能否用ELISA法检测kras基因突变检测方法吗

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【求助】能否用ELISA法检测基因突变吗?
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这个帖子发布于6年零188天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问能用ELISA(酶连接免疫吸附)法检测基因突变吗?感激不尽!
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ELISA-based Ki-ras gene mutation analyses in pancreatic and cholangiocarcinoma cells and tissues.AbstractDetection of Ki-ras mutations is one possible modality for diagnosis of human neoplasms, particularly of the gastrointestinal tract. Little is known about the protein expression levels of ras p21. Here we show a semi-quantitative analysis of mutated ras p21 in protein extracts from pancreatic and cholangiocarcinoma cell lines and from tumor tissues. Comparison with DNA sequencing data confirmed the specificity of the ELISA-mediated mutation analysis. Epithelial cell content from stroma rich tissues was estimated by measuring the CK 8, 18 and 19 concentration in protein extracts from tissue samples comparing this with the average keratin content in extracts from 21 GI-carcinoma cell lines. The combination of both tests allowed the analysis of the ras p21 content of tissues with as little as 5% tumor cell content.
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呵呵,这个ELISA检测基因突变比较意思。刚刚看了几篇文章,跟楼主分享一下。文章:Detection of four b-thalassemia point mutations in Iranians using a PCR-ELISA genotyping system.检测图中四个位置的基因突变。这个检测方法的四要素:a,DIG labed PCR products
b,5’biotinylated oligos (probe)
c,streptavidin-coated microtiter
d,HRP conjugate anti-digoxigenin antibody
。 检测方法的本质是基于:a,allele-specific oligonucleotide hybridization
b,biotin-streptavidin system
c,Enzyme-linked immunosorbent assayFig 1 - Detection of four b-thalassemia point mutations in Iranians using a PCR-ELISA genotyping system.文章Molecular Detection of Galactosemia Mutations by PCR-ELISA 有step by step的protocol。Fig 2 - Molecular Detection of Galactosemia Mutations by PCR-ELISAPCR-ELISA的原理用于分子诊断方面:TrimGen公司的KRAS Mutation Detection Kit在96孔板里一次能实现7/8个KRAS突变位点的检测。另外基于相同原理的技术还有PPT-ELISA。这是用来筛截短突变的,相关文章见:1,Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA .
2,An ELISA-based high throughput protein truncation test for inherited breast cancer .Fig 3 - Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISAFig 4 - An ELISA-based high throughput protein truncation test for inherited breast cancer
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shilei5794749 edited on
Fig2 - Molecular Detection of Galactosemia Mutations by PCR-ELISA
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Fig3 - Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA
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Fig4 - An ELISA-based high throughput protein truncation test for inherited breast cancer
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非常感谢!嘿嘿,以前未接触过,刚才又去查了一下PCR-ELISA,终于有点头绪;多谢前辈!
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不好意思啊,挠头;还待求助前辈,您有那两篇文章的全文吗?刚才搜了一下,没找到...
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关于丁香园肺癌外周血检测可指导个体化治疗
肿瘤是基因组疾病,故单一基因检测难以满足指导个体化治疗的需要。近期多项研究利用二代测序技术分析了血浆游离DNA基因组、外显子组改变与治疗疗效的关系。循环肿瘤细胞是有关外周血分子标志物研究的另一焦点。其作为完整的、无损伤的肿瘤细胞,能反映肿瘤的转移、耐药、进展等过程。在该研究中,研究人员比较了循环肿瘤细胞中基于血液KRAS突变分析和循环血浆DNA用于预测肺癌原发性肿瘤突变这两种方法来替代组织活检的可行性。研究人员通过利用cobas4800(罗氏)等位基因特异性PCR技术检测肺癌患者KRAS突变状态,该技术的原理是在基因组的某些非编码区,一些短的序列可重复多次,并按照孟德尔遗传法则呈共显性遗传。这种等位基因的多态性常达十个以上,因此这种遗传标记带有很大的信息量。除了等位基因的遗传多态性分析外,还应用于点突变的检测。通常只需采集病人9ml血标本就可以检测,利用ScreenCell MB装置捕获循环肿瘤细胞,DNA通过人类组织和细胞DNA提取试剂盒从循环肿瘤细胞中提取出。通过自定义设计的高分辨率溶解法检测KRAS基因突变,并通过QIAGEN试剂盒进行焦磷酸测序。91例接受肺癌切除手术患者中,通过福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)进行组织活检的18例,通过外周血游离DNA检测的17例,循环肿瘤细胞检测的47例。研究发现,以血液为基础检测KRAS突变试验中,外周血游离DNA检测的敏感度和特异度分别为81%、97%;循环肿瘤细胞检测的敏感度和特异度分别为86%、38%。该研究结果表明,以血液为基础的突变试验用于预测肺癌原发性肿瘤基因突变是可行的。就肿瘤异质性而言,与循环肿瘤细胞相比,循环肿瘤DNA(ctDNA)对肿瘤负荷的影响更大,并且更密切说明了肿瘤的突变。
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血小板因子4ELISA 检测试剂盒诞生
  摘要:近日,上海交通大学冯立新研究小组报道一个全新的体外诱导精子和卵子的方法。冯立新研究员采用的方法可从雄性胚胎干细胞(XY染色体)在体外同时生成游动的精子和卵子。更为重要的是他们的研究进一步阐明了从胚胎干细胞生成精子和卵子分子机理,是这一领域研究的重大突破。    之前,科学家们已经证明了胚胎干细胞(ESC)能在体外分化出胚性生殖细胞,冯立新研究小组体外诱导分化并不经过类胚体形成,通过利用转基因技术直接从胚胎干细胞转化为生殖细胞。Dazl基因是表达生殖细胞特异RNA结合蛋白的基因,人和多种动物的Dazl基因是精子发生的重要调控因子,Dazl基因突变或表达缺乏将导致精子发生过程减数分裂障碍和雄性不育。    研究者通过Dazl基因的异位表达,最终在体外将小鼠胚胎干细胞同时诱导出了游动的精子和卵子。此外,Dazl基因的瞬时过量表达使Nanog受到抑制,但是小鼠胚胎干细胞核抗原被诱导成生殖细胞。Dazl基因敲低导致了生殖细胞部分标记物基因表达降低,比如说Stella,MVH和Prdm1等。冯立新研究小组不仅证明了Dazl基因是控制生殖细胞分化的一个主要控制基因,而且通过Dazl基因异位表达诱导出小鼠胚胎干细胞在体外分化成了生殖细胞精子和卵子。    日,斯坦福大学人类胚胎干细胞及再生组织医学研究小组KehkooiKee等在Nature发表了他们最新的研究成果,研究者在实验室通过人体干细胞制造出人工精子和卵子,这一研究成果进一步证实了冯立新研究团队所做的工作的前沿性和重要性,同时也表明我国在体外诱导干细胞生成精子和卵子研究处于国际领先地位。
(来源:中国化工仪器网)
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