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蛋白异源表达，条带大小不对啊
求高人指点，最近在做蛋白表达，枯草中的基因在大肠杆菌中表达。蛋白电泳明显有特异性条带，但是大小不对，差了将近10kD，测序也是正确的，而且表达出的蛋白是有酶活的。载体用的是pet30a，求指导！！！
问题是我做的融合蛋白，在目的基因后面加了质粒上的his-tag，然后纯化不出来。补充一下，蛋白电泳上的特异性条带要比目的蛋白小，然后我就想是不是蛋白在大肠中被切割了后面一部分。
我没说清楚，蛋白电泳的特异性条带比目的蛋白小的，我的蛋白后面也有his-tag的，但是纯化不出来
嗯，但是我觉得应该是蛋白后面的部分被切割了，因为his-tag在后面，但是我纯不出来，有没有这种情况？
这个你要分析好你连接载体的片段是否发生突变，突变会影响蛋白质的结果和折叠，加组氨酸标签一般都是用镍住纯化，你可以把条件摸索一下，NTA-0,NTA-20，NTA-60,80,100,300.500分别洗脱一下看看效果，据文献说，可能蛋白折叠的关系会把组氨酸标签折叠在里面，遇到这种情况估计要换载体试试，至于蛋白切割，我现在关注的比较少，确实有这种情况发生，一般会出现两条蛋白条带，你可以坐下非变性蛋白质电泳，和酶活力染色。
如果测序正确，一般不会有你说的情况。用his抗体做一下western，确定目标条带是否还带着tag。
应该是被截断了，我换个表达菌株试试先。。。
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求助蛋白异源表达的操作过程
大家好，我不是生物化学和分子生物学专业的，想求助一个问题，不知道有没有走错板块。
& & 我用计算机模拟获得了一个脂肪酶，知道了氨基酸序列，现在想把它在大肠杆菌中表达出来，不知道具体错做步骤是怎么做的。希望大神施以援手，不胜感激。:hand:
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异源蛋白表达问题
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&&异源蛋白表达问题
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