液相色谱（LC）
主题：【求助】请教 二氯甲烷作为流动相的注意事项
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tianyu9700
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发表于： 20:19:46
做番茄红素 标准上有用到二氯甲烷，会不会对柱子造成大的伤害 有没有人用过二氯甲烷做流动相，比例是：甲醇+乙腈+二氯甲烷=20+75+5，这样比例对柱子伤害大吗 有没有其他溶剂可以代替二氯甲烷？
〓猪哥哥〓
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对柱子是有些损害的，不过按照标准做也没办法，加根预柱。
zhangxgzsu
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ID：zhangxgzsu
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原文由 tianyu9700(tianyu9700) 发表:做番茄红素 标准上有用到二氯甲烷，会不会对柱子造成大的伤害 有没有人用过二氯甲烷做流动相，比例是：甲醇+乙腈+二氯甲烷=20+75+5，这样比例对柱子伤害大吗 有没有其他溶剂可以代替二氯甲烷？楼主做出来没有，最近刚开始做，发现按照方法，标样不出锋？
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二氯甲烷只在正相流动相中用到。
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二氯甲烷作为反相色谱柱的再生溶剂之一，用于以上的实验比例才5%，不会有影响，只是平时反应一直都是甲醇乙腈才感觉很别扭吧，注意清洗就行了反向没用过二氯甲烷，正向倒用过& 经验：C18柱的使用心得和注意事项及优化条件
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经验：C18柱的使用心得和注意事项及优化条件
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经验：C18柱的使用心得和注意事项及优化条件
　　正相、反相和极性胶联柱使用手册
　　此色谱柱填充的是改性硅胶材料。向柱内导入碱性溶剂(pH&7.0)或酸性溶剂(pH&2.0)会导致柱子损坏。在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。未正确地使用不能享受保修待遇。
　　此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。
　　反相(C8，C18，ODS，RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。
　　极性胶联型(APS，diol，CN和NH2)依照应用目的，可以用于正相和反相条件。建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将反相柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。
　　色谱柱老化
　　在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
　　A.在反相条件下老化
　　要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂)，建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
　　B.在正相条件下老化
　　柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
　　C.对于极性键合柱的特殊说明
　　由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
　　洗脱液
　　注意第1节和第2节。一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液，这是由于它们会改变固定相的性质。极性键合柱最好使用在3到5 之间。在使用以前，洗脱液要进行脱气，以及使用0.5微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题。
　　一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵塞，柱压会升高到无法接受的水平。
　　流量和压力
　　柱内径(毫米) 流速 (ml/min)
　　最佳 最高
　　2.0 0.2 1.0
　　3.0 0.4 2.0
　　4.6 1.0 4.0
　　10.0 4.7 18.0
　　注意：最高压力：不锈钢柱：4500玻璃柱：3000psi
　　增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
　　如果你想更换柱子，要降低流量至0，等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
　　拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
　　高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
　　使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
　　样品准备
　　保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱，不管是来自流动相还是样品。特别地，要禁止导入颗粒杂质。这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
　　保护柱
　　一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。对于ChromSep 柱我们建议使用正确型号的ChromSep 保护柱。这个柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。对于常用不锈钢柱，我们建议使用相同型号的Chromguard High Efficiency(高效)柱(10X3.0mm) 或High Capacity(高容量)柱(50X3.0mm)。
　　进样量和浓度
　　柱子的最大载样量取决于：柱子的型号，使用的条件和样品的类型。很难给出一个一般的指示。对于进样体积的建议则比较容易(见表中的典型值)。
　　注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。
　　柱尺寸(长度*内径) 最大样品体积
　　250×2.0mm ±10μl
　　200×3.0mm ±15μl
　　250×4.6mm ±50μl
　　250×10.0mm ±250μl
　　温度HPLC柱最好在柱温箱中使用。重复性取决于温度控制。最佳的温度与特定的应用有关。温度影响洗脱液流动的线速度。在使用ChromSep玻璃柱的时候，一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
　　一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。 贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长。
　　柱效损失的可能原因
　　额外的峰展宽。当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显。要保证管路的长度和内径都保持最小。检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
　　洗脱的平衡时间不够。
　　不正确柱温。
　　不正确的修正浓度。
　　床压缩。使用了过大的洗脱流速。将柱子反向，使用低流速。
　　柱效丧失和/或高背压
　　颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上(它们都会使背压增高)。如果柱压增高了，将柱子与进样器断开，运行泵，以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染(样品、洗脱液和系统)。倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子。如果这样不能解决问题，更换进口过滤器或者筛板。
　　微生物在洗脱液中生长。倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。更换进口过滤器或者筛板。
　　有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。再生柱子(见第12节)。
　　再生反相色谱柱
　　首先倒转柱子。以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。
　　再生硅胶柱
　　首先倒转柱子。以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷(或己烷)—乙酸乙酯—干燥的异辛烷(或己烷)进行。柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
　　再生极性键合柱
　　取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。
　　注意：绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相发生反应。四氢呋喃作为替代可以使用。
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关于C18柱的维护问题
领域：气相色谱
关于C18柱的维护问题
悬赏：10枚色谱币　　回答：2　　浏览：6163　　提问时间： 9:01:56
据WATERS的资料说c18的柱子可以按以下程序冲洗:甲醇－二氯甲烷－甲醇－水.我想反冲柱子，不知能不能这样冲?还有我的流动相是含缓冲盐的。
后即可回答该问题或发表自己的观点和看法
级别：色谱小学生
领域：中医中药
这类色谱柱不建议反冲，容易将柱头的固定相冲塌陷。对色谱柱伤害比较大
另外含缓冲盐的流动相
清洗时最好先用含水多些的有机溶剂（如2：8的甲醇：水）
再用含有机溶剂多的水溶液，如8：2的甲醇：水
最后用纯有机溶剂洗涤。
关于清洗时间，你可以打开检测器验证一下，基线走直就可以了
试剂的纯度就不说了，你懂的
回答时间： 0:41:58
该答案包含政治、人身攻击内容
该答案包含非法内容(黄、赌、毒等)
该答案包含广告信息
该答案属于其他行业范畴，不应该在化学问吧出现
以上都不是，我自己填写检举内容：
发布信息前请先登录。
*每检举成功一个答案，得2枚色谱币
发布信息前请先登录。
被采纳答案
级别：色谱高中生
领域：液相色谱
液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用： 一、反相色谱柱的选择 1．柱子的PH值使用范围 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子。 2．填料的端基封尾（或称封口） 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。 3．戴安公司Acclaim柱子介绍―极性封尾C16固定相柱 戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）
二、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理 a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45&m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点： a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 b、流动相与样品不产生化学反应 c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： a．含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。 b．流动相要求使用0.45&m滤膜过滤，除去微粒杂质。 c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
三．色谱柱的维护
1.色谱柱的平衡 　反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤： a.平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）b.如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2．色谱柱的再生 长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
建议用来冲洗柱子的溶剂体积 　　色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积 　　125-4mm1.6ml30ml 　　250-4mm3.2ml60ml 　　250-10mm20ml400ml
选择再生方法：　　极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水　　非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水
注意： a.在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 b.0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
3.色谱柱的维护a．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度） b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 c．避免流动相组成及极性的剧烈变化 d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理 e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中 f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
回答时间： 9:57:20
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以上都不是，我自己填写检举内容：
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