李贤慧,程熠,刘雅文,王刚,李积胜,
武警医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林大学公共卫生学院流行病学教研室,
目的：研究原代中枢神经胶质细胞在1，25-二羟维生素D3[1，25-(OH)2D3]化学限定培养中神经生长因子(NGF)基因转录及表达。方法：用新生乳鼠脑皮质制备星形胶质细胞，采用浓度0、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11及10^-12mol·L^-1，25-(OH)2D3化学限定无血清培养液培养后，RT-PCR法检测NGF mRNA转录，双向夹心-ELISA检测NGF。结果：1，25-(OH)2D3化学限定无血清原代培养的神经胶质细胞在1，25-(OH)2D3作用下可分泌NGF，实验中1，25-(OH)2D3有效浓度范围10^-11～10^-7mol·L^-1；1，25-(OH)2D3培养6h后开始检测到mRNA的表达，12h时表达最高，36h后检测不到NGF mRNA的表达；而NGF蛋白的ELISA反应持续时间大于48h。结论：星形神经胶质细胞的NGF基因可被甾体激素1，25-(OH)2D3激活并转录表达。您所在位置： &
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乳鼠肾细胞的原代培养.pdf 6页
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--------------------------Page1------------------------------细胞生物学实验生64范泓洋乳鼠肾细胞的原代培养及传代培养生64班范泓洋.实验目的a)掌握原代细胞培养的原理与操作方法，了解无菌操作的条件和注意事项；b)了解并通过实践学习处死与解剖乳鼠和识别、取出乳鼠肾脏的方法；2.实验原理新生约3天的乳鼠体内的组织与器官均没有发育成熟，处于旺盛的分裂生长时期，因此是用作细胞培养的良好材料，适当的培养就可以观察到贴壁和分裂增殖现象。由于肾脏的细胞类型较为单一并且肾脏本身易于从乳鼠体内取出，将肾作为实验材料是较好的选择。在进行细胞培养之前，首先要从组织中提取出大量的分散的单细胞并制备成细胞悬液。这就需要首先破坏细胞外基质以及细胞连接对组织细胞的“束缚”。胚胎或新生动物的组织中细胞外基质和细胞连接并没有充分形成，这也是将新生动物作为实验材料的原因之一。具体的方法是用蛋白酶例如胰蛋白酶（trypsin）或胶原酶（collagenase）和乙二胺四乙酸（EDTA）处理组织，使之成为单细胞。胰蛋白酶作用于肽链的Lys或Arg残基的羧基末端，将肽链水解为长短不同的几段；在胎儿发育过程中活性很强的脊椎动物胶原酶（vertebratecollagenase）能够催化胶原蛋白在Gly-Leu和Gly-Ile键处水解，将其裂解为一个较大的N端片断（75%）和一个较小的C端片断（25%）。这两种酶可以达到有效降解细胞间质蛋白的目的。EDTA是钙离子螯合剂，而Ca2+在细胞粘连中起到了关键性的作用，去掉有助于肾细胞脱落。用酶解的方法能够使细胞从原有组织中脱落并保持生命力，本实验正是采用了这样的方法。1--------------------------Page2------------------------------细胞生物学实验生64范泓洋.实验材料、用品和仪器超净工作台、倒臵显微镜、二氧化碳培养箱、水浴锅、高压灭菌锅、离心机、滤器酒精灯、酒精棉、镊子、器械缸、废液缸、记号笔，蜡盘、大头针、眼科剪、眼科镊，移液器架、移液器、吸头，试剂瓶、试剂瓶架，平皿、细胞培养瓶、离心管等PBS溶液，0.25%胰蛋白酶—0.02%EDTA溶液，DMEM培养基（含10%小牛血清及双抗）4.实验步骤4.1将乳鼠（3天左右）断头放血致死。4.2进入无菌间，用70%乙醇消毒乳鼠体表，将其固定在蜡盘上。4.3在超净台内，将其背部皮肤剪出一个“工”字型开口，然后皮肤拉开，固定在蜡盘上。将其腰背部肌肉暴露出来。用70%乙醇消毒背部肌肉，在脊柱两侧各剪一切口，取出肾脏，臵于盛有PBS溶液的平皿中，除去肾膜与脂肪。4.4将肾脏中剪成数块，用PBS溶液再洗涤一次。4.5吸去PBS溶液，将肾脏剪碎。加入0.5mL胰酶—EDTA溶液，于37℃消化20分钟，直至组织块变白、呈疏松状4.6加入0.5mL含血清DMEM培养基终止消化，反复吹打分散细胞4.71000rpm离心10min，弃上清。4.8加入1mL含血清DMEM细胞培养液重悬细胞，将细胞悬液转移至细胞培养瓶中，于37℃、5%CO培养24.9一天后，观察细胞生长及贴壁状态。向培养瓶中加入1mlPBS溶液洗涤一2--------------------------Page3------------------------------细胞生物学实验生64范泓洋次，将PBS吸净后加入1ml血清DMEM细胞培养液，继续于37℃、5%CO2培养4.10三天后观察细胞生长情况，进行传代培养。将细胞培养瓶中培养基洗净，加入200μl胰酶—EDTA溶液，于37℃消化5分钟，加入800μl含血清DMEM细胞培养液终止消化，反复吹打分散细胞。5000rpm离心5min。吸净上清，向沉淀中加入1ml含血清DMEM细胞培养液，吹打使重悬。向两个细胞培养瓶中分别加入500μl悬液并向两个培养瓶中各加入500μl含血清DMEM细胞培养液。37℃、5%CO培养24.11每天观察细胞生长状态。5.实验结果*原代培养细胞在24h后观察，贴壁70%，部分贴壁细胞呈上皮样，部分呈纤维样，细胞立体感强，细胞内颗粒少，呈透明状。具体见实验记录图。培养液中悬浮死细胞较多，有大块组织，故选择用PBS洗涤一次。培养3天后观察，培养基变为黄色透明状，显微镜下观察，细胞分布不匀，比较集中部分已经达到100%，细胞较透明，颗粒较少，细胞间界限清楚，并可隐约见到细胞核稀；松部分细胞较少。决定进行传代培养。传代培养后每24h观察细胞，发现生长减缓，细胞稀松，7天后放弃继续培养。3--------------------------Page4------
正在加载中，请稍后...左旋丁基苯酞对乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧后脑胶质细胞数量及IL-1β蛋白表达的影响--《中国神经免疫学和神经病学杂志》2011年01期
左旋丁基苯酞对乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧后脑胶质细胞数量及IL-1β蛋白表达的影响
【摘要】：目的观察左旋丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,l-NBP)对原代培养乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后脑胶质细胞数量及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。方法采用DMEM培养基体外培养乳鼠脑胶质细胞,免疫细胞化学鉴定培养细胞类型,建立脑胶质细胞OGD/R损伤模型,通过测定细胞OGD/R时乳酸脱氢酶(LDH)释放量,评估脑胶质细胞OGD模型。OGD 24h/R 24 h后,采用MTT法测定脑胶质细胞数量,并观察l-NBP对OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量的影响;采用间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组脑胶质细胞IL-1β蛋白表达。结果 OGD 4 h组、OGD 8 h组、OGD 12 h组、OGD 24 h组脑胶质细胞LDH释放量均比正常对照组明显增多(P0.01);OGD不同时间组组间比较差异有统计学意义(P0.01)。OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量较对照组明显增加(P0.01);l-NBP 500μmol/L组脑胶质细胞数量较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P0.05)。OGD 24 h/R 24 h组IL-1β蛋白表达比对照组明显增多(P0.05);l-NBP 100和500μmol/L组IL-1β蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P0.05)。结论 l-NBP能减少乳鼠脑胶质细胞OGD/R后细胞数量以及IL-1β蛋白的表达。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R743.3【正文快照】：
左旋丁基苯酞(L-3-n-butylphathlide,l-NBP)具有保护神经元、促血管生成、保护线粒体、缩小缺血后梗死面积的作用[1-2],能改善缺血性脑卒中患者神经功能缺损及日常生活能力[3]。胶质细胞在大脑内数量大,分布广,是中枢神经系统(centralnervous system,CNS)缺血再灌注后炎性反
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京公网安备75号闫彦芳,张壮,韦颖,牛福玲,崔巍,王硕仁,孙塑伦,朱陵群,党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用
擅长领域&专家姓名
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&>&&>&内容
文献名称：党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用
&&&&前言：目的以原代培养的大鼠大脑星形进行缺糖再给氧处理,观察总对星形胶质细胞损伤的保护作用。方法1 d龄W is大鼠乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养,含的无糖Earle’s液进行缺氧缺糖处理造模,T法测定细胞,Hoechst 33342和双染法显微镜观察变化和、凋亡率,测定漏出率,评价药效。结果与组比较,党参总皂苷Ⅰ、Ⅲ组均能显著提高细胞存活率(P<0。01),党参总皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能显著降低细胞坏死率(P0。05),但均能显著降低细胞LDH漏出率(P<0。01)。结论党参总皂苷对缺血再损伤后星形胶质细胞的坏死具有显著作用,但对凋亡无保护作用,提示党参总皂苷是党参治疗中风病急性期的主要效应。&&&&Objective To observe the preventive effect of the total saponin of Radix Codonopsis on the(lesion) of cultured primary astrocytes(Ast) in rats induced by hypoxia and hypoglycemia reoxygenation.Methods The primary Ast of rat brain were cultured in Wistar rats(one day old) and then treated with Earle s solution to establish the model of hypoxia and hypoglycemia.The cell survival rate was detected by MTT assay.The cell morphological changes,necrotic rate and apoptotic rate were observed by(orthotopic) double s...
党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用
Article Name英文(英语)翻译
Preventive effect of total saponin of Radix Codonopsis on Ast lesion induced by hypoxia and hypoglycemia r
YAN Yan-fang~1;ZHANG Zhuang~1;WEI Ying~1;NIU Fu-ling~2;CUI Wei~2;WANG Shuo-ren~2;SUN Su-lun~1;ZHU Ling-qun~1 （1 Department of NDongzhimen HBeijing University of Chinese M（Beijing） 100700）（2 Key Laboratory of Chinese Internal Medicine of Ministry of EBeijing 100700）;
作者单位Author Agencies
北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室;
北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室;
北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室 北京;
文献出处 Article From
中国科学院上海冶金研究所; 材料物理与化学(专业)
博士论文 2000年度
党参总皂苷;
星形胶质细胞;
Radix Cthe total saponin of Radix Chypo
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<FONT color=# &2005&&京ICP备号&Aβ寡聚体-学术百科-知网空间
又称亚单位。指下列几种含义:①具有四级结构的蛋白质分子中的每个球状蛋白质,它是蛋白质...②寡聚蛋白质的功能单位，如血红蛋白中的α链或β链结构；③大分子中确定的亚结构，如构成核糖核蛋白单位的大、小亚单位。
与"Aβ寡聚体"相关的文献前10条
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