猪白细胞介素-2重组乳酸菌的制备及免疫增强作用研究--《吉林农业大学》2013年硕士论文
猪白细胞介素-2重组乳酸菌的制备及免疫增强作用研究
【摘要】：随着国家规模化养殖技术的推广以及饲养环境恶化程度的加剧,禽流感、猪流感等各种传染类疾病对养殖业甚至人类的危害越来越严重,防治难度越来越大,传统防治方法己凸显其不足。对新型免疫治疗剂、免疫增强剂以及基因工程疫苗的需求尤为迫切。
目前,IL-2已是一种在预防和治疗疾病方面备受关注的重要细胞因子。IL-2具有广泛生物活性,可促进T、B淋巴细胞、NK细胞增殖与分化,促进干扰素(Interferon, IFN)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)等细胞因子分泌,提高动物机体细胞免疫和体液免疫能力,解除机体免疫抑制,增强疫苗免疫效果,降低疫苗副反应,治疗寄生虫感染。IL-2在抗病毒、抗感染、抗毒素、抗肿瘤及免疫调节中发挥重要作用,在动物疾病防治中倍受关注,可作为免疫佐剂增强疫苗免疫效果。本研究将猪IL-2基因克隆至大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pSIP409中,经电转化至乳酸菌得到具有免疫调节活性的重组乳酸菌,本研究对制备新型微生态制剂防治动物重大疫病以及降低抗生素残留促进动物性食品安全具有重要意义。具体研究内容及结果如下：
根据GenBank所发表的猪白细胞介素-2(pIL-2)基因序列,合成克隆载体pMD-18T-pIL-2,经提取质粒、PCR、限制性内切酶酶切、测序等方法鉴定,与Genbank上公布的pIL-2基因序列同源性达到100%。证明成功合成了pMD-18T-pIL-2克隆载体。
用限制性内切酶双酶切pMD-18T-pIL-2中的pIL-2基因并克隆至大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pSIP-409中,构建重组质粒pSIP-409-pIL-2。经电转化至Lb.plantarum NC8中,构建重组乳酸菌。经清酒乳杆菌素sakasin-P(SppIP)诱导后SDS-PAGE电泳分析,该重组乳酸菌表达约17.4kDa蛋白质量,表达产物与预期大小相符。经Western blotting分析表明pIL-2具有反应原性。
将重组乳酸菌连续胃内接种于21日龄断奶仔猪三周,并于第二周开始时,同时胃内接种ETEC O149:K88一周,至仔猪发病。结果显示,与对照组相比,重组pSIP-409-pIL-2乳酸菌可增强仔猪的细胞免疫水平,刺激机体产生抗体并诱导局部黏膜反应,下调炎性因子TNF-α水平同时促进抗炎因子IL-4的表达,明显改善仔猪组织病理变化,通过对IL-2及TNF-α抗原定位和肠道内容物检测,表明重组菌成功在肠道内定植。
【关键词】：
【学位授予单位】：吉林农业大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：S852.612【目录】：
摘要5-6Abstract6-8目录8-9前言9-10第一篇 文献综述10-21 第一章 白细胞介素-2概述10-16
1.1 细胞因子概述10-11
1.2 白细胞介素-2基因及蛋白11
1.3 IL-2的主要生物学功能11-13
1.4 白细胞介素-2在动物疾病防治中的应用13-16 第二章 乳酸菌概述16-21
2.1 乳酸菌生理特性16
2.2 乳酸菌通过肠道的转换过程16-17
2.3 乳酸菌与宿主的相互作用17
2.4 乳酸菌作为运输系统的构成17-18
2.5 乳酸菌作为载体菌的种类和菌株18
2.6 乳酸细菌投递分子生物的类型18-21第二篇 研究内容21-52 1.1 材料21-25 1.2 方法25-36 1.3 结果36-49 1.4 讨论49-52结论52-53参考文献53-62附录62-63作者简介63-64致谢64
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如图是显微镜下观察到的几种细胞或组织图像(D中细胞取自猪的血液)，请据图回答：
(1)属于原核细胞的是___________(填标号)。(2)图中能进行光合作用的是___________(填标号)。(3)地球上最基本的生命系统是___________，图中能表示生命系统个体层次的是___________(填标号)。(4)提取细胞膜时通常选用D图中的___________细胞，原因是____________。(5)B、E两类生物主要区别：B类生物一般含___________，能进行光合作用，故其代谢类型是___________型。
题型：读图填空题难度：中档来源：0121
(1)B、E(2)B、C(3)细胞&&& &B、E(4)红&& &哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和众多的细胞器(5)光合色素(藻蓝素和叶绿素)&&&&&自养
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据魔方格专家权威分析，试题“如图是显微镜下观察到的几种细胞或组织图像(D中细胞取自猪的血液..”主要考查你对&&实验：体验制备细胞膜的方法，生命系统的结构层次，原核细胞和真核细胞&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
实验：体验制备细胞膜的方法生命系统的结构层次原核细胞和真核细胞
易错点拨： 1、红细胞要用生理盐水稀释：①使红细胞分散开，不易凝集成块；②使红细胞暂时维持原有形态。 2、滴蒸馏水用吸水纸吸引时应该缓慢进行，防止把细胞吸跑。 例& 科学家常用成熟哺乳动物红细胞作材料来研究细胞膜的组成，是因为（） A．哺乳动物红细胞容易得到 B．哺乳动物红细胞在水中容易涨破C．哺乳动物成熟的红细胞内没有细胞核和众多的细胞器 D．哺乳动物红细胞的细胞膜在光学屁微镜下容易观察到 答案C 生命系统的结构层次：细胞→组织→器官→系统(植物没有系统)→个体→种群→群落→生态系统→生物圈&
易错点拨：(1)单细胞生物由单个细胞直接构成个体，不具组织、器官、系统这三个结构层次。(2)植物没有系统这一结构层次。(3)病毒无细胞结构，不属于生命系统，但病毒在宿主细胞中能繁殖，产生与亲代相同的子代病毒，繁殖是生物的基本特征之一，所以病毒属于生物。(4)一个分子或原子是一个系统，但不是生命系统。例题：下列关于生命系统的结构层次的叙述中，不正确的是(& ) A．生命系统的各个层次相互依赖，又各自有特定的组成、结构和功能 B．从生物圈到细胞，各种生态系统，大大小小的种群、个体，个体以下的系统、器官和组织，都是生命系统的一部分 C．在生命系统的各个层次中，能完整地表现出各种生命活动的最小层次是细胞 D．一个分子或一个原子是一个系统，也是生命系统 正确答案是D 生命系统的各结构层次间关系的分析：(1)细胞一个体，体现了高等多细胞生物个体发育历程，同时体现了生命的进化历程，即由单细胞进化到多细胞。 (2)个体一种群一群落，体现了生物之间的关系。 (3)群落一生态系统一生物圈，体现了生物与其生活环境的关系。 原核细胞和真核细胞的概念：（1）原核细胞：细胞较小，无核膜、无核仁，没有成形的细胞核；遗传物质(一个环状DNA分子)集中的区域称为拟核；没有染色体，DNA不与蛋白质结合；细胞器只有核糖体；有细胞壁，成分与真核细胞不同。（2）真核细胞：细胞较大，有核膜、有核仁、有真正的细胞核；有一定数目的染色体(DNA与蛋白质结合而成)；一般有多种细胞器。原核细胞和真核细胞的比较:
&知识点拨：
1、真核原核生物的本质区别是有无核膜包裹的细胞核。2、有细胞结构的生物分为真核和原核生物，没有细胞结构的生物就是病毒。自然界生物的分类：
&知识拓展： （1）原核生物：由原核细胞构成的生物。如：蓝藻、细菌、放线菌、支原体等都属于原核生物。 ①蓝藻：蓝藻是单细胞原核生物，又叫蓝绿藻、蓝细菌，但不属于细菌，也不是绿藻。蓝藻是一类藻类的统称，其标志便是单细胞、没有以核膜为界限的细胞核。常见的蓝藻有蓝球藻（色球藻）、念珠藻、颤藻、发菜等。蓝藻都为单细胞生物，以细胞群形式出现时才容易看见，也就是我们通常见到的“水华”。衣藻属于绿藻，真核生物，不同于蓝藻。考试时考得比较多的是发菜和衣藻。一般考试时所说的藻类除了上述几种蓝藻大多是绿藻。注意蓝藻和绿藻的区别非常重要。蓝藻的繁殖方式有两类，一为营养繁殖，包括细胞直接分裂（即裂殖）、群体破裂和丝状体产生藻殖段等几种方法，另一种为某些蓝藻可产生内生孢子或外生孢子等，以进行无性生殖。孢子无鞭毛。目前尚未发现蓝藻有真正的有性生殖。在一些营养丰富的水体中，有些蓝藻常于夏季大量繁殖，并在水面形成一层蓝绿色蓝藻水华而有腥臭味的浮沫，称为“水华”，大规模的蓝藻爆发，被称为“绿潮”（和海洋发生的赤潮对应）。 ②细菌：“菌”字之前有“杆、弧、球等”形状修饰的，这样的菌都是细菌类的。(如硝化细菌、乳酸菌、大肠杆菌、肺炎双球菌）。 （2）真核生物：由真核细胞构成的生物。如动物(草履虫、变形虫)、植物、真菌(酵母菌、霉菌、粘菌)等。 （3）病毒：无细胞结构，由蛋白质和核酸组成，如噬菌体、艾滋病病毒、SARS病毒等，不要把它们看做原核生物。不属于生命系统，但病毒在宿主细胞中能繁殖，产生与亲代相同的子代病毒，繁殖是生物的基本特征之一，所以病毒属于生物。 例题：按要求对下列生物进行分类（只填序号）。 ①蓝藻②酵母菌③变形虫④小球藻⑤水绵⑥青霉菌⑦大肠杆菌⑧流感病毒⑨肺炎双球菌 (1)具有核膜的一组生物是（） (2)含有核糖体，但无染色体的一组生物是（） 答案(1)②③④⑤⑥(2)①⑦⑨ 解析：真核生物含核膜，真核有酵母菌（真菌）、变形虫（单细胞动物）、小球藻（低等植物）、水绵（低等植物）、青霉菌（真菌），原核有蓝藻、大肠杆菌、肺炎双球菌，流感病毒是病毒没有细胞结构。第二小题中描述的就是原核生物，因为有细胞结构的都有核糖体，但是染色体只在真核细胞的细胞核中存在。
发现相似题
与“如图是显微镜下观察到的几种细胞或组织图像(D中细胞取自猪的血液..”考查相似的试题有：
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--------------------------Page1------------------------------独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得沈阳农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的况明并表示了谢意。研究生签名：训奔弘慨一《；年6川日关于论文使用授权的说明本人完全了解沈阳农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意沈阳农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：谚伟狃慨伊‘年石月，，日剔磁辄泌时间：w；年钿‘／日--------------------------Page2------------------------------沈Rl农业大学1鼻士学位沦文脂肪细胞膜多克隆抗体对猪生长-l生能、胴体品质及肉品品质影响的研究摘要刘希颖本试验包括四部分：一是提取脂肪细胞膜蛋白，脂肪细胞膜蛋白含量的测定采用经验公式法，脂肪细胞膜蛋白sDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确定脂肪细胞膜蛋白分子量。测得猪脂肪细胞膜蛋白的浓度为2．133II】g／m1，脂肪细胞膜蛋白其分子量为15kd一“8kd。二是脂肪细胞膜蛋白多克隆抗体的制备及效价的测定，脂肪细胞膜蛋白免疫测定。结果结果：1)脂肪细胞膜蛋白抗血清效价测定条件为抗原的最佳包被浓度为1：20，酶标抗体的最佳工作浓度为1：500：血清最佳稀释度为1：20；抗原最佳包被时间为37℃包被2h；血清最佳反应时间为37℃作用lh；酶标抗体最佳作用时效价最高可达1：5120。三是24头50kg左右的猪随机分成三组，即皮下免疫组、腹腔免疫组和对照组。试验组每头猪一次性注射20m1山羊抗猪脂肪细胞膜蛋白抗血清，对照组注射等量取血清测定若干血液指标及激素的变化。结果表明，血清IGF—l在免疫后试验组与对照组无多大变化。血清胰岛素免疫后2—8周时低于对照组，但差异不显著。血清T3在免疫后两周内低于对照组，但在后期试验组高于对照组。T4在免疫后变化不大，但在48天和59天时皮下免疫组和腹腔免疫组都明显高于对照组。血清FFA在试验处理后一周内，试验组明显高于对照组，试验后期与对照组无多大变化。血清尿素氮在处理后一周皮下免疫组比对照组下降24．5％(p&O．01)；丽腹腔免疫组一直处于较低水平。免疫后血清胆固醇与甘油三酯无明显变化，脂肪细胞膜蛋白被动免疫后，皮下免疫组与腹腔免疫组体重分别增重6．21％和7．99％，料肉比分别降低6．15％和9．85％，日增重分别提高5．99％和7．78％，胴体脂肪率分别下降--------------------------Page3------------------------------摘要明脂肪细胞膜蛋白被动免疫有较好的改善胴体品质和促生长的作用。四是试验采用单因子随机设计，32头60kg左右的杂交猪随机分为4组：对照组，试验I组猪腹腔注射脂肪细胞膜蛋白抗体20ml／只，试验II组日粮添加砒啶p酸铬200g／培，试验IⅡ组日粮添加维生素E200mg／蝇。试验结束时，测定出各处理猪生产性能、屠宰性能和肉品品质。试验结果：各处理对猪的同增重、闩采食量和料肉比无显著影响，但日增重、日采食量比对照组有下降的趋势；各处理对猪的屠宰性能无显著影响，其眼肌面积和瘦肉率相近，试验I组猪的皮脂率和背膘厚比对照组分别降低4％和4％，背膘厚低于II、III组；试验T组与对照组各项肉质指标无显著差异。肌内脂肪和大理石花纹比对照组略有下降。试验I组与II、ⅡI组相比，滴水损失差异显著，分别低于II、III组26％，28％。表明脂肪细胞膜抗体在改善肉品质的作用Ⅱ更显优于砒啶酸铬和维生素E。关键词：猪；脂肪细胞膜蛋白：多克隆抗体免疫；脂肪沉积；肉品品质--------------------------Page4------------------------------沈刚农业大学博十学位论文EE![’ectsofimmunizationwithmembraneonadipocyteproteincharacteristicsaIldmeatingrowth，carcassqualitypigsAbstractLiuXiyingTheinfluenceofcharacteristicsandmeatofpiggrowth，carcassqualityiI【1Inunizedmembr
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河南农业大学 硕士学位论文转植酸酶基因乳酸菌对猪生长性能、血清生化指标和养分消化 率的影响 姓名：魏向阳 申请学位级别：硕士 专业：农业推广养殖类 指导教师：尹清强
转植酸酶基因乳酸菌对猪生长性能、血清生化指标 和养分消化率的影响 摘要 为了解决微生态制剂和植酸酶应用中存在的问题，本研究通过把植酸酶基因转入到乳酸杆菌中，这种转基因乳酸杆菌在动物食入后，在胃肠道中大量繁殖的同时，可分泌大量的植酸酶。&&&&使其具有植酸酶和益生菌的双重功效，将具有广阔的市场前景。&&&&主要结果如下： （１）转植酸酶基因乳酸杆菌对猪生产性能的影响：饲养试验选用６０日龄的三元杂交（杜×长×皮）仔猪５６头，随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ ７个组，分别为对照组、金霉素组（５００ｍｇ／ｋｇ）、溶菌酶组（５００ｍｇ／ｋｇ）、基础日粮中去除２０％的磷酸氢钙＋转植酸酶基因包埋乳酸菌（５００ｍｇ／ｋｇ）、基础日粮中去除２０％的磷酸氢钙＋天然包埋乳酸菌（５００ｍｇ／ｋｇ）、基础日粮中去除４０％的磷酸氢钙＋转植酸酶基因包埋乳酸菌（５００ｍｇ／ｋｇ）、基础日粮中去除４０％的磷酸氢钙＋植酸酶（５００ｍｇ／ｋｇ）组。&&&&７０天的饲养试验结果表明；７个组的平均日增重和饲料效率无显著差异（Ｐ＞０．０５）。&&&&其中Ｄ组与Ｂ组各项生产指标相当，其日增重和饲料效率分别比Ａ组提高１０．６％和８．７％，且优于Ｃ和Ｇ组（Ｐ＞０．０５）。&&&&同时Ｄ组的腹泻率分别比Ａ和Ｂ组降低４８．嘣（Ｐ＜０．０１）和３２．蹁（Ｐ＜０．０５），特别是在利用大肠杆菌做攻毒试验中，Ｄ组具有较强的抑菌促生产作用（Ｐ＜Ｏ．０５）。&&&&当基础日粮中去除４０％的磷酸氢钙后，其生产性能会受到一定影响，但均差异不显著． （２）转植酸酶基因乳酸杆菌对猪饲料利用率的影响：结果表明添加转植酸酶基因包埋乳酸杆菌试验组粗蛋白质的消化率比空白组、抗生素、未转植酸酶基因包埋乳酸杆菌和植酸酶试验组分别提高了１３．３８％（Ｐ＞Ｏ．０５）、６．９５％（Ｐ＞Ｏ．０５）、４０．７２％（Ｐ＜Ｏ．０１）和１８．５９％（Ｐ＜Ｏ．０５）；添加转植酸酶基因包埋乳酸杆菌试验组钙的消化率比空白组、抗生素、未转植酸酶基因包埋乳酸杆菌、植酸酶试验组分别提高了２９．７７％（Ｐ＜Ｏ．０１）、４０．７７％（Ｐ＜Ｏ．０１）、９５．３１％（Ｐ＜Ｏ．０１）、２３．３２％（Ｐ＜Ｏ．０５）；添加转植酸酶基因包埋乳酸杆菌试验组磷的消化率比空白组、抗生素、未转植酸酶基因包埋乳酸杆菌、植酸酶试验组分别提高了３０．３９％（Ｐ＜Ｏ．０１）、１８．４５％（Ｐ＜Ｏ．０５）、６４．９０％（Ｐ＜０．０１）、２２．２４％（Ｐ＜Ｏ．０５）。&&&& 另外，试验结果还表明，仔猪对添加转植酸酶基因包埋乳酸杆菌后其粗脂肪和干物质的消化率极显著高于Ｅ、Ｆ和Ｇ号料（Ｐ＜Ｏ．０１）：Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ组粪便的ｐＨ值较Ａ、Ｂ、Ｃ组偏低，粪便中氨氮含量则相对较高。&&&&以上结果表明，饲料中添加转植酸酶基因包埋乳酸杆菌能提高仔猪对粗蛋白质、粗脂肪、干物质、钙和磷等营养物质的消化率，还使粪便的ｐＨ值降低，而使氨氮含量提高（Ｐ＜０．０５），并对胃肠道内环境的具有一定的改善作用。&&&& （３）转植酸酶基因乳酸杆菌对猪血清学分析：血清学分析表明，Ｄ组能够显著提高血液中甘油三酯含量（Ｐ＜Ｏ．０５），而对其它血清学指标无显著性影响。&&&&其血清中磷的含量分别比Ａ和Ｆ组提高１０．５％ ２亟±堂垡迨塞 挂擅墼酶基固墨酸萱越猹生丝丝建：堡渣生丝指拯塑差坌澄丝室塑堂喧和７．３％，但均差异不显著。&&&& 综合结果表明，在猪的基础日粮中去除２０９６的磷酸氢钙并添加转植酸酶基因包埋乳酸菌 （５００ｍｇ／ｋｇ）具有替代抗生素和植酸酶的双重功能，使仔猪的生产性能、饲料利用率和抗病能力皆有不同程度的提高，并具有降低磷的排放和保护环境的作用，将是一种新型和理想型的饲料添加剂。&&&&关键词：转植酸酶基因乳酸杆菌；猪；生产性能：营养物质消化率；胃肠道微生物区系 ３ ＥＦＦＥＣＴ ＯＦ ＴＲＡＮＳＦｏＲⅣⅡｅＤ上彳Ｃ刀删Ｃ比Ｚ硒ＷＩＴＨ ＰＨＹＴＡＳＥ ＧＥＮＥ ＯＮ Ｓ、ＭＮＥ ＰＲｏＤＵＣＴＩＯＮ 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ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｒｏｍｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｒｏｕｐ＋ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ（５００ｍｇ／ｋｇ）；ｇｒｏｕｐ Ｑ ４０％ｄｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｒｏｕｐ＋ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｐｈｙｔａｓｅ（５００ｍｇ＆ｇ）．Ｔｈｅｆｅｅｄｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ７０ ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｌｙ ｇａｉｎ（ＡＤＧ）ａｎｄ ｔｈｅｇｒｉａｎ ｆｅｅｄ ｒａｔｉｏ（Ｇ／Ｆ）ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｍｏｎｇ ７ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞０．０５），ｅｖｅｎ ｔｈｏｕｇｈＡＤＧ ａｎｄ Ｇ／Ｆ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ ｗｅｒｅ １ ０．６％ａｎｄ ８．７％ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ．Ｔｈｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｒａｔｅｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ Ｗａｓ ４８．０％ａｎｄ ３２．８％ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ａ ａｎｄ Ｂ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），Ｇｒｏｕｐ Ｄ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｐｒｅｖｅｎｔ Ｅ．ｃｏｌｉ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ａｎｉｍａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｐｉｇｓｗｅｒｅ ｃｈａｌａｎｇｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｐ＜０．０５），ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ．Ａｆｔｅｒ ４０％ｄｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｗａｓ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｄｉｅｔ，ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｗａｓ ｗｏｒｓｅ，ｂｕｔ ４亟±堂焦迨客 整揎醛酶基垦墨墼萱盟猪生篮世缝！查渣生丝指拯塑差坌澧丝奎鲍鬟喧ｉｔ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）． （２）Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ埘ｍ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｏｎ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆｐｉｇｌｅｔｓ：Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ １３．３８％（Ｐ＞Ｏ．０５），６．９５％（Ｐ＞０．０５），４０．７２％（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ １ ８．５９％（Ｐ＜０．０５）ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｎａｔｕｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｒｏｕｐｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃａｌｃｉｕｍ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｍ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ２９．７７％（Ｐ＜０．０１），４０．７７％（Ｐ＜Ｏ．０１），９５．３１％（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ２３．３２％（Ｐ＜０．０５）ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｎａｔｕｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｒｏｕｐｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ａｄｄｅｄ ｗｉ廿ｌｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ Ｗｅｌ’ｅ ３０．３９％（Ｐ＜０．０１），１ ８．４５％（Ｐ＜０．０５），６４．９０％（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ２２．２４％（Ｐ＜０．０５）ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｎａｔｕｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｒｏｕｐｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｅｎｔｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｉｇｌｅｔｓ Ｃａｎ ｂｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｍ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ． 一Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｌｓｏ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｆａｔ ａｎｄ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｉｎ ｇｒｏｕｐＤ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｍｏｒｅ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｔｈａｎｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ｅ，Ｆ ａｎｄ Ｇ（Ｐ＜Ｏ．ｏＤ．Ｔｈｅ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ｄ，Ｅ，Ｆ ａｎｄ Ｇ Ｗａｓ ｌｏｗｅｒｅｒ ｔｈａｎｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ａ，Ｂ ａｎｄ Ｃ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ａｍｍｏｎｉａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆａｅｃｅｓ Ｗａｓ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｇｒｏｕｐ Ａ，Ｂ ａｎｄ Ｃ．Ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｈａｄ ｓｏｍｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｆａｔ ａｎｄ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｇａｓｔｒｏ－ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｓ ｗｅｌｌ． （３）Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｏｎ ｐｌａｓｍａ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓ ｏｆ ｇｒｏｗｉｎｇ－ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ ｐｉｇｓ：Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ（Ｐ＜Ｏ．０５），ａｎｄ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎｏｔｈｅｒ ｐｌａｓｍａ ｉｎｄｅｘｅｓ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔａｓｅ ｇｅｎｅ；Ｐｉｇ；Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ；Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ；Ｐｌａｓｍａ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ５ 缩写符号简写 英文 中文ｍ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｄａ 乳酸杆菌洲 ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｍｉｎｇ ｕｎｉｔ 菌落形成单元数ｄ ｄａｙ 天ｈ ｈｏｕｒ 小时№ ｎｉｔｒｏｇｉｄｅ ｏｘｉｄｅ 一氧化氮ｇ ｇｒａｍ 克 ｍｉｌｌｉｇｒａｍ 毫克啷鹏 ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｌｙ ｇａｉｎ 平均日增重胼 ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｌｙ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ 平均日采食量№ ｆｅｅｄ ｇｄａｎ ｒａｔｉｏ 料重比簖 ｇｄａｎ ｆｅｅｄ ｒａｔｉｏ 肉料比河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属性 学位论 转植酸酶基因乳酸菌对猪的生长性能、 学位 硕士 文题目 血清生化指标和养分消化率的影响 级别 学生 学科 导师 魏向阳 农业推广 尹清强 姓名 专业 姓名 学位论文 否 如需保密，解密时间 年月 日 是否保密 独创性声明 本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中 特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料，指导教师对此进行了审定。&&&&与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。&&&& 研究生签名：音嗵∞扯／伽导师签名：圹 日期：撕湖哪 ７‖够 日％够易口日 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校确权保存提交论文的印 刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。&&&&本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同 媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。&&&& 本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的有关规定，在毕业离 开河南农业大学后，就在校期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单 位为河南农业大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农 业大学所有，否则，承担相应的法律责任。&&&& 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。&&&& ｉ－Ｆ西≯ｊ 碱蝼各 日期，埘年ｆ朔ｔｏｌｌ ．刷磁轹彬?张艚鹤：蹄辫 日期： （１年，１，月ｆ ｏ日 日期：山’辫》明阳 ， 引 言 美国食品与药物管理局（ＦＤＡ）于上世纪５０年代首次批准抗生素可用作饲料添加剂，各国先后进行了抗生素的饲养试验，并大规模用于生产，不可否认，抗生素用作促生长类添加剂对动物的生长起着积极的作用。&&&&抗生素是通过杀灭和抑制肠道内微生物，减少微生物的总群数量，来促进营养物质的吸收。&&&&它同时把肠道内有益菌群也杀灭或抑制，破坏了菌群的生态平衡． 随着时间的推移和科学的进步，人们意识到抗生素类促生长饲料添加剂的使用，会导致病源微生物抗药性增加，并通过食物链对人类健康造成严重的负面影响，每年世界各国都有数量不等的病人死于微生物的抗药性。&&&&因此一些发达国家率先在饲料中禁用和限用抗生素等抗菌药物，特别是欧盟２００６年率先禁用抗生素饲料添加剂。&&&&在我国，抗生素等的残留问题一直是限制我国畜产品出口的瓶颈，尤其是我国加入盯Ｏ后，绿色畜产品的生产愈显重要，因此抗生素替代品的寻找迫在眉睫。&&&& 乳酸菌是应用最早、最广泛的益生菌，国外的益生菌产品７０％以上以乳酸菌为主．益生菌是一类通过调控动物肠道微生物区系的平衡而有效地促进宿主动物健康和生长的微生物活菌剂。&&&&当生理、环境及饲料等条件变更时，幼畜常因肠道中病原菌的迅速繁殖而造成肠道性疾病如腹泻发生．益生菌的应用可通过微生物拮抗作用，竞争性地排拆病原菌并通过刺激宿主的免疫系统恢复肠道微生物区系的平衡，从而达到防病治病，促进宿主生长的目的，即益生菌的占位理论。&&&& 用作益生菌的微生物通常是来自动物自身肠道或来自其它生态环境的有益微生物，对动物和人无毒副作用，因此被认为是一类具有应用前景的抗生素替代品，这方面的研究也成为当今国际上畜牧兽医学科的一个前沿研究领域。&&&&而乳酸菌在人和动物体内是长期定植的正常菌群，更是消化道的优势菌群，自Ｍｅｔｃｈｉｋｏｆｆ指出乳酸菌与人类健康的关系后，有关乳酸菌对人类及其他动物的益生作用的研究就未曾停止过。&&&& 乳酸茵的益生作用主要表现为：乳酸菌通过与致病菌竞争肠上细胞粘膜附位点和产生多种抑菌物质，抑制病菌的粘附和生长，从而防治肠道感染；诱导体内特异和非特异性免疫，降低血清胆固醇水平，改善乳糖代谢等。&&&& 乳酸菌是自古以来就被人类作为食品微生物利用的一大类菌，广泛应用于发酵乳制品，医药、轻工业和畜牧业等领域。&&&&较常用的乳酸菌有双歧杆菌、乳杆菌和链球菌等。&&&&由于乳杆菌和链球菌生长的营养条件要求高，无芽孢，而双歧杆菌又是严格的厌氧菌，因而在正常条件下乳酸菌的培养增殖难度高、对外抵抗力差、难以制备和长期保存。&&&&因此为了提高乳酸菌应用的方便性与时效性，可采用不同的包埋法对乳酸菌进行固定化，将菌种均匀地包埋在水不溶性载体中，使菌种细胞中的酶 ｒ’１处于原始状态，菌种活力强而耐久，为乳酸菌的生产、运输、储藏和大面积应用奠定基础…。&&&& 钙和磷是畜禽生长发育必不可少的矿物质，必须在饲料中添加以满足动物的营养需求。&&&&以植物性饲料为主组成的畜禽日粮中含有丰富的总磷（ＴＰ），ＴＰ中大部分以植酸磷的形式存在，但由于畜禽体内缺乏植酸酶（Ｐｈｙｔａｓｅ）无法使日粮中的植酸磷转化为有效磷（ＡＰ），因而畜禽只能吸收利用 ６亟±堂焦迨室 整揎酸酶羹固塾墼萱数猹生篮挂篚：查渲生丝遁握塑差坌澧丝奎鳆鬟喧日粮中ＴＰ的３３％（ＮＲＣ，１９９４）．磷在配合饲料中添加比例较大且价格较贵Ⅲ，美国肯塔基大学经过 ｒｄｌ十年研究得出以下结论：猪、鸡只能利用玉米中磷的１０％－２０％，豆粕中２５％－３５％”。&&&&．因此为满足畜禽对磷的营养需求，生产上不得不在日粮中添加无机磷酸盐，常用磷酸氢钙（ＤｃＰ）和骨粉。&&&&使用ＤＣＰ带来了四个方面的问题：①以磷矿石为原料生产Ｉ）ＣＰ的过程需要严格的脱氟工艺，许多ＤＣＰ产品含氟量超标而引起畜禽中毒，造成经济损失；②ＤＣＰ质量良莠不齐，且价格高，增加了饲料成本：◎大量使用ＤＣＰ不仅是我国有限的无机磷资源更趋匮乏，而且粪磷量的增加而加剧了对环境的污染。&&&&骨粉虽避免了猪氟中毒的现象，但易被病原菌污染而成为疾病传播的媒介“。&&&&；④植酸在消化道内起抗营养作用．鉴此，提高日粮中植酸磷的利用率，减少无机磷的用量，降低磷对环境的污染已成为畜禽生产中亟待解决的问题。&&&& 植酸酶是一种能降解植物饲料中植酸及其盐类的磷酸酯酶，它能将植酸分解为肌醇和磷酸晡’。&&&&这不仅降低了植酸的抗营养作用，而且还可充分利用从植酸中释放出的磷源，从而降低动物日粮中磷酸盐的添加量，减少磷的排放量，达到降低磷对环境污染的目的。&&&& 转植酸酶基因包埋乳酸杆菌是一种具有植酸酶和包埋乳酸杆菌部分特点的乳酸菌。&&&&本试验研究在于用转植酸酶基因包埋乳酸杆菌和植酸酶在仔猪营养物质消化率方面进行比较，以及转植酸酶基因包埋乳酸杆菌在不同磷酸氢钙水平下对仔猪营养物质消化率的影响，为转植酸酶基因包埋乳酸杆菌替代植酸酶及其在仔猪生产中的应用提供科学依据。&&&& 查阅近年来的研究报道，乳酸菌用作益生茵对提高动物生长性能和健康水平有促进作用占大部分，但变异范围较大。&&&&不同的日龄，不同的益生菌，不同的饲喂方式等都是造成变异大的因素。&&&&为了进一步明晰乳酸菌对猪生长性能和健康水平的影响，我们设计了抗生素组、溶菌酶组，包埋转基因乳酸菌组和未转基因乳酸菌组，同时还设计了包埋转基因乳酸菌和植酸酶替代一部分磷酸氢钙的两个实验组。&&&& ７ 文献综述１．乳酸菌益生作用的研究 １．１乳酸菌的发现和定义 １．１．１乳酸菌的发现 巴基德（Ｌｏｕｉｓ Ｐａｓｔｅｕｒ，１８２２．１８９５），法国微生物学家，化学家，近代微生物学的奠基人。&&&&１８５７年，３５岁的巴斯德在研究乳酸发酵过程中，发现了乳酸菌。&&&&同年８月他发表了著名的论文‘关于乳酸发酵的记录》。&&&&文中提出，微生物代谢活动是发酵本质的新理论，“没有酵素就没有发酵，没有酵素就没有发酵的产物”，这成为微生物学界公认的经典论文。&&&& １８９０年蒂赛（Ｈ．Ｔｉｓｓｅｒ）在巴黎波斯克特（Ｂｏｕｃｉｃａｕｔ）儿童医院Ｇｒａｕｃｈｅ教授的指导下，开展了“对婴幼儿消化不良病因的研究”。&&&&在Ｚｕｂｅｒ与Ｖｄｌｌｏｎ的帮助下进行了１０年艰苦的研究，终于在１８９９年从母乳喂养儿的正常大便内发现了双岐杆菌。&&&&１８９９年１２月２日在巴黎生物学会学术会议上发表了‘肠道菌群――乳幼儿的正常与病态》的论文． ． 按照发酵碳水化合物产生大量乳酸的标准，乳酸菌应该包括细菌、霉菌、酵母菌。&&&&自从１８７５年巴斯德发现乳酸菌以来经过利斯特（Ｌｉｓｔｅｒ）、蒂赛（Ｈ．１ｒｉｓｓ盯）、梅契民科夫（ＥｌｉｅＭｅｔｃｈｉｋｏｆｆ）、莫罗（Ｅ．Ｍｏｒｏ）、舆拉．詹森（Ｏｒｌａ－Ｊｅｎｓｅｎ）、蒂策勒（Ｒ．Ｐ．Ｔｉｔｔｓｌｅｒ）、罗高沙（Ｒｏｇｏｓａ）、沙普（Ｓｈａｒｐｅ）、光岗知足及代田稔等各国的微生物学家的不懈探索和研究，经网络（ｗｗｗ．Ｃｉｃｔ．ｃｏｒｎ）和权威的‘国际系统与进化微生物学》杂志（ＩＪＳＥＭ）上最新检索，１３０年来已发现的乳酸菌有４３个属，包括３７３个种和亚种”１．１．１．２乳酸菌定义 乳酸菌是能从葡萄糖（或可利用的碳水化合物）发酵产生大量乳酸的一群细菌。&&&&乳酸菌只是一种习惯叫法，并不是微生物分类学上的名称。&&&&细菌分类有数百个属（ｇｅｎｕｓ），很难把能否产生大量乳酸作为细菌的分类标准。&&&&但是，乳酸菌的习惯提法已被广大学者和民众接受。&&&&这里给出的乳酸菌定义应该是：乳酸菌是一类能在可利用的碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌”” 乳酸菌细胞形态有球状、类球状，短杆或杆状。&&&& 乳酸茵细胞染色是革兰代阳性、阴性，也有具阳性细胞壁型的阴性菌。&&&& 乳酸菌细胞内有芽孢或无芽孢。&&&& 乳酸菌生理需求有好氧、厌氧或兼性厌氧。&&&& 乳酸菌发酵方式有同型发酵或异型发酵。&&&& 乳酸菌发酵代谢产物有以乳酸为唯一或主要产物，也有乳酸、琥珀酸、乙酸等的混合产物。&&&& Ｒ亟±堂僮迨塞 技蕉酸酶薹旦墨醒萱盟猹生篮焦缝！查渣生业趱握塑羞坌澧丝室鲤整喧 乳酸菌ＤＮＡ的（Ｇ＋ｃ）含量为３２％－６７％（摩尔分数）。&&&& 乳酸菌的生境十分复杂，包括腐生、寄生．绝大多数乳酸菌是食品，医药保健、工业、农业、医学和科研上的重要用菌。&&&&对动物有益的乳酸菌主要是来自动物肠道内的乳酸菌。&&&&１．２动物体中的乳酸菌 乳酸菌主要存在于动物消化道中。&&&&其次是动物的体表。&&&&猪胃、大肠、鸡嗦囊、小肠、大肠中，检出乳杆菌１０９／ｍ１，琏球菌１０４－１０７／ｍ１。&&&&Ｓｍｉｔｈ（１９６５）、Ｃｏｎｔｒｃｐｏｉｓ和Ｇｏｕｅｔ（１９７３）证实了在小牛胃和上部肠道中乳酸菌占优势。&&&&从牛乳喂养的小牛胃液中分离出乳酸乳杆菌（Ｌ．１ａｃｔｉｓ）和发酵乳杆菌（Ｌ．ｆｖｒｍｃｎｔｕｍ），同时从小牛的干燥胃中分离出乳酸杆菌。&&&&初生小猪的胃粘膜上（包括十二指肠）有嗜酸乳杆菌（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、发酵乳杆菌、唾液乳杆菌（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ）。&&&&１９８９年，Ｔａｎｎｏｃｋ利用标定生物素的质粒探针发现，在小鼠前胃与上皮细胞结合在一起的是德氏乳酸杆菌 （Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）和Ｌ．ｒｖｕｔｅｒｉ；猪小肠内是嗜酸乳杆菌（Ｌ－ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）和Ｌ．ｒｅｕｔｃｒｉ；小鸡胃肠道中数 ｒ’ｄ１量最多的同型乳酸发酵菌是唾液乳杆菌和嗜酸乳杆菌“’ｏ’。&&&&１．３乳酸菌的微生态学 乳酸菌是动物正常微生物群或区系（ｎｏｒａｎａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ）的组成部分。&&&&乳酸菌的生态与正常微生物群的生态是密切相联系的，是局部与整体的关系。&&&&乳酸菌的生态包括乳酸菌自身的生态和宿主相互关系的生态，正常微生物群是宿主的组成部分，是宿主不可缺少的一个生理系统。&&&&应该把正常微生物群列为动物微生态系，作为第１３个生理系统。&&&&２００２年，美国微生物学家田纳西州大学Ｓａｖａｇｅ教授在日本国际肠内菌会议上郑重宣布：正常微生物群在生态学上应当被看作是宿主的一个器官或一个系统。&&&&人或动物都不能脱离正常微生物群的存在和作用而独立存在。&&&&我们必须把包括乳酸菌在 ｒ－１１内的正常微生物群看作是宿主的生理结构的一部分，是“一体化”统一性的生态单元”。&&&&．１．３．１细胞通讯 生命活动，根本的保障是“三流运转”即信息流，物质流和能量流运转。&&&&“三流运转”的核心是信息流运转。&&&&信息流的正常传递是靠细胞通讯（Ｃｅｌｌ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。&&&&中国著名生物学家贝时璋教授早就指出。&&&&生命活动无非是自然界的三个量综合运动的表现，即物质、能量和信息在生命系统中时时刻刻地变化。&&&&这三个量有秩序，有组织的运动是生命的基础。&&&&信息流起着调节、控制能量运动的作用。&&&&信息在物质和能量代谢运动中起主导作用。&&&&１００多年前法国生理学家Ｃｌａｕｄｅ Ｂｅｒｎａｒｄ就对生理参数的稳定性有深刻的理解，他认为“内环境的恒定性是有机独立和自然生存的基本条件”，如果细胞不能进行调节、控制，恢复平衡，保持恒定，生物体就不能生存的基本条件，如果细胞不能进行调节，控制，恢复平衡，保持恒定，生物体就不能生存下去。&&&&美国生理学家ＣａｎｎｏｎＷ．Ｂ．教授１９２９年提出生物体内的“恒稳态”（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）的概念。&&&&生物体不断通过复杂的调：锚过程，使物质和能 ９亟±兰焦诠室 整焦酸酶墨固墨酸萱型猹垒篮丝筐：查渲生丝丝拯麴羞坌逍丝奎的甏喧量的运转能在最佳的运态下进行，使生命运动处于最佳状态，这均有赖于正常的，准确的信息传递。&&&&信息传递是要通过细胞通讯来完成的‘副．１．３．１．１微生物细.
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