括假单孢菌等多种革兰氏阴性菌)&&&&&&
基因敲除质粒、基因重组质粒、**质粒：
哺乳动物表达载体：
信号通路报告载体：
p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-&B-Luc，pSRE-Luc，
pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc
信号通路报告载体（Clontech）：
pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pI&B-EGFP，
pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1(PMA)-Luc
荧光表达载体pEBFP-N1,pEBFP-C1,pDsRed1-C1, pDsRed1-N1, pDsRED-Monomer-N1, pEYFP-C1, pEYFP-N1, pEGFP-1，pEGFP-C1, pEGFP-N1, pEGFP-N3, pcDNA-EGFP1,pECFP-N1,pECFP-C1, pAcGFP1-1
pDsRED2-ER, pDsRED2-Mito, pDsRED2-Nuc，pDsRED2-Peroxi ,
pEYFP-Golgi, pEYFP-Mem, pEYFP-ER , pEGFP-Actin, pECFP-ER,
pIRES2-EGFP, pLEGFP-C1，pLEGFP-N1，pDsRED-Express-N1,pIRES2-DsRed,pIRES-AcGFP1,pmCherry-C1,N1
启动子增强子报告载体（Promega，带有Luc荧光报告基因）：
pGL3-basic，pGL3-control，pGL3-enhancer，pGL3-promoter，pRL-TK，pRL-CMV，pRL-SV40,
信号通路报告载体（Promega）：
pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro]，pGL4.75
四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR
四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2，pTK-hyg
pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off
四环素调控系统（Clontech）：pTet-on advanced，pTet-off advanced, pTRE tight，pTRE Tight Luciferase
Tet-Express& Inducible Expression System载体: pCMV-Tet3G，pTRE3G，pTRE3G-Luc，
四环素调控，慢病毒载体pLVX-Tight-Puro，pLVX-Tet-On-Advanced
荧光定位载体多种，现货当日可发送：&&
pDsRed1-C1, pDsRed1-N1, pDsRED-Monomer-N1, pEYFP-C1, pEYFP-N1, pEGFP-1，pEGFP-C1, pEGFP-N1, pEGFP-N3, pcDNA-EGFP1，pECFP-N1，pECFP-C1，pAcGFP1-1,
pCMV/myc/Nuc,pCMV/myc/Nuc-GFP,pCMV/myc/Cyto
pDsRED2-ER, pDsRED2-Mito, pDsRED2-Nuc，pDsRED2-Peroxi ,
pEYFP-Golgi, &pEYFP-Mem, &pEYFP-ER , pEGFP-Actin, &pECFP-ER,&
pIRES2-EGFP,pIRES2-DsRed
&pLEGFP-C1，pLEGFP-N1，pmCherry-N1，pmCherry-C1，
pEYFP actin，pEYFP tub
细胞永生化质粒载体
pRevTRE-SV40T, pCI-neo-hTERT，pBABE-puro-SV40 LT，pBABE-puro-hTERT, pBABE-puro-hTERT-HA，pBABE-neo-SV40LT等,现货当日可发送
果蝇细胞表达系统pCoBlast,pCo hygro载体
CRISPR/Cas9系统载体
基因打靶载体PL253，PL451，PL452，PL453,配套菌株EL250,EL350，现货当日可发送；
用于基因打靶（敲除）的经典试剂盒TALE Toolbox kit(现货), Zinc Finger Consortium Modular Assembly Kit（现货），包括如下质粒：
TALE Toolbox kit：
pTALETF_v2 (NN)
pTALETF_v2 (NG)
pTALETF_v2 (NI)
pTALETF_v2 (HD)
pTALEN_v2 (NI)
pTALEN_v2 (NG)
pTALEN_v2 (NN)
pTALEN_v2 (HD)
Zinc Finger Consortium Modular Assembly Kit：
pc3XB-ZF1,pc3XB-ZF2,,,,pc3XB-ZF141共计141种质粒
&Zinc Finger Consortium OPEN Accessory Reagent Set
Plasmids:&pMLM36 (aka pBR-UV5-GP-FD2)
&pAC-alphaGal4 (aka pKJ1267)
&pAC-KAN-alphaGal4
&pBAC-lacZ
Strains:&CSH100
&&Zinc Finger Consortium Expression Vector Kit v1.0
21872&&pMLM290
21873&&pMLM292
13426&&pST1374
&pDW1775 (for expression in plants)
&pGP-FB-orig BA
&pAC-Kan-alphaGal4
&pBAC-lacZ
&pBAC-BA-lacZ
&KJBAC1 strain
腺病毒系统（Stratagene）: &
配套大肠杆菌BJ5183,以及293 cell line,293T cell line.
Cre/loxP系统载体pLOX-CW-CRE，pLOX-gfp-iresTK，Lox-Stop-Lox TOPO, pCAGERT2-Cre-ERT2,pClusterin-ERT2CreERT2等；Cre酶表达质粒pCAG-Cre-GFP,pCAG-Cre等；
Gateway系统载体
pENTR&&&&&&& Gateway系统
pENTR 3C&&&&&&& Gateway系统
pENTR-GFP&&&& Gateway系统
pENTR-Gus&&&&&&& Gateway系统
pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative&& Gateway系统&&配套菌株DB3.1
pLenti 6/TR&&&& Gateway系统
pLenti 6/V5-GW/lacZ&&&&& Gateway系统
pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR&&& Gateway系统
pCR8/GW/TOPO
pCR4Blunt-TOPO
pENTR/D-TOPO
慢病毒/逆转录病毒表达载体,RNAi沉默载体
自噬载体LC3质粒
, 现货当日可发送，
FRET,BiFC双分子荧光载体
pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155，-bjun-VN173，,
昆虫/杆状病毒表达载体,等
RNAi基因干扰基因沉默载体
pSilencer 4.1-CMV neo，pSilencer 4.1-CMV puro 质粒载体
pSilencer1.0
pSilencer 2.1-U6 hygro
pSilencer 3.0-H1
pSilencer 3.1-H1 hygro
pSilencer 3.1-H1 neo
pSilencer 4.1-CMV neo
pSilencer 4.1-CMV puro
pMIR-REPORT miRNA
Expression Reporter
RNAi-Ready pSIREN-Retro
RNAi-Ready
pSIREN-RetroQ-ZsGreen
pSUPER-EGFP
pSUPER-basic
Oligoengine
pSUPER-GFP-neo
Oligoengine
pSUPER.Retro-GFP/Neo
Oligoengine
pSUPER.retro.puro
Oligoengine
psiRNAH1-neo
Invitrogen
pGenesil-1
RNAi载体（Ambion）：
pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro，
pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo，
pSilencer 4.1-CMV neo，
pSilencer 4.1-CMV puro
pMIR-REPORT Luciferase
RNAi载体（oligoengine）
pSuper-puro
RNAi逆转录病毒载体(clontech):
RNAi-Ready pSIREN-Retro Q，
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）
RNAi慢病毒载体(addgene):
谷氨酸棒状杆菌表达载体、基因敲除载体pk18mobsacB, pk19mobsacB，pEC-XK99E，pXMJ19等;
金黄色葡萄球菌表达载体、基因敲除载体：
pKSV7 温度敏感型革兰氏阳性菌/大肠杆菌穿梭质粒
pMAD 温度敏感型革兰氏阳性菌/金葡菌基因敲除质粒
pBT2 温度敏感型革兰氏阳性菌/金葡菌基因敲除质粒
pVA981 温度敏感型革兰氏阳性菌/大肠杆菌穿梭质粒
金葡菌RN4220菌株，现货当日可发送，
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus MRSA菌株：ATCC43300，ATCC33591 ，BAA-1684，BAA-1707，BAA-1720，BAA-1760, BAA-1770, BAA-40, BAA-41, BAA-44，等等。
大肠杆菌与链球菌/链霉菌穿梭表达载体、基因敲除载体pOJ260,pKC1139,pSET152,pWHM10,pVA981,pBBR1MCS-5,-6,pJRD215,pJN105等质粒载体，以及红霉素抗性基因表达载体pMAD等；
iPS诱导多能干细胞慢病毒载体pLentG-KOSM,FUW-M2rtTA，TetO-FUW-OSKM,FUW-teto-hOCT4, FUW-teto-hSOX2, FUW-teto-hMYC, FUW-teto-hKLF4, FUW-M2rtTA等;
pLentG-KOSM
细胞重编程载体（iPS）
细胞重编程载体（iPS）
FUW-M2rtTA
细胞重编程载体（iPS）
TetO-FUW-OSKM
细胞重编程载体（iPS）
FUW-tetO-hOCT4
细胞重编程载体（iPS）
FUW-tetO-hSOX2
细胞重编程载体（iPS）
FUW-tetO-hKLF4
细胞重编程载体（iPS）
FUW-tetO-hMYC
细胞重编程载体（iPS）
细胞重编程载体
另有TALEN基因敲除试剂盒Golden Gate TALEN kit, 现货当日可发送。
基因打靶载体PL253，PL451，PL452，PL453,配套菌株EL250,EL350, EL350 (galk+) 、EL350 (galk-) ,
用于基因打靶（敲除）的经典试剂盒Golden Gate TALEN kit(现货),
TALE Toolbox kit(现货),
Zinc Finger Consortium Modular Assembly Kit（现货），
酿酒酵母表达载体
酵母表面展示系统
载体pYD1,配套菌株EBY100,
酵母整合型表达载体
毕赤酵母表达载体
cDNA,全长ORF及其表达质粒（基因名称以 &Gene&代替）：pCMV-Gene，pCMV-Gene-EGFP，pcDNA3.1-Gene,克隆质粒pDONR223-Gene, pOTB7-Gene，现货当日可发送;相关图谱序列及酶切位点信息请见附件。
另有该基因克隆质粒/表达质粒/启动子报告质粒/腺病毒慢病毒逆病毒RNAi载体由Biovector Inc.现货供应，具体查询 包括如下：
基因真核表达质粒
pCMV-GENE,
pCMV-GENE-Flag,
pcDNA3.1-GENE,
pCMV-His-GENE,
pCMV-Myc-GENE,
pCMV-GST-GENE,
pCMV-HA-GENE,
pCMV-SPORT6-GENE,
基因真核荧光表达质粒
pCMV-GENE-EGFP,
pEGFP-GENE,
pCMV-mCherry-GENE,
pCMV-ECFP-GENE,
pCMV-EYFP-GENE,
pCMV-Luc-ORF,
基因真核表达载体特点:
携带CMV启动子，可在真核细胞进行表达；
带T7启动子，可转化大肠杆菌，进行原核蛋白表达；
有融合N、C端EGFP, Flag, His, myc, HA等标签的质粒，可用于蛋白纯化、检测及跟踪；
含有Neomycin, puromycin等筛选标记，可用于构建稳定细胞株。
基因慢病毒载体
pLenti-CMV-GENE-puro,
pLenti-CMV-GENE-V5,
基因原核表达质粒
pTac-GENE-GST,
pTac-GENE-MBP,
pT7-GENE-HisSUMO,
pBAD-GENE,
pGEX-GENE-GST,
基因酵母表达质粒
pGAL1-GENE,
pADH-GENE-GAL4AD,
pADH-GENE-GAL4BD,
基因昆虫细胞表达载体pPH-His-GENE,
Wheet Germ Cell Free（麦胚无细胞体系） 表达质粒
pT7-His-GENE,
Gateway兼容的克隆质粒pDONR223-GENE，pENTR-GENE,
克隆质粒pOTB7-GENE, pBluescriptR-GENE，pCMV-SPORT6-GENE,
全长转录本 cDNA 克隆 (含 5 和 3 UTRs)，
基因沉默RNAi(shRNA,siRNA,miRNA)载体pSilencer-Gene,pSIREN-reteoQ-Gene,
启动子报告质粒pGene Promoter-GLuc,
pGene Promoter-GLuc-CMV-SEAP,
pGene Promoter-EGFP,
pGene Promoter-mCherry,
基因启动子报告慢病毒质粒pLenti- Promoter-GLuc,等；
以上现货当日可发送;
另可根据您的需要选择载体骨架定制表达质粒,一周左右完成交付。
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